概述
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产品名称 -
亲代细胞系 MCF7型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=1 bp插入; 帧移位=100% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、新一代测序(NGS) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 Western blot数据表明,CRISPR基因编辑可能导致感兴趣的蛋白质截短。 请参阅数据图像。 建议控制: 人野生型MCF7细胞系( 约271144 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: MEM+10%FBS+0.01 mg/ml牛胰岛素 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于适当的细胞培养瓶中,密度为5-7x10 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞计数。 引导播种密度为5-7x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 乳房 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
中国 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 与许多转录因子结合的转录辅抑制因子。 抑制NF-kappa-B调节的基因表达。 抑制由FOXA2、CTNNB1和TCF家族成员在Wnt信号中介导的转录激活。 全长TLE家族成员的效应可能通过与显性负AES的关联而受到调节。 作为ESRRG共激活剂的异常功能。 -
美国 在所有被检查的组织中,主要是大脑、肝脏和肌肉。 -
序列相似性 属于WD repeat Groucho/TLE系列。 包含6个WD重复。 -
结构域 WD重复序列Groucho/TLE家族成员由5个区域组成,一个富含谷氨酰胺的Q结构域、一个富含甘氨酸/脯氨酸的GP结构域、包含核定位信号的中央CcN结构域和一个富含丝氨酸/脯氨酸的SP结构域。 最保守的是N端Q结构域和C端WD-重复结构域。 -
翻译后修饰 磷酸化,可能由CDK1引起。 磷酸化程度在整个细胞周期中变化,在G2/M转变时最高。 随着细胞分化和与HES1或RUNX1的相互作用而发生过度磷酸化。 XIAP/BIRC4实现了泛素化。 -
细胞定位 核心。 核和染色质相关,取决于亚型和磷酸化状态。 过磷酸化降低了核成分的亲和力。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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WT蛋白Lys76后插入1 bp -
所有车道: 抗TLE 1抗体[EPR9386(2)]( 约183742 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: TLE1敲除MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: SH-SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞系)全细胞裂解物 车道4: Hep G2(人肝癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 83千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约183742 在83 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约183742 在蛋白质印迹中显示与TLE1反应。 在敲除细胞系ab269498(敲除细胞裂解物 约269660 )低于83kDa的车道可能代表一个截断形式。这还没有进一步研究。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约183742 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216776年 )在成像前在室温下以1/2000稀释1小时的二次抗体。 -
约131648 野生型MCF7细胞中TLE1染色(顶面板)和TLE1敲除MCF7的细胞(ab269498)(底面板)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约131648 稀释1/500 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )在2µg/ml(以绿色显示)和山羊兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )浓度为2µg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
约183742 野生型MCF7细胞中TLE1染色(顶面板)和TLE1敲除MCF7的细胞(ab269498)(底面板)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约183742 稀释1/500 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )2µg/ml(显示为绿色)和山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2µg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用高含量分析系统(Perkin Elmer,Operetta CLS™)拍摄图像。 -
CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=1 bp插入; 帧移位=100%
数据表及文件
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SDS下载 -
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