主要功能和细节
重组生产(无动物),具有高批次一致性和长期供应安全性 APE1-ChIP级单克隆兔[EPR18378-45] 适用于:Flow Cyt(Intra)、IHC-P、ICC/IF、WB、ChIP 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR18378-45]至APE1-ChIP等级 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 重组片段。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:人胎脑、胎热、胎肾和胎脾组织裂解物; 小鼠脑、心、肝组织裂解物; 大鼠脑、肝、脾组织裂解物; HCT 116、HeLa、NIH/3T3、HEK293、HepG2、野生型HAP1和C6全细胞裂解物。 IHC-P:人类卵巢癌组织; 小鼠肝组织; 大鼠肝组织。 ICC/IF:HCT 116和NIH/3T3细胞。 流式细胞术(内部):NIH/3T3细胞。 ChIP:HCT 116细胞。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:0.05%BSA、40%甘油(甘油、甘油)、PBS -
浓度信息加载。。。 -
纯度 纯化蛋白A -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR18378-45 -
同种型 IgG抗体 -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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靶标
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功能 在细胞对氧化应激的反应中起核心作用的多功能蛋白质。 APEX1在DNA修复和转录因子氧化还原调节中的两个主要活性。 在氧化剂和烷基化剂诱导的DNA损伤的DNA碱基切除修复(BER)途径中,作为无嘌呤/无嘧啶(AP)内切脱氧核糖核酸酶发挥作用。 通过催化紧邻损伤的磷酸二酯主链的水解切口,启动DNA中AP位点的修复,产生带有5'-脱氧核糖磷酸和3'-羟基末端的单链断裂。 也切割DNA/RNA杂交体的DNA链、R环结构的单链DNA区域和单链RNA分子中的AP位点。 在短补片BER期间,在缺口或缺口DNA分子的3'末端的错配脱氧核糖核苷酸上具有3'-5'外核糖核酸酶活性。 具有DNA 3'磷酸二酯酶活性,能够清除阻碍DNA链3'侧断裂的损伤(如磷酸乙二醇酯)。 也可能通过参与DNA去甲基化在基因表达的表观遗传调控中发挥作用。 作为POLB在DNA中非切除AP位点上的负载因子,刺激POLB的5'末端脱氧核糖5'-磷酸(dRp)切除活性。 在防止颗粒酶介导的细胞修复导致细胞死亡中发挥作用。 也参与了类开关重组(CSR)的DNA切割步骤。 另一方面,APEX1还通过控制其DNA结合域(如IR后的FOS/JUN AP-1复合物)的氧化还原状态,发挥可逆的核氧化还原活性来调节转录因子的DNA结合亲和力和转录活性。参与钙依赖性甲状旁腺素(PTH)的下调 通过结合负钙反应元件(nCARE)表达。 与HNRNPL或二聚体XRCC5/XRCC6一起与nCaRE结合,作为转录抑制的激活剂。 当在Lys-6和Lys-7处乙酰化时,刺激YBX1介导的MDR1启动子活性,导致耐药性。 也作为内核糖核酸酶参与单链RNA代谢的控制。 通过优先裂解MYC编码区决定簇(CRD)的UA和CA二核苷酸,在调节MYC mRNA转换中发挥作用。 与NMD1相关,在细胞周期进展期间rRNA质量控制过程中发挥作用。 与YBX1一起作用于MDR1启动子上。 与NPM1结合,与rRNA结合。结合DNA和RNA。 -
序列相似性 属于DNA修复酶AP/ExoA家族。 -
结构域 N端具有氧化还原活性,C端具有DNA AP-环氧核糖核酸酶活性; 这两种功能在动作上都是独立的。 C端含有一个非传统的线粒体靶向序列(MTS),该序列似乎被含有核定位信号(NLS)的N端序列所掩盖,这可能会阻断MTS和Tom蛋白之间的相互作用。 -
翻译后修饰 磷酸化。 激酶PKC或酪蛋白激酶CK2的磷酸化导致氧化还原活性增强,从而刺激FOS/JUN AP-1复合物与其同源结合位点的结合。 CK2介导的磷酸化不影响AP-环氧核糖核酸酶活性。 CDK5对Thr-233的磷酸化降低了AP-en脱氧核糖核酸酶的活性,导致DNA损伤的累积并导致神经元死亡。 在Lys-6和Lys-7上乙酰化。 转录辅活化因子EP300乙酰转移酶、遗传毒性因子如H(2)O(2)和甲基磺酸甲酯(MMS)可增加乙酰化反应。 乙酰化增加其与负钙反应元件(nCaRE)DNA启动子的结合亲和力。 与未乙酰化形式相比,乙酰化形式诱导YBX1与MDR1启动子中的Y盒序列的结合更强。在赖氨酸上脱乙酰。 Lys-6和Lys-7通过SIRT1脱乙酰。 粒酶A在Lys-31处裂解,形成线粒体形式; 导致与DNA的结合减少、AP内皮脱氧核酸酶活性、转录因子的氧化还原激活以及细胞死亡增加。 颗粒酶K裂解; 导致氧化应激后细胞内ROS积累和细胞死亡加剧。 Cys-65和Cys-93在一氧化氮(NO)作用下发生亚硝化反应,导致核输出信号(NES)暴露。 MDM2泛素化; 导致向细胞质移位和蛋白酶体降解。 -
细胞定位 线粒体。 断裂的APEX2仅在线粒体中检测到(通过相似性)。 从细胞质到线粒体的易位由颗粒酶A介导的ROS信号和裂解介导。基因毒性应激和细胞核后,依赖Tom20的易位线粒体APEX1水平显著升高。 细胞核,核仁。 细胞核斑点。 内质网。 细胞质。 在B细胞的细胞质中检测到被刺激转换(通过相似性)。 在细胞核中用SIRT1染色。 基因毒性应激后核斑点中用YBX1染色。 与OGG1一起被招募到UVA辐射细胞中的核斑点中。 用核仁蛋白和核仁中的NPM1染色。 其核仁定位依赖于细胞周期,需要活性rRNA转录。 在内质网中用钙网蛋白染色。 一氧化氮(NO)刺激细胞核向细胞质的转运,并以CRM1依赖的方式发挥作用,这可能是由于去核输出信号(氨基酸位置64-80)的结果。 Cys-93和Cys-310处的S-亚硝基化调节其核-细胞溶质穿梭。 泛素化形式主要定位于细胞质。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 328 人类 Entrez基因: 11792 鼠标 Entrez基因: 79116 老鼠 Omim公司: 107748 人类 瑞士保护银行: 第27695页 人类 瑞士保护银行: 第28352页 鼠标 瑞士保护银行: 第43138页 老鼠 尤尼金: 73722 人类
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别名 AP核酸内切酶1抗体 AP内切酶Ⅰ类抗体 AP裂解酶抗体
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图片
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所有车道: 抗-APE1抗体[EPR18378-45]-ChIP等级(ab189474),稀释度为1/1000 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: APEX1敲除HAP1全细胞裂解物 3号车道: HepG2全细胞裂解物 车道4: HEK293全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 35千Da 观察到的波段大小: 37千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在37 kDa下观察到ab189474。 红色-装载控制, 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 Western blot显示ab189474与HAP1野生型细胞中的APEX1反应。 使用APEX1敲除样品时观察到信号丢失。 对HAP1野生型和APEX1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在用ab189474和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释率分别为1:1000和1:20000。用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收液制备印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-APE1抗体[EPR18378-45]-ChIP等级(ab189474),稀释度为1/1000 车道1: 人胎脑裂解物 车道2: 人胎心裂解物 3号车道: 人胎肾裂解物 车道4: 人胎儿脾脏裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 )稀释1/2000 使用ECL技术开发。 预测的带宽大小: 35千Da 观察到的波段大小: 35千Da 阻隔和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST 暴露时间: 1-3车道:1秒 车道4:4秒 -
石蜡包埋人卵巢癌组织标记APE1的免疫组织化学分析,使用ab189474,稀释1/2000,然后使用山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)。 观察人卵巢癌(PMID:20087352)肿瘤细胞的核染色。 苏木精反染。 仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP),随时可用。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
对石蜡包埋小鼠肝组织进行免疫组织化学分析,用ab189474标记APE1,稀释度为1/2000,然后使用山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)。 石蜡包埋人卵巢癌组织标记APE1的免疫组织化学分析,使用ab189474,稀释1/2000,然后使用山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)。 观察人卵巢癌(PMID:20087352)肿瘤细胞的核染色。 苏木精反染。 仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP),随时可用。 观察到。 苏木精反染。 仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP),随时可用。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
对石蜡包埋大鼠肝组织进行免疫组织化学分析,用ab189474标记APE1,稀释度为1/2000,然后使用山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)。 主要观察大鼠肝细胞的核染色(PMID:10643898)。 苏木精反染。 仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP),随时可用。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
对4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100透性HCT 116(人结直肠癌细胞系)细胞进行免疫荧光分析,在1/250稀释度下用ab189474标记APE1,然后用山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488) ( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体(绿色)。 共焦图像显示HCT 116细胞系上的核染色。 核反染为DAPI(蓝色)。 用抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor)检测管蛋白 ® 594) ( 约195889年 )稀释1/200。 -ve控制:PBS,其次是山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488) ( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体 -
4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞系)细胞的免疫荧光分析,在1/250稀释度下用ab189474标记APE1,然后用山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488) ( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体(绿色)。 共聚焦图像显示NIH/3T3细胞系上的核染色。 核反染为DAPI(蓝色)。 用抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor)检测管蛋白 ® 594) ( 约195889年 )稀释1/200。 -ve对照:PBS,然后是山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor®488)( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体 -
所有车道: 抗-APE1抗体[EPR18378-45]-ChIP等级(ab189474),稀释度为1/1000 车道1: 小鼠脑裂解物 车道2: 小鼠心脏裂解物 3号车道: 小鼠肝裂解物 车道4: 大鼠脑裂解物 车道5: 大鼠肝裂解物 车道6: 大鼠脾裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 使用ECL技术开发。 预测的带宽大小: 35千Da 观察到的波段大小: 35千Da 阻隔和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST 暴露时间: 1-5车道:8秒 车道6:4秒 -
所有车道: 抗-APE1抗体[EPR18378-45]-ChIP等级(ab189474),1/5000稀释 车道1: HCT 116(人结直肠癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 3号车道: NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞系)全细胞裂解物 车道4: C6(大鼠脑胶质瘤细胞系)全细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 使用ECL技术开发。 预测的带宽大小: 35千Da 观察到的波段大小: 35千Da 阻隔和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST 暴露时间: 车道1和2:1秒 3号车道:5秒 4号车道:3秒 -
根据Abcam X-ChIP协议,从HCT 116细胞制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。 使用25µg染色质、5µg ab189474(蓝色)和20µl蛋白质A/g琼脂糖珠浆液(10µl琼脂糖A珠+10µl琼脂糖g珠)进行ChIP。 将5μg兔正常IgG添加到珠子对照中(黄色)。 通过实时PCR(SYBR绿色方法)对免疫沉淀的DNA进行定量。 根据文献(PMID:23874636)进行ChIP。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
合格证书
文献 (5)
张Q 等。 APE1通过启动DNA双链断裂形成和减少氧化基因毒性应激后蒿类的泛素化来促进非同源末端连接。 转化医学杂志 21:183 (2023). 公共医学:36894994 黄W 等。 健脾养胃汤通过降低FEN1表达抑制胃癌耐药中DNA损伤修复。 BMC补体治疗 20:196 (2020). 公共医学:32586310 Chatterjee S&Kundu中国 纳米奎那克林调节宫颈癌干细胞中NECTIN-4结构域的特异性功能。 欧洲药理学杂志 883:173308 (2020). 公共医学:32603697 元X 等。 miR-520g和miR-520h通过抑制APE1克服多发性骨髓瘤对硼替佐米的耐药性。 细胞周期 18:1660-1669 (2019). 公共医学:31204563 谢C 等。 N-乙酰半胱氨酸减少由幽门螺杆菌感染诱导的ROS介导的氧化DNA损伤和PI3K/Akt通路激活。 氧化介质细胞Longev 2018:1874985 (2018). 公共医学:29854076