主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR20972]抗肿瘤坏死因子α 适用于:WB、ICC/IF、IP、Flow Cyt(Intra) 敲除已验证 反应对象:老鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR20972]至TNFα -
宿主 兔子 -
特异性 正常样本中TNF-α的蛋白质水平很低。 必须刺激TNFα的表达。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 -
免疫原 重组片段。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:RAW 264.7,用脂多糖(LPS)处理,并添加brefeldin A(BFA)全细胞裂解物; THP-1与TPA隔夜分化,然后用LPS处理7小时,最后3小时加入BFA,全细胞裂解。 ICC/IF:RAW 264.7细胞经LPS处理后加入BFA。 流式细胞术(内):用20ng/ml PMA、1µg/ml离子霉素和10µM BFA处理小鼠脾细胞。 IP:RAW 264.7用LPS处理,添加BFA全细胞裂解物
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:0.05%BSA、40%甘油、PBS -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR20972型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
偶联试剂盒 -
同位素控制 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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靶标
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功能 与TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR结合的细胞因子。主要由巨噬细胞分泌,可诱导某些肿瘤细胞系的细胞死亡。 它是一种通过直接作用或刺激白细胞介素-1分泌而引起发热的强效热原,与恶病质的诱导有关。在某些条件下,它可以刺激细胞增殖和诱导细胞分化。 -
疾病相关 TNF的遗传变异是银屑病关节炎(PSORAS)易感性的一个原因[MIM:607507]。 PSORAS是一种与银屑病相关的炎症性、血清阴性关节炎。 这是一种异质性疾病,从轻微的非破坏性疾病到严重的进行性侵蚀性关节病。 银屑病关节炎有五种类型:以手指或脚趾小关节为主的不对称性少关节炎; 涉及四肢关节的不对称性关节炎; 对称性多发性关节炎,其特征是手、腕、踝和脚可能出现类风湿样改变; 多发性关节炎,这是一种罕见的畸形和破坏性疾病; 骶髂关节和脊柱关节炎(银屑病性脊柱炎)。 -
序列相似性 属于肿瘤坏死因子家族。 -
翻译后修饰 可溶性形式来源于通过蛋白水解过程形成的膜形式。 膜形式,而不是可溶性形式,在丝氨酸残基上磷酸化。 膜形式的去磷酸化通过与可溶性TNFRSF1A/TNFR1结合而发生。 O-糖基化; 聚糖包含半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰神经氨酸。 -
细胞定位 分泌和细胞膜。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 APC1抗体 APC1蛋白抗体 Cachectin抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗-TNFα抗体[EPR20972](ab215188) 车道1: 野生型THP-1对照:布雷菲尔丁A(5微克/毫升,4小时)细胞裂解物 车道2: 野生型处理的THP-1:LPS(100 ng/mL,16 h)、Brefeldin A(5 ug/mL,最后4 h)细胞裂解物 3号车道: TNFα敲除THP-1对照:布雷费尔丁A(5 ug/mL,4 h)细胞裂解物 车道4: TNFα敲除物THP-1处理:LPS(100 ng/mL,16 h),Brefeldin A(5 ug/mL,最后4 h)细胞裂解物 车道5: U937对照:PMA(10 mM,2天)、Brefeldin A(5 ug/mL,最后4小时)细胞裂解物 车道6: U937处理:PMA(10 mM,2天),LPS(1 ug/mL,最后16小时),Brefeldin A(5 ug/mL,最后4小时)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 26千Da 观察到的波段大小: 27千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 这个蛋白质印迹图像是ab215188和 约183218 在相同条件下进行测试。 虽然ab215188适用于某些样品的WB, 约183218 被发现更敏感。 Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗-TNFα抗体[EPR20972]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab215188显示与TNF-α特异性结合。 在处理过的U937细胞裂解液中,在27kDa处观察到一条带,在未经处理的情况下,在该大小下未观察到信号。 在野生型THP-1细胞裂解物或TNF敲除细胞系中未观察到信号 约273761 (敲除细胞裂解物 约275507 )ab215188。 然而,在经处理的野生型THP-1细胞裂解液中,在27kDa处观察到一条带 约183218 为了生成此图像,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )以1/2000稀释。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-TNFα抗体[EPR20972](ab215188) 车道1: 未经处理的RAW 264.7(用Abelson小鼠白血病病毒转化的小鼠巨噬细胞系),全细胞裂解物 车道2: 用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理未经处理的RAW 264.7(用Abelson小鼠白血病病毒转化的小鼠巨噬细胞系)7小时,最后3小时内添加1µg/ml短纤维蛋白A(BFA),全细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 使用ECL技术开发。 预测的带宽大小: 26千Da 观察到的波段大小: 17,26,33千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 15秒 阻塞/稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
对未经处理或用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理7小时并添加1μg/ml布雷费尔丁A(BFA)的4%副甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透性RAW 264.7(用Abelson小鼠白血病病毒转化的小鼠巨噬细胞系)细胞进行免疫荧光分析 在最后3小时内,用ab215188以1/100稀释度标记TNF-α,然后用山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488) ( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体(绿色)。 当用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理7小时,并在最后3小时内添加1μg/ml短纤维蛋白A(BFA)时,RAW 264.7细胞的细胞质染色增强。 核反染为DAPI(蓝色)。 用抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor)检测管蛋白 ® 594) ( 约195889年 )(红色)稀释1/200。 仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488) ( 约150077 )二级抗体的稀释度为1/1000。 -
与兔IgG单克隆抗体[EPR25A]同位素对照组相比,经20ng/ml PMA、1µg/ml Ionomycin和10µM Brefeldin A处理6小时的4%副甲醛固定、0.1%吐温-20渗透性小鼠脾细胞进行细胞内流式细胞术分析,用ab215188在1/600稀释度下标记TNFα(右侧)( 约172730 )(左侧面板)。 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/2000稀释度作为二级抗体。 细胞表面用抗鼠CD3染色,用4%PFA固定10分钟,然后用0.1%吐温-20渗透,细胞内用抗兔IgG和ab215188染色。 TNF-α主要在T细胞(CD3+细胞群)中表达,而只有少数CD3-细胞能表达TNF-alpha。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-TNFα抗体[EPR20972](ab215188) 车道1: 用100 nM TPA隔夜分化的THP-1(人单核细胞白血病细胞系)全细胞裂解物 车道2: THP-1(人单核细胞白血病细胞系)用100 nM TPA分化过夜,然后用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理7小时,最后3小时加入1µg/ml布雷菲尔丁A(BFA),全细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/50000 使用ECL技术开发。 预测的带宽大小: 26千Da 观察到的波段大小: 26千Da 暴露时间: 3分钟 阻塞/稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理0.35 mg RAW 264.7(用Abelson小鼠白血病病毒转化的小鼠巨噬细胞系)7小时,最后3小时加入1μg/ml布雷费尔丁A(BFA),免疫沉淀TNF-α,用ab215188以1/30稀释度溶解全细胞。 用ab215188在1/1000稀释度下对免疫沉淀物进行Western blot。 IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 ),在1/10000稀释度下用于检测 泳道1:RAW 264.7用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理7小时,最后3小时添加1μg/ml布雷菲尔丁A(BFA),全细胞裂解物10µg(输入)。 通道2:RAW 264.7中的ab215188 IP用100 ng/ml脂多糖(LPS)处理7小时,最后3小时添加1μg/ml布氏菌素A(BFA),全细胞裂解物(+)。 通道3:兔单克隆IgG( 约172730 )用100 ng/ml的脂多糖(LPS)处理RAW 264.7中的ab215188,并在最后3小时内添加1μg/ml的布氏菌素A(BFA),而不是ab215188-,全细胞裂解物(-)。 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:3秒。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
合格证书
文献 (43)
施Y 等。 人月经血来源的子宫内膜干细胞通过改善小鼠脊髓损伤模型中的炎症微环境促进功能恢复。 细胞移植 32:9636897231154579 (2023). 公共医学:36786359 Wang C和Li L KLF4在调节缺血性卒中后A1/A2反应性星形胶质细胞活化中的关键作用。 J神经炎症 20:44 (2023). 公共医学:36823628 张Q 等。 芪龙天通过抑制IL-17信号通路改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化。 科学代表 13:6002 (2023). 公共医学:37045911 余M 等。 真菌生物失调通过增强CD4+T细胞谷氨酰胺分解促进炎症性肠病。 前细胞感染微生物 13:1140757 (2023). 公共医学:37124046 何Q 等。 乳铁蛋白通过微生物组-肠-脑轴减轻西方饮食诱导的认知损伤。 Curr Res食品科学 7:100533 (2023). 公共医学:37351541