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生物化学杂志。1999年2月1日；337（第3部分）：513–521。
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PMID：9895296

蛋白激酶Calpha C2结构域钙结合位点的测定对其向质膜的转运至关重要。

科尔巴兰·加西亚,J A罗德里格斯-阿尔法罗、和乔·戈梅斯·费尔南德斯
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摘要

C2结构域是存在于各种信号转导蛋白中的保守蛋白模块。为了研究蛋白激酶Calpha（PKCalpha）C2结构域的功能，我们从大鼠PKCalphaPKC-C2中生成了一个重组谷胱甘肽S-转移酶融合C2结构域。我们发现PKC-C2与含负电荷磷脂酰丝氨酸的脂质囊泡具有高亲和力（0.6μM时的半最大结合）。当表达到COS和HeLa细胞中时，大多数PKC-C2出现在质膜上，而当细胞通过与EGTA和离子载体孵育耗尽Ca2+时，C2结构域优先定位在细胞液中。体内进行Ca2+滴定，临界Ca2+浓度范围为0.1至0.32μM。我们还通过定点诱变鉴定了对Ca2+相互作用至关重要的三个天冬氨酸残基，即Asp-187、Asp-246和Asp-248。将这些残基突变为天冬酰胺以消除其负电荷，导致一个结构域表达为与野生型蛋白质相同的延伸，该结构域在体外既不能与Ca2+也不能与磷脂酰丝氨酸相互作用。免疫荧光染色和亚细胞分离表明，这些突变体在COS和HeLa细胞中的过度表达也表明它们不能定位在质膜上。这些结果表明，Ca2+结合位点可能参与促进体内PKCalpha C2结构域与质膜的相互作用。

全文

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选定的引用

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文章来自生物化学杂志由以下人员提供生物化学学会