壶菌病
AMPHIBIAWEB公司

 

（翻译可能不准确。）

衣原体病概述

2011年5月17日
凯利·惠塔克和万斯·弗伦登堡

  1. 什么是乳糜菌病，是什么引起的？有多少两栖动物受到它的影响？
  2. 这种病原体是在哪里发现的？
  3. 在哪里Bd公司起源？它是一种新的病原体吗？
  4. 它是如何传播的？
  5. 在什么条件下Bd公司增长？
  6. 有什么模式可以Bd公司流行率或Bd公司-导致死亡？
  7. 做Bd公司杀死所有类型的两栖动物（青蛙、蝾螈、盲肠动物）？哪些物种受影响最大/最小？哪些生命阶段受到影响？
  8. 如何Bd公司杀死两栖动物？
  9. 什么是的生命周期Bd公司?
  10. 当Bd公司到达一个区域？当Bd公司导致两栖动物灭绝？
  11. 如何才能Bd公司是否检测到感染？（拭子方案、组织学、实时PCR）
  12. 两栖动物一旦感染了病毒，有什么方法可以治愈吗Bd公司?
  13. 人们如何避免传播Bd公司?
  14. 关于Bd公司基因组？
  15. 乳糜菌病的其他联系
  16. 工具书类

乳糜菌病是什么？是什么引起的？有多少种两栖动物受到影响？

衣原体病是一种由水生真菌病原引起的两栖类新发传染病，树枝状叶状巴氏杆菌(Bd公司)（Daszak等人，2003年）。澳大利亚两栖动物的死亡导致了一种理论，即一种病原体正在毁灭澳大利亚青蛙（Laurance等人，1996年）；该病原体于1998年被确认为乳糜菌（Berger等人，1998年），并于1999年被描述（Longcore等人，1999年）。Bd公司似乎是两栖动物特有的（Berger等人，1998年；Longcore等人，1999年），是已知寄生脊椎动物的仅有的两种乳糜菌之一（另一种是普通鱼糜，寄生在鱼类身上；普伦1916年；乔文卡等人，1974年；Sch‰perclaus等人，1992年）。Bd公司据记载，在许多蛙类物种、一些蝾螈物种和一种单盲蝽物种中都存在感染(打字机（Raphael和Pramuk，2007年，未出版摘要）。

Bd公司可能是有记录以来生物多样性因疾病造成的最大损失的原因（Skerratt等人，2007年）。在过去的30年里，Bd公司导致了至少200种青蛙的灾难性下降或灭绝（在许多情况下是在一年内），即使是在原始的偏远栖息地（Skerratt等人，2007年）。这些无法解释的快速下降发生在世界各地（例如，哥斯达黎加：Crump等人，1992年，Lips 1998年；巴拿马：Lips 1999年，Lips2003a，Lips 2003b，Lips 2006年；巴西：Heyer等人，1988年，Weygoldt 1989年；澳大利亚：Laurance等人，1996年）。最近Bd公司也与中美洲蝾螈不明原因失踪事件有关（Rovito等人，2009年）。虽然疾病以前与人口减少和灭绝有关（Daszak等人，2000年），但乳糜菌病是第一种新出现的疾病，它导致数百种没有受到其他威胁的物种减少或灭绝（Skerratt等人，2007年）。目前已知超过350种两栖动物感染了Bd公司（Fisher等人，2009年）。

Bd公司感染了两栖动物皮肤的表面含角蛋白层（Berger等人，1998年）。在青蛙蝌蚪中，只有口器角质化，容易受到Bd公司感染（Berger等人，1998年），导致口腔色素脱失，有时出现缺陷（Rachowicz和Vredenburg，2004年）。在变态过程中，身体的皮肤变得越来越角化，真菌感染随后能够在易感物种的青蛙（和成人）的皮肤上传播（Marantelli等人，2004年；Rachowicz和Vredenburg，2004年）。青少年和成年人Bd公司皮肤细胞内的感染和包囊，尤其是在腹部、手指和骨盆“饮水贴片”（Berger等人，1998年）。随着感染的进行，皮肤变得更厚（角化过度）并脱落（Berger等人，1998年）。渗透调节越来越受到损害，电解质血水平下降，导致心脏骤停死亡（Voyles等人，2009年）。暴露后的死亡率和死亡时间取决于许多因素，如病原体剂量、温度、年龄和生命阶段、物种和Bd公司菌株（Berger等人19992004；Lamirande和Nichols 2002；Woodhams等人2003；Rachowicz和Vredenburg 2004；Berger等人2005）。感染强度似乎是一个关键因素；一旦个体感染量达到约10000个真菌游动孢子，成年青蛙和蝾螈就会死亡（Vredenburg等人，2010年针对青蛙；Cheng等人，2011年针对蝾螈）。

在许多蛙类中，Bd公司在实验室中具有高致病性，即使初始感染水平较低也可能导致死亡（Skerratt等人，2007年）。在其他青蛙物种中，例如牛蛙,Bd公司能够以持续低水平感染蝌蚪和成虫，而不会杀死它们，因此这些物种可以作为真菌的携带者（Skerratt等人，2007年；有关无尾类物种作为真菌携带者的进一步讨论，请参见下文第六节Bd公司). 在蝾螈中，一些物种似乎会抵抗、坚持或清除Bd公司感染程度大于青蛙（Davidson等人，2003年），这表明它们可能是Bd公司感染（例如，东方虎蝾螈，虎纹钝口螈). Weinstein（2009）发现，尽管受感染的野外采集蝾螈(衰减蝙蝠)当被圈养时，蝾螈的死亡率为100%Bd公司圈养和居住在干燥的小生境中（模拟夏季的夏日夏眠）都能清除Bd公司感染。尽管有这些发现，Bd公司蝾螈的易感性似乎各不相同，对某些蝾螈的影响比其他蝾螈更大。Rovito等人（2009年）报告了可能参与Bd公司中美洲蝾螈数量急剧下降。随后，Cheng等人（2011年）开发了福尔马林固定博物馆标本的qPCR方法，并表明Bd公司在墨西哥和中美洲的多种蝾螈中都有感染，大约在数量下降的同时。此外，还有两种新热带蝾螈(麻风假单胞菌和鲁费森氏Bolitoglossa rufescens)被发现很容易受到Bd公司实验室感染（Cheng等人，2011年）。


照片©Vance Vredenburg
山地黄蛙(黄腿蛙)2008年8月被食糜虫杀死。
照片摄于美国加利福尼亚州内华达山脉的六十湖盆地。

二、。何时何地发现这种病原体？

Bd公司已在两栖动物出现的所有大陆上发现；换言之，除南极洲外的所有大陆（Fisher等人，2009年）。Bd公司此外，两栖动物几乎在所有地方都出现了严重的数量下降（北美、中美、南美、澳大利亚、非洲和欧洲；Van Sluys and Hero 2010）。虽然澳大利亚、中美洲和北美洲发生了最引人注目的大规模死亡事件，但研究人员正在调查可能的Bd公司-其他地区也出现了相关下降。

两栖类Bd公司几乎在两栖动物发生的所有海拔高度都有感染记录，从接近海平面（年落叶松细指（位于加勒比海的多米尼加岛上）秘鲁安第斯山脉海拔5348米（年红色胸膜水肿和褐金枪鱼)在那里，青蛙在冰川消融地区的池塘中定居了5400米（Seimon等人，2006年）。

全球分布树枝状叶状巴氏杆菌(Bd公司)，两栖类乳糜菌


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摘自Fisher等人（2009）；该图像是来自的屏幕截图
www.spatialepidemiology.net/bd-maps/


在澳大利亚,Bd公司发现于四个地区，包括除北领地以外的每个州或地区的部分地区：（1）东海岸，昆士兰和新南威尔士州的雨林，以及维多利亚州的山地和山麓森林（Berger等人，1999年）；（2） 西南部，从珀斯延伸（Berger等人，1999）；（3） 阿德莱德周围（Berger等人，1999年）；塔斯马尼亚州（Obendorf 2005；Obenderf 2006）。北领地还没有任何正面记录（Speare和Berger，2005年；Van Sluys和Hero，2010年）。每个区域最早的博物馆标本，有Bd公司东海岸（昆士兰南部科隆代尔山脉）的感染日期为1978年12月，西南部为1985年10月，阿德莱德为1996年5月，塔斯马尼亚为2004年（奥本多夫，2005年）。至少有一种澳大利亚青蛙，尖吻激流蛙(尖吻牛指虫)被认为是由Bd公司最后一次野生动物数量锐减发生在1993年9月，最后一次捕获的动物死于Bd公司1995年在墨尔本动物园（Speare和Berger，2005年）。Bd公司也被强烈怀疑与胃孵化蛙的灭绝有关，卵黄黄颡鱼和胃育溪蟾还有南方天蛙，白头牛趾（Laurance等人，1996年；Berger等人，1998年）。

澳大利亚大陆两栖动物数量的急剧下降始于20世纪70年代末昆士兰南部布里斯班附近（Czechura和Ingram，1990年），并于20世纪80年代中期继续向北至昆士兰中东部。据估计，昆士兰沿海地区的病原体传播速度为每年100公里（Laurance等人，1996年）。塔斯马尼亚州的人口下降也始于20世纪70年代末（Fearn等人，2003年）。

    20世纪70年代末和80年代初，在昆士兰东南部布里斯班附近的D'Guillar、Blackall和Conondale亚海岸山脉首次发现了衰退（Laurance等人，1996年）。白头牛趾南天蛙在三到四年的时间里消失了，1975年末从迪亚吉拉尔山脉消失，1978年末从布莱克尔山脉消失，1979年初从科隆代尔山脉消失（Czechura and Ingram 1990）。同样，南方胃孵化蛙，胃育溪蟾（一种有着将胚胎在母亲胃里孵化并通过嘴分娩的特殊习惯的青蛙）在1979年之后（Czechura和Ingram，1990年）在科农代尔山脉没有被发现，最后一次在布莱克尔山脉被收集是在1981年（Richards等人，1993年）。昆士兰东南部和邻近新南威尔士州的另外三个物种在同一时间段内几乎灭绝，种群减少了90%以上(丽托莉亚·皮尔逊（Litoria pearsoniana）级联树蛙；迭代Mixphysies iteratus巨大的栅蛙；和跳蚤混合体（Ingram和McDonald，1993年）。

    20世纪80年代中期，昆士兰中东部，布里斯班以北约700公里，热带雨林边缘，记录了更多澳大利亚两栖动物的减少。北方胃孵化蛙(卵黄黄颡鱼)发现于1984年，并被认为是常见的（Mahony等人，1984年）。安吉拉激流蛙，恩格尔牛趾虫，也被报道为共同到1984年（McDonald 1990）。1985年1月，这两个物种的低海拔种群（海拔400米）首次出现下降（Winter和McDonald，1986年）。尽管低海拔种群数量有所下降，但1985年3月，这两种物种在高海拔地区仍然很常见。然而，1985年6月（仅仅三个月后）的调查发现卵黄黄颡鱼没有发现该物种的踪迹（McDonald，1990年）。卵黄黄颡鱼自1985年3月以来未记录；恩格尔牛趾虫自1986年6月以来从未见过（McDonald 1990）。

    1989-1996年，几项研究报告昆士兰的物种数量进一步下降，其中有两种(尼亚卡利病山雾蛙嗜热牛指虫（叮当蛙）离开了它们的山地雨林栖息地，一种物种在大多数被调查的高地地点消失了(尖吻牛指虫（尖嘴蛙）和其他物种在大多数调查的高地地点失踪，但在低地地点仍然存在(南诺利托里亚瀑布蛙；利托里亚河常见的青蛙；和大邑Nyctimystes（Richards等人，1993年；Trenerry等人，1994年；Hero，1996年）。1993年，Big Tableland（昆士兰北部库克斯镇附近）的两栖动物种群大量死亡，并突然崩溃，这一次两栖生物学家能够收集死蛙，而不是简单地注意到数量有所下降。随后，Laurance及其同事提出，一种病原体，可能是一种水传播病毒，可能是这些两栖动物灭绝的原因，至少有14种澳大利亚热带雨林特有蛙受到影响（Laurance等人，1996）。所有受影响的物种都是溪流繁殖者。在一些物种中，低地种群能够持续存在，而高海拔种群消失。衰退是有选择性的，一些物种持续存在，其他物种则没有（Laurance等人，1996年）。由于病原体通常不会驱使宿主灭绝，所以这一假设最初并不被接受。然而，对1993年大台地死亡的青蛙进行的检查显示，青蛙的皮肤受到了寄生虫感染；随后，该寄生虫被鉴定为一种乳糜菌，测试证实其与两栖动物死亡有关（Berger等人，1998年；Longcore等人，1999年）。对博物馆保存标本的回顾性检查表明Bd公司直到1978年，在昆士兰南部采集的标本中才发现感染，此后沿海岸向北和向南传播（Skerratt等人，2007年）。

    在澳大利亚西部，乳糜菌病于1985年首次在珀斯南部的一个地点发现，并从最初的发现地点向各个方向传播（Skerratt等人，2007年）。

    根据朗塞斯顿地区居民的回顾性记录，塔斯马尼亚州的两栖动物首次减少发生在20世纪70年代末雷氏立陶宛，南部钟蛙（Fearn等人，2003年）。2004年首次进行了基于PCR-的乳糜菌病调查，专门测试了一些不同物种的蝌蚪（Obendorf，2005年；Obenderf和Dalton，2006年）。到那时，塔斯马尼亚特有物种塔斯马尼亚树蛙的数量也有所下降(Litoria洞穴)据报道，郊区青少年发生了大规模死亡事件埃文吉梨《呼啸树蛙》（Obendorf 2005）。Bd公司确认存在于多个栖息地（塔斯马尼亚中央高原海拔>800 m的高海拔湿地；城郊湿地；郊区私有蛙塘）（Obendorf 2005）。发现多个物种的蝌蚪受到感染（Obendorf，2005年）。特别地，Bd公司感染最常见的地方是靠近主要城镇的栖息地（Obendorf和Dalton，2006年），而塔斯马尼亚荒野世界遗产区（TWWHA）偏远地区的感染率要低得多（Pauza和Driessen，2008年）。最可能引入Bd公司据认为，在农产品和园艺贸易中，特别是香蕉（McDonald and Spare 2000；Obendorf 2005；另见下文）和盆栽植物（Obenderf and Dalton 2006）中，被感染的青蛙被意外运输到塔斯马尼亚州。在TWHA内，Bd公司分布与碎石路的存在密切相关；维护这些道路需要从当地湿地运输水（用于喷洒道路以抑制灰尘）和运输湿土用于道路维修，这两种情况都可能发生变化Bd公司游动孢子或Bd公司-感染两栖类成虫/蝌蚪进入新的区域（Pauza和Driessen，2008年）。初级工业和水利部绘制了塔斯马尼亚岛有/无糜烂截至2009年。


在北美,Bd公司根据存储在www.spatialepidemiology.net/bd-maps/，和Cheng等人（2011年）。最早的两栖动物标本清楚地显示了Bd公司加拿大和美国产于1961年，是蛙类。至少有一种蛙类，美国牛蛙(牛蛙)似乎是Bd公司，在Bd公司基因型和可能在一定程度上负责运输Bd公司世界各地（Rosenblum等人，2010年；Garner等人，2006年；Mazzoni等人，2003年）。虽然蝾螈可能容易受到Bd公司到目前为止，美国蝾螈数量的减少似乎与拉那韦病毒的爆发有关，而不是与Bd公司一些美国蝾螈可能携带Bd公司（例如，Jancovich等人，2003年）。与此相反，Bd公司可能与墨西哥和中美洲蝾螈数量减少有关（Rovito等人，2009年；Cheng等人，2011年）。

    加拿大的采样主要是在与美国接壤的边境附近进行的，但不列颠哥伦比亚省北部的一些采样除外Bd公司-受感染的加拿大标本是蛤蟆蛙来自魁北克（Ouellet等人，2005年）。
    几乎所有美国州的Bd公司美国表示，到目前为止Bd公司堪萨斯州、密西西比州和纽约州；还没有Bd公司样本数据来自肯塔基州、内布拉斯加州、北达科他州、南达科他省和威斯康星州www.spatialepidemiology.net/bd-maps/1961年Bd公司-受感染的美国标本牛蛙来自加利福尼亚州中部（Padgett-Flohr和Hopkins，2009年）。人们认为Bd公司于20世纪50年代末或60年代初引入加利福尼亚州北部的圣克拉拉县；一个可能的向量可能是非洲爪蟾，已知为Bd公司1949年第一次运往美国，可能是运往斯坦福大学（Padgett-Flohr和Hopkins，2009年）。在加利福尼亚州，Bd公司随后在地理上分布开来，现在遍及加州中部大部分地区（帕吉特·弗洛尔和霍普金斯，2009年）。在美国境内，Bd公司已被链接至智利林蛙（Bradley等人，2002年），雅瓦巴蛙（Bradley等人，2002年）；淡色蛙（莫雷尔，1999年）；和黄腿蛙（Rachowicz等人，2006年）.
    在墨西哥，最早的Bd公司-受感染的标本是来自墨西哥南部山区的蝾螈(羽状梭鱼)可以追溯到1972年（Cheng等人，2011年）。20世纪70年代至80年代，墨西哥蝾螈数量减少（Parra-Olea等人，1999年；Rovito等人，2009年）。Bd公司也与青蛙数量急剧下降有关塔拉胡马雷蛙（Hale等人，2005年）。Bd公司未在巴哈州发现，但在墨西哥北部和南部均收集到阳性拭子（见Cheng等人2011年，以及www.spatialepidemiology.net/bd-maps/).

Bd公司从墨西哥向南穿过中美洲

Cheng等人2011年的数据。

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在中美洲20世纪80年代中期首次发现两栖动物数量急剧下降。两栖动物群落沿着向南推进的样带相继崩溃。Bd公司从北美洲（墨西哥）向东南方向传播，途经危地马拉（Cheng等人，2011年）、洪都拉斯（Cheng等人，2011年）、哥斯达黎加（Lips等人，2006年；Cheng等人，2011年）和巴拿马（Lips等人，2006年），并以约17公里/年的速度持续进入南美洲（Lips等人，2006年）。

    最著名的病例发生在1988年，当时金蟾(大蟾蜍)在哥斯达黎加的一个保护区，它从偏远、原始的山区栖息地消失了，最后一只金色蟾蜍出现在1989年。与此同时，在哥斯达黎加蒙特维尔附近，丑角蛙(变种Atelopus varius)消失了，许多其他哥斯达黎加两栖动物物种要么消失了，要么遭受了灾难性的衰退；到20世纪80年代末，在广泛的分类范围内，40%的两栖动物物种从蒙特维尔消失了。在对哥斯达黎加博物馆两栖动物标本的回顾性研究中，Puschendorf等人（2006a）发现Bd公司存在于1986年收集的标本中，这些标本来自低海拔和高海拔地区（目前尚不清楚Bd公司1986年之前曾在哥斯达黎加任职）。
    在危地马拉，自20世纪80年代起，高海拔蝾螈群落开始崩溃，尤其是陆地小生境专家，而树栖物种或小生境通才（Rovito等人，2009年）。据推测，种群密度差异可能解释了这种下降模式，陆生物种的密度越来越高Bd公司传输率（Cheng等人，2011年）。例如，20世纪70年代发现的两种危地马拉蝾螈种类丰富(布鲁纳假单胞菌和歌贝利假丝酵母菌)到2005年、2006年和2007年调查时，已从研究地点完全消失（Rovito等人，2009年）。由于危地马拉的内乱使得1979-2005年期间的调查工作几乎不可能进行，因此很难准确地确定下降发生的时间（Rovito等人，2009年），但对1979年和之前采集的样本的分析表明，没有证据表明Bd公司感染（Cheng等人，2011年）。最早收集的Bd公司-危地马拉阳性标本(Bolitoglossa恩格尔哈迪和黄腹舌苔)日期为1994年（Cheng等人，2011年）。
    在洪都拉斯，第一个消失的物种是青蛙Craugastor milesi公司1989年至1995年期间，其他物种也有所减少（McCranie和Wilson，2002年；Wilson和McCranee，2004年），特别是在Pico Bonito国家公园（Puschendorf等人，2006b）。
    在巴拿马，监测Bd公司于2000年开始，在一个地点（El CopÈ），早于假定的流行波。两栖动物既不会衰退，也不会Bd公司从2000-2004年开始，在监测的头四年中检测到（Lips等人，2006年）。2004年9月下旬，第一次现场直播Bd公司-发现感染青蛙；十一天后，第一个死者Bd公司-发现了阳性青蛙，死亡的青蛙死亡率急剧上升Bd公司-在57%的物种和现场所有七个青蛙科中发现了受感染的青蛙（Lips等人，2006年）。

Bd公司向南穿过中美洲（哥斯达黎加和巴拿马）

Lips等人2008年的数据。

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在欧洲1997年，西班牙中部瓜达拉马山脉的佩拉拉国家公园（Parque Nacional de la Cumbre，Circo y Laguans de PeÒalara）首次确认野生两栖动物中爆发致命的乳糜菌病（Bosch等人，2001年）。Bd公司目前广泛分布于欧洲，西班牙（Garner等人2005）、葡萄牙（Garner等2005）、意大利（Stagni等人2002）、瑞士（Garner等等2005）、英国（Garner et al2005）、法国（Garner etal2006）、德国（进口圈养青蛙；Mutschmann等人2000）和卢森堡（感染水平极低；Wood等人，2009年），在西班牙和瑞士的流行率尤其高（Garner等人，2005年）。

    在西班牙，乳糜菌病首先于1997年爆发，然后在1998年和1999年再次爆发（Bosch等人，2001年）。数千只助产士蟾蜍(产婆蟾)被发现死亡，几乎灭绝了这些人口（Bosch等人，2001年）。从1999年开始，火蝾螈也出现了与乳糜酸相关的重大死亡病例(火蝾螈)佩拉拉国家公园（Bosch and MartÌnez-Solano 2006）。在1982-1986年和1999年的调查期间(菖蒲)大约在1999年，它们从原来的池塘中消失了一半，并采集了一只感染乳糜的濒死成虫（MartÌnez-Solano等人，2003年）。相比之下，佩阿拉拉国家公园普通蟾蜍的数量，蟾蜍，似乎经历了与乳糜酸相关的轻微死亡，但没有大规模下降，其他同域两栖物种也保持稳定（常见树蛙，无斑雨蛙和伊比利亚青蛙，伊比利亚蛙)或占用池塘数量大幅增加（山蝾螈、，高山鱼龙; 大理石蝾螈，褐三头鱼和伊比利亚绿蛙，拉娜·佩雷斯)（MartÌnez-Solano等人，2003年；Bosch和Martinez-Solanao，2006年）。拉娜·佩雷斯通常是低海拔物种，似乎已经扩展到高海拔的佩拉拉国家公园（以花岗岩露头为特征，点缀着海拔1800-2430米的高山草原和沼泽），可能是由于气候变暖（MartÌnez-Solano et al.2003）。如果R.佩雷斯被发现是Bd公司，类似于牛蛙，这可能与Seimon等人（2006）在秘鲁安第斯山脉报告的情况类似，其中红色胸膜水肿已在高海拔池塘定居，并可能迁移Bd公司在此过程中迁移到新的栖息地（见下文第四节）。

    在西班牙，Bd公司分布似乎是由最近一次引入比利牛斯山脉（与西班牙和法国接壤），或者多次引入，或者一次更古老的引入伊比利亚半岛引起的（Walker等人，2010年）。伊比利亚半岛Bd公司在系统发育分析中，基因型与北美分支聚类，表明可能至少有一次从北美引入（Walker等人，2010年）。

    在法国，迄今为止唯一发表的报告Bd公司感染发生在Loir et Cher、Bordeaux和Archachon引进的牛蛙身上（Garner et al.2006）。Crochet等人（2004年）没有发现20世纪70年代初至2001年间法国南部朗格多克本地青蛙种群中两栖类数量下降的证据。

    在意大利，Bd公司-已记录到受感染的引进牛蛙（Garner等人，2006年）。Stagni等人（2002年）也报告了感染厚壳蛤蟆.

    在英国，Bd公司-已记录到阳性两栖动物标本，但未记录到该物种（Garner等人，2005年），并且还发现引进的牛蛙受到感染（Garner等，2006年）。

    在德国，已经有许多关于进口和圈养红蛙中乳糜菌病的报告（Mutschmann 2000）。一份野生报告Bd公司-受感染的沼蛙(田野林蛙)已出版（Mutschmann 2000）。

在南美洲,Bd公司似乎很普遍（Carnaval等人，2006年）。Bd公司-南美洲所有接受测试的国家都记录了阳性拭子；目前还没有来自法属圭亚那、圭亚那，巴拉圭或苏里南的数据（参见www.spatialepidemiology.net/bd-maps/). 该病原体似乎能够迅速传播，在整个国家传播不到五年，在南美洲北部传播大约二十年，传播速度为25-282公里/年；这与中美洲的数据一致（Lips等人，2008年）。Bd公司被认为是在20世纪70年代中期引入的，很可能是同时引入厄瓜多尔和委内瑞拉（Lips等人，2008年）。随后，该病原体沿着科迪勒拉山脉向北和向南传播，并在过去30年中多次导致两栖动物数量下降（Lips等人，2008年）。丑角蟾蜍（属阿特洛普斯)是受打击最严重的球队（详见下文第七节）。

    在阿根廷，Bd公司已在中找到短指细趾（Herrera等人，2005年）和双色Elachistocleis bicolor，位于东北低地阿根廷大西洋森林（Arellano等人，2009年）和两种终端虫据报道，阿根廷西北部有人感染（Barrionuevo和Mangione，2006年）。

    在巴西，Bd公司广泛分布于巴西大西洋雨林（Carnaval等人，2006年）。对巴西博物馆标本的检查得出了大约1981年的引入日期，这大致相当于在巴西观察到的首次两栖动物减少（Carnaval等人，2006年）。巴西引进的牛蛙被记录为Bd公司-阳性（Garner等人，2006年）和本地物种也受到感染（Carnaval等人，2005年；Toledo等人，2006）。

    在玻利维亚，Bd公司2007年首次在山地物种的洪流蝌蚪中检测到感染大蟾蜍收集于卡拉斯科国家公园（Barrionuevo等人，2008年）。玻利维亚没有大规模死亡的报告（Reichle，2006年），但已知一些两栖动物种群有所下降（de la Riva，2005年）。

    在智利，现已报告感染了引进的野生动物非洲爪蟾（SolÌs等人，2010年）。十个采样点中有三个为阳性，该物种在智利的快速传播可能会促进Bd公司（SolÌs等人，2010年）。

    在哥伦比亚，对1968年至2006年间收集的博物馆标本（672个标本，53种）进行了回顾性检查，以确定是否存在Bd公司感染，发现三种具有阳性症状（Ruiz和Rueda-Almonacid 2008）。米氏阿特洛普斯据现场记录，2004年在桑坦德省收集到的，已感染，但没有显示乳糜菌病的迹象。一个波哥特风信子青蛙和一个成年人秀丽钩吻线虫2005年被发现死亡。

    在厄瓜多尔，迄今为止最早的记录可追溯到1980年，来自厄瓜多尔的CaÒar地区（Ron and Merino 2000；Lips et al.2008）。多个厄瓜多尔物种受到影响（Ron和Merino，2000年；La Marca等人，2005年；Bustamante等人，2005年）。Bd公司-亚马逊河流域还没有相关的两栖动物减少的记录，但Bd公司据报道，目前已在亚马逊河-厄瓜多尔境内的树栖凤梨中的水中检测到（McCracken等人，2009年）。

    在秘鲁，最早的记录可追溯到1998年三色Atelopus（Lips等人，2008年）。最近的调查表明，马努国家公园的高海拔两栖动物群落正在崩溃（Catenazi等人，2009年）。秘鲁南部科迪勒拉·维尔科诺塔的早期研究报告称褐金枪鱼（2002年收集）在当地人报告两栖动物数量减少的地区被报告为感染（Seimon等人，2005年）。Bd公司在中找到阿特洛普斯制浆机2003年在Cainarachi山谷（Lˆtters等人，2005年）。Seimon等人（2007年）报告Bd公司两个无核种的感染(褐金枪鱼,红色胸膜水肿)，并与褐金枪鱼与乳糜菌病相关红色胸膜水肿作为一个Bd公司-最近扩大了航程的航空公司。

    在乌拉圭，最近在2001年至2007年间收集的乌拉圭本土两栖动物的几种蝌蚪中也报告了乳糜菌病（Borteiro等人，2009年）。此外，据报道，引入乌拉圭的牛蛙Bd公司-积极（Garner等人，2006年）。

    委内瑞拉首次出现下降阿特洛普斯坩埚20世纪70年代中期的种群，以及有证据表明Bd公司感染也是A.坩埚1986年，来自加拉加斯附近（Guayasamin等人，2002年；Lips等人，2008年）。据报告，引进的牛蛙受到感染（Hanselmann等人，2004年）。


Bd公司以波前形式从南美洲至少两个地区（厄瓜多尔和委内瑞拉）传播

图来自Lips等人2008。

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在亚洲除Goka等人（2009年）在日本进行的调查外，调查主要是机会主义而非系统性的。Bd公司最近在亚洲大陆和东南亚都有。在中国，Bd公司在云南省发现了四种本地两栖动物中的三种，以及非本地牛蛙(牛蛙). 在韩国，Bd公司在调查的七种野生青蛙中，有三种被检测到（Yang等人，2009年）。在日本的野生和圈养蝾螈以及野生青蛙（Goka等人，2009年；更多详细信息见下文第三节）、日本的圈养非本土青蛙（Une等人，2008年）、印尼的四种野生青蛙（Kusrini等人，2008）和菲律宾的野生青蛙上也发现了该病毒(报道2009年，但尚未出版）。在菲律宾，美国-菲律宾联合研究小组发现Bd公司吕宋岛中高海拔相对未受干扰的森林（Palaypalay山和Labo山）中至少有五种蛙类，其中至少一种是Bd公司-受感染的青蛙种群数量下降。尽管Lehtinen等人（2008）提到了Bd公司在台湾南部引进牛蛙养殖场感染牛蛙的情况下，这仍然是L.Schloegel的个人信息，这些数据尚未公布。Schloegel等人（2009年）指出，在美国市场（纽约、洛杉矶、旧金山）出售的活牛蛙感染了Bd公司（和蛙病毒），大多数店主表示青蛙的原始来源是中国或台湾（来自青蛙养殖场）。

2005-2006年期间，香港（大屿山、香港岛和新界）没有进行初步调查Bd公司无论是本地两栖类（4种中的0种）还是从食品或宠物市场购买的进口非本地两栖动物，香港两栖类种群都没有出现令人费解的下降（Rowley等人，2007年）。然而，测试的非本土物种不包括牛蛙，对三种进口物种中的两种进行了极少量的样本测试(虎纹蛙129个样本；马氏Occidozyga martensii，1个试样；非洲爪蟾，7个试样）。早期的回顾性组织学研究发现Bd公司来自中国大陆的少量博物馆标本中的感染（Ouellet等人，2005年），也没有对本地人进行调查拉娜·迪博夫斯基在中国东北部（Wei等人，2010）。Lehtinen等人（2008）没有检测到Bd公司来自台湾中部南投县莲花池林业站的样本（共12种20只）。McLeod等人（2008年）没有发现Bd公司在泰国两栖动物中。同样，早期对引进牛蛙的调查(牛蛙)在日本人群中没有发现感染的证据（Garner等人，2006年）。

在非洲，最早显示糜烂杆菌感染迹象的标本包括非洲爪蟾来自喀麦隆，于1933年收集（Soto-Azat等人，2010年）非洲爪蟾来自南非，于1938年收集（Weldon等人，2004年）。到目前为止Bd公司据报告，非洲有13个国家（博茨瓦纳、喀麦隆、刚果民主共和国、加纳、肯尼亚、莱索托、马拉维、尼日利亚、南非、斯威士兰、坦桑尼亚、乌干达和赞比亚）发生了感染，其中大部分发生在南部和东部非洲；非洲爪蟾据报告，其中9个国家（博茨瓦纳、喀麦隆、加纳、肯尼亚、马拉维、南非、斯威士兰、坦桑尼亚、乌干达和赞比亚）感染了该物种（有关每个国家的讨论和引用列表，请参见Blackburn等人2010）。迄今为止，只有一种非洲两栖类物种，即Kihansi喷雾蟾蜍的数量下降与糜烂真菌病有关(曲鼻咽喉炎)（Weldon和du Preez，2004年；Channing等人，2006年）。尽管Blackburn等人（2010年）报道了喀麦隆山区的一种地方性流行病，长爪蟾他们也没有发现糜蛋白酶参与这种下降的证据。

Bd公司到目前为止还没有发现发生在马达加斯加马达加斯加拥有丰富的特有两栖动物群，尚未发现马达加斯两栖动物数量的神秘下降（除了明显的栖息地损失外，还有其他原因）（Weldon等人2008年；Andreone等人2008年）。然而，生态位建模分析预测，马达加斯加中部和东部栖息地将适合Bd公司（罗恩2005）。作为马达加斯加两栖动物保护行动计划的一部分，正在实施各种战略，以防止Bd公司引进、监测两栖动物的乳糜菌病种群，并在检测到乳糜虫时启动圈养繁殖计划（见Andreone等人，2008年）。

在加勒比海的,Bd公司20世纪70年代中期在波多黎各首次发现（Burrowes等人，2008年），导致两栖动物种群大量减少，特别是在20世纪90年代（Burrowes等人，2004年）。Bd公司在波多黎各两栖动物中持续存在，是一种地方性传染病，即使是不进入水中繁殖的直接发育的青蛙（Longo等人，2009年）。在多米尼加，2002年爆发的一次乳糜菌病严重破坏了山鸡蛙的种群(法拉克细足龙)在短短几个月内，它成为加勒比最大的本土两栖动物物种（McIntyre 2003）。蒙特塞拉特被视为落叶松细指2003年至2005年的初步调查表明，蒙特塞拉特岛在这些年中没有出现糜烂病（Garcia等人，2007年）。在古巴，严重感染和死亡长尾蟾蜍发现于2006年10月（DÌaz等人，2007年）。2009年2月，在蒙特塞拉特的几个地点发现了死亡和垂死的青蛙，促使40名显然健康的青蛙撤离落叶松细指三个不同的机构建立圈养繁殖计划（GarcÌa等人，2009年）。在多巴哥岛的三个不同种群的血湾蛙中也检测到了Chytrid感染，甘草炔醇（Alemu I.，2008）。这种石斛物种被认为近年来经历了急剧下降，但目前似乎仍在继续Bd公司作为一种地方性感染（Alemu I.，2008）。

在新西兰，本地和引进的物种都受到了乳糜菌病的影响。两栖动物数量首次下降是在1995年，当时一种罕见的地方病的死亡标本，阿奇奥佩尔玛（Archey的青蛙），在干旱后于北岛科罗曼德尔半岛的Tokeata山脊采集（Bell等人，2004年）。1996年太古雷欧佩尔玛塔普山脊的人口下降。1998年，托克塔山脊上幸存的青蛙数量进一步减少（Bell等人，2004年）。首次检测到Bd公司1999年11月在克赖斯特彻奇制作，采用引进的澳大利亚品种雷氏立陶宛（Norman和Waldman 2000；Waldman等人2001），第二次是在2000年发现感染伊文吉利托里亚也是引进的澳大利亚物种（Bishop 2000；）。2001年阿奇奥佩尔玛被发现死于北岛科罗曼德尔山脉Te Moehau的近原始栖息地，感染了Bd公司（Bell等人，2004年）。衣原体病的易感性在不同物种之间以及不同地区同一物种的种群之间似乎存在差异。1996-2001年间，当陆地青蛙阿奇奥佩尔玛在科罗曼德尔半岛，半水生物的同域种群数量正在下降霍氏利奥佩尔马没有显著下降（Bell等人，2004年）。此外阿奇奥佩尔玛在北岛西部的Wharenono森林，一些人感染了Bd公司但没有坠毁（Bell等人，2004年）。


三、 在哪里Bd公司起源？它是一种新的病原体吗？

尚不确定在哪里Bd公司起源于。Weldon等人（2004年）检查了非洲爪蟾非洲爪蛙，在许多实验室用于发育生物学研究。这些研究人员从脚趾之间的蹼上观察了皮肤样本，发现最早有明显糜烂感染迹象的样本是1938年的。这大约与20世纪30年代开始，非洲爪蛙被更广泛地运到世界各地用于科学研究和妊娠测试的时期相吻合（为了讨论爪蟾怀孕测试，见Gurdon和Hopwood 2000）。

Morehouse等人（2003年）研究了来自北美、非洲和澳大利亚的35种两栖类糜烂菌菌株的遗传多样性，发现菌株之间的序列差异极低。由于遗传多样性随着时间积累，几乎没有发现变异这一事实表明，来自不同大陆的菌株有一个最近的共同祖先，并且在很长一段时间内没有单独进化。这支持了以下观点：Bd公司最近才被介绍到不同的地方。James等人的序列分析（2009年），共59页Bd公司来自全球各地的菌株的结果也与克隆繁殖和最近范围的迅速扩大相一致。这种引入的来源不得而知，尽管人们强烈怀疑是无意的人为传播（Halliday 1998；Berger等人1999；Daszak等人1999；Morgan等人2007）。

相比之下，Goka等人（2009）报告了不同的单倍型Bd公司目前存在于日本，一些菌株似乎是某些日本本土两栖动物物种特有的。引进的牛蛙单倍型多样性最高牛蛙一般来说，Bd公司在对日本两栖动物的实地调查中发现发病率较低，没有证据表明感染牛蛙居住地区的发病率增加。然而，Bd公司在本地蝾螈中发病率很高日本安德里亚斯和剑尾鱼。尽管很高Bd公司圈养或野生动物的乳糜菌病发病率、症状尚未报告刺参，表明Bd公司特定于的菌株刺参与该宿主蝾螈种有长期的共生关系。此外，这些作者报告发现了Bd公司福尔马林固定、乙醇保存的博物馆标本中的感染日本血吸虫早在1902年收集。高度多样性和明显的长期无症状Bd公司日本本土两栖类物种的感染导致Goka等人（2009年）假设Bd公司可能出现在亚洲。

提出了两个假设来解释Bd公司传播：首先，它是一种新的病原体，通过人类介导传播到新的宿主物种和新的地理区域（Berger等人，1999；Daszak等人，1999）；第二，它是一种地方性病原体，由于环境变化，其毒性更强或两栖动物对其更敏感（Rachowicz等人，2005年；Pounds等人，2006年）。证据的平衡支持新的病原体假说，详情如下。

正如Fisher等人（2009年）指出的那样，新的病原体假说也得到了以下事实的支持：Bd公司并不是普遍分布的，已经在发生两栖动物灾难性减少的几个地方确定了引入前沿（例如，澳大利亚：Laurance等人，1996年，Berger等人，1998年；中美洲：Berger等人1998年，Lips等人，2006年；南美洲：Lips等人2008年），在野外（例如，Cunningham等人2007；Garner等人2006；Walker等人2008）和全球商业贸易（例如，Mazzoni等人2003；Fisher和Garner 2007）中都发现了可作为病原体传播媒介的受感染两栖动物。此外，59个基因的序列和杂合性分析Bd公司来自世界各地的菌株与单倍体无性繁殖（克隆）二倍体谱系的全球传播一致（James等人，2009年）。尽管抽样Bd公司来自非洲、美洲、澳大利亚和欧洲的基因型，目前还没有明确的系统发育特征Bd公司可能起源于此（James等人，2009年）。对来自墨西哥、哥斯达黎加和危地马拉的博物馆标本进行的PCR分析表明Bd公司感染与已知两栖动物数量下降的时期一致，但在该时期之前采集的标本中未检测到感染（Cheng等人，2011年）。在中美洲和南美洲，曾经Bd公司迁移到一个新的地区，两栖动物群落已经崩溃；在不需要引起气候变化的情况下，暴露于幼稚宿主群体似乎就足够了（Lips等人，2008年；Cheng等人，2011年）。

还支持新的病原体假说，反对气候变化可能加剧的观点Bd公司Skerratt等人（2007年）指出，澳大利亚两栖动物数量减少的时间似乎与特定的气候事件无关；澳大利亚的季节性温度波动大于气候变化的建议值；昆士兰两栖动物中乳糜菌病的流行率正在下降Bd公司尽管气候变暖和干旱，但现在仍然是地方病。此外，Vredenburg等人（2010年）没有检测到Bd公司在内华达山脉人口的密集采样中黄腿蛙和山脉蛙在消亡之前，但有一次Bd公司检测到感染后，感染的流行率和强度都迅速增加，一旦一只青蛙感染了约10000个游动孢子，就会导致死亡。Walker等人（2010年）发现Bd公司是一种新的病原体，最近在西班牙比利牛斯山脉引入并在当地传播，但伊比利亚半岛可能发生了多次引入或一次古代引入，其中至少一次最有可能来自北美（基于基因型的系统发育分析）。

那些支持地方病原体假说的人指出Bd公司在出现下降之前，在一些地区已经存在了很长一段时间，在某些情况下长达几十年（日本：Goka等人，2009年；南非：Weldon等人，2004年；加拿大：Ouellet等人，2005年）；那个Bd公司和乳糜菌病的分布受到环境变量的强烈影响（例如，参见Ron 2005，了解Bd公司Hale等人，2005年塔拉胡马雷蛙); 气候变化与乳糜菌病之间存在一些可测量的联系（Pounds等人，2006年；Bosch等人，2007年）；气候变化和身体状况之间也存在可测量的联系，导致雌性两栖动物的生存率/适应力下降，并增加对病原体的敏感性（雷丁，2007年）。Walker等人（2010年）发现病原体(Bd公司)伊比利亚的存在并不依赖于环境变量，但该疾病（乳糜菌病）的存在对环境变量（最低温度、平均太阳辐射）的依赖性较弱，并且与较高的海拔高度（>1600 m asl）有较强的相关性。


四、 情况如何Bd公司传播？

有充分证据表明Bd公司它是通过人类活动传播的，但到目前为止，还没有具体证据表明它是如何在环境中自然传播的（例如，是否通过风力传播，是否通过备用主机传播，等等）。Bd公司（以及其他两栖类病原体，如蛙病毒）是国际两栖类贸易的无意受益者（Fisher和Garner，2007年）。它是通过全球出口供人类食用的物种携带的（主要是牛蛙、，牛蛙; 见Mazzoni等人，2003年；Schloegel等人，2009年；Bai等人，2010年）、国际宠物贸易（例如，Une等人，2008年）和科学贸易(非洲爪蟾、Weldon等人，2004年，Weldon，2005年；热带志留纳，Reed等人，2005年）。它也可能通过诱饵交易传播（主要是幼年的东方虎蝾螈，虎纹钝口螈在美国境内出口）；Picco和Collins（2008）报道Bd公司-九家鱼饵店中有三家的水样呈阳性，尽管他们指出三家中只有一家Bd公司-阳性水样的虎蝾螈幼体足部拭子也有相应的阳性PCR检测。

Bd公司也有可能通过无意中转移到农产品中的两栖动物传播。Obendorf（2005）根据他对位于塔斯马尼亚州朗塞斯顿的DPIPWE（初级工业、公园、水和环境部）动物健康实验室报告的一例病理学病例的审查，得出结论认为，至少早在1993年塔斯马尼亚就发生了这种人媒传播。被俘虏的殖民地Litoria洞穴塔斯马尼亚树蛙（Tasmanian tree frog）在从澳大利亚大陆进口的香蕉盒中发现一只树蛙后，出现与乳糜菌病一致的症状（嗜睡、严重皮肤损伤、死亡）（Obendorf 2005）。McDonald和Speare（2000年）估计，每年有多达50000只青蛙在农产品中意外携带。O'Dwyer等人（2000年）估计，每年至少有7130只青蛙通过香蕉运输到澳大利亚新南威尔士州，其中至少70%在目的地被释放。Hardman（2001；Obendorf 2005引用）对塔斯马尼亚州霍巴特地区的商业香蕉批发商和零售商进行了调查，估计仅在霍巴特州的香蕉盒里就发现了28-90只青蛙（还有更多的青蛙可能没有被发现）。此外，73%的Hardman（2001年）调查受访者表示，在农产品中发现的青蛙要么由员工饲养，要么被释放到周围的城市地区、湿地、灌木丛或公园。

人类介导的Bd公司来自塔斯马尼亚。塔斯马尼亚荒野世界遗产区内，Bd公司分布与碎石路的存在密切相关（Pauza和Driessen，2008年）。特别是，卡车定期用当地湿地的水喷洒碎石路；这些水随后流入碎石路附近的湿地（Pauza和Driessen，2008年）。此外，湿土被运输用于道路维护。所有这些活动都有可能Bd公司游动孢子和/或Bd公司-感染两栖类成虫/蝌蚪进入新区域。（Pauza和Driessen，2008年）。

此外，气候变化可能加剧Bd公司间接传播；随着气温变暖，许多两栖动物物种（例如，Bustamante等人，2005年；Raxworthy等人，2008年）以及植物、昆虫和其他动物物种的海拔范围都在向上扩展（或转移）（有关气候变化导致的海拔范围扩展的一般综述，请参阅Parmesan 2006）。两栖类物种可以在不致于疾病的情况下感染糜烂Bd公司当它们在海拔上向上移动时进入新的区域（Seimon等人，2006年）。在秘鲁安第斯山脉，最近的冰川消融使两栖动物在海拔创纪录的高海拔池塘定居；一种无尾类(红色胸膜水肿)使这些池塘的试验呈阳性Bd公司但没有显示出乳糜菌病的迹象，而另一种定植物种的检测呈阳性Bd公司(马尔莫拉Telmatobius marmoratus)经历了死亡（Seimon等人，2006年）。



五、在什么条件下Bd公司增长？

在文化方面，Bd公司能够在4-25°C的温度和4-8的pH值范围内生长（Piotrowski等人，2004年）。培养基中pH值为6-7时生长最快（Piotrowski等人，2004年）。Bd公司在12-23°C（约54-73°F）的温度下，致病性和毒力最高，在27°C（81°F）以上的温度下致病性和毒性均显著下降（Berger等人，1998年、2004年；Longcore等人，1999年；Woodhams等人，2003年；Carey等人，2006年）。

实验对比Bd公司在高压处理的蛇皮上生长与含有1%角蛋白和1%胰蛋白胨的琼脂上生长相比，与在蒸馏水中含有1%胰蛋白结石的液体培养基相比，液体培养基的支持效果最好Bd公司培养中的生长（Piotrowski等人，2004年）。通常使用TGhL肉汤，其水中含有胰蛋白胨、明胶水解物和乳糖（例如，Retalick和Miera 2007）。然而，有人认为，随着时间的推移，在人工培养基中重复传代会导致实验室保存的毒力丧失Bd公司菌株（Berger等人，2005年；Retalick和Miera，2007年）。对文献的研究表明Bd公司很少在实验室里用青蛙皮传代；也许这应该改变。比较的基因表达模式的初步结果Bd公司在蒸压青蛙皮和1%胰蛋白胨溶液上生长，发现57%的基因表现出差异表达，而在Bd公司生长在脱落的蛇皮上，而不是1%的胰蛋白胨溶液（Rosenblum，2009年）。

Bd公司一直被认为是Chytridiomycota的水生成员，因为其水生游动孢子阶段需要水。通过去除液体培养基并将打开的培养板置于生物危害品层流罩中至少三个小时，在96个培养皿中对单层培养物进行干燥，可杀死100%的Bd公司游动孢子（Johnson等人，2003年）。然而，一些菌株Bd公司可以在湿度仅为10%的预消毒土壤中生存12周（Johnson和Speare，2005年）。这种真菌还可以在预先消毒的沙子和鸟羽毛中存活长达12周（Johnson和Speare，2005年）。目前的研究重点是：Bd公司可以形成生物膜的一部分（被外多糖基质包裹的微生物群落），这可能有助于真菌在高温下生存（Carty，2009年）。

检测Bd公司然而，在水中取样已经证明是困难的。在中美洲的一个地点（巴拿马El CopÈ），观察到两栖动物的急剧死亡与Bd公司对死亡动物的感染，Bd公司在1 L水样中未检测到（Lips等人，2006年）。然而，这可能是由于低游动孢子浓度导致的采样错误，而不是完全缺乏游动孢子（Lips等人，2009年）。Cossel和Lindquist（2009）建议需要4 L的样品来检测Bd公司游动孢子；来自巴拿马奇里基的1升水样，Bd公司含量低于每升1-2个游动孢子。当测试4升的较大水样时，Cossel和Lindquist（2009）发现存在可检测水平的游动孢子（平均每升5.1-7.5个游动孢子）。


VI、 有什么模式吗Bd公司流行率或Bd公司-导致死亡？

最耐寒的蛙类是亚热带或热带河流繁殖者，生长在温度较低的中高海拔地区。然而，在北美和西班牙，Bd公司也影响了冬季温度降至冰点的高山物种（Bosch等人，2001年；Muths等人，2003年；Scherer等人，2005年）。

Bd公司出现在原始、偏远的山顶栖息地以及更多受干扰的栖息地。真菌有水生生命阶段（游动孢子），因此可能通过水道传播（但也可能通过其他方式传播；见下文关于内华达山脉两栖动物的段落）。在中美洲Bd公司从哥斯达黎加向东南部推进，导致两栖动物相继死亡（Lips等人，2006年）。影响是灾难性的（Lips等人，2003b）。一次Bd公司进入一个地区，在四到六个月内，50%以上的当地两栖动物物种被彻底灭绝；即使是存活下来的物种，80%的个体也会死亡（Lips等人，2003b）。溪流相关两栖类物种受到的影响最为迅速和严重，病原体随后传播到陆生两栖类（Lips等人，2006年）。

在内华达山脉（美国加利福尼亚州），Bd公司导致了Sierra Madre黄卵蛙的高死亡率(黄腿蛙)和内华达山脉的黄腿蛙种群(山脉蛙). 每年Bd公司已经在六十湖流域内发展到新的湖泊，消灭了青蛙种群。然而，与中美洲和内华达山脉单一湖盆内的情况相比Bd公司内华达山脉湖盆之间的传播一直在上游，这意味着陆路传播（见Vredenburg等人，2010年）。目前尚不清楚是什么促进了Bd公司内华达山脉，但目前由弗伦登堡实验室旧金山州立大学正在关注红假单胞菌，太平洋树蛙，作为Bd公司Padgett-Flohr和Hopkins（2009年）提出。

Bd公司据报道，温带地区的流行是季节性的，在寒冷月份发病率较高，在温暖月份发病率较低。在澳大利亚，许多研究人员报告称，青蛙在冬季月份的乳糜菌病发病率较高（例如，西澳大利亚州的Aplin和Kirkpatrick 2000；昆士兰北部的Retalick等人2004；McDonald等人2005；昆士兰州北部的Woodhams和Alford 2005；昆士兰州东南部的Kriger和Hero 2007）。虽然蝌蚪一般不会死于乳糜菌病Bd公司塔斯马尼亚岛的蝌蚪感染，在冬季末和春季初观察到较高的流行率和严重的口腔糜烂病损害，但夏末相同地点蝌蚪的流行率较低，损害程度较低（Obendorf，2005年）。同样，在加拿大魁北克Bd公司Ouellet等人（2005年）报告了夏季月份的感染流行率。在美国，Pearl等人（2007年）的报告更高Bd公司俄勒冈州和华盛顿州冬季和春季实地调查期间的感染流行率。据报道，在亚利桑那州，三种当地青蛙遭受了痛苦Bd公司-仅在冬季发生相关死亡事件(智利林蛙,雅瓦巴蛙,Hyla arenicolor公司); 冬季空气温度估计为16.9℃，水温度估计为12.9℃，而夏季空气和水的平均温度分别为30.2℃和25.8℃（Bradley等人，2002年）。这种季节性与Bd公司实验室测试，其中Bd公司研究发现，在12-23°C（约54-73°F）时生长最好，在27°C（81°F）以上，毒力和致病性都会下降。

Bd公司-相关死亡率也可能受到微生境热条件的影响（Retalick等人，2004年）。Retalick等人（2004年）指出恩格尔牛趾虫已被灭绝Bd公司，少数残余人群持续患有慢性病Bd公司感染。这些青蛙被灭绝的地方（尤金拉国家公园的杜洛迈瀑布和树蕨溪）有阴凉、凉爽的小溪栖息地，冬季温度（最高23°C的空气/水）在最佳温度范围内Bd公司增长。相比之下，这些青蛙继续生存的地方Bd公司感染（Rawson Creek）是较温暖的栖息地；较大的溪流有更大的树冠间隙，因此栖息地阳光更充足，加上夏季温度更高，高达37°C（Retalick等人，2004年），可能冬季温度也更高。



七、。做Bd公司杀死所有类型的两栖动物（青蛙、蝾螈、盲肠动物）？受影响最大和最小的物种是什么？哪些生命阶段受到影响？

乳糜菌病似乎比蝾螈对青蛙的影响更大，尽管对蝾螈的研究要少得多，新数据表明，新热带蝾螈也可能因乳糜菌病而死亡（Rovito等人，2009年；Cheng等人，2011年）。对于青蛙来说，生活和/或繁殖在高海拔永久性水域（尤其是溪流）中的物种似乎最容易受到影响。几乎没有关于盲肠类糜烂感染的数据，盲肠类大多是陆生穴居动物（尽管有些是水生或半水生动物），很少见到。关于圈养盲肠杆菌的单一（未发表）摘要表明，至少有一种水生盲肠杆菌(打字机（Raphael和Pramuk，2007年，未出版）。

确认的灭绝原因Bd公司包括尖嘴日蛙(尖吻牛指虫; Schloegel等人，2005年），北部胃孵化蛙(卵黄黄颡鱼; Retalick等人，2004年）和南部胃孵化蛙(胃育溪蟾; Retalick等人，2004年），全部在澳大利亚。在中美洲，Bd公司强烈怀疑哥斯达黎加金蟾的灭绝(峡谷周围蟾蜍)，尽管这一点尚未得到证实。由于该物种仅出现在偏远的高海拔保护区内，每年仅在三周的繁殖季节出现大蟾蜍存在于短暂的急剧衰退和灭绝时期（1988-1989）。然而，对哥斯达黎加附近地区其他无尾类动物的保存标本进行的检查表明，1986年收集的大量标本中都存在糜烂感染（Puschendorf等人，2006a）。

最坚硬的分类群是无尾类阿特洛普斯（在中美洲和南美洲发现的河豚繁殖），由于人口下降而遭到破坏（La Marca等人，2005年）。Chytridomycosis被认为是该属物种减少和消失的主要因素（La Marca等人，2005年）。大多数阿特洛普斯物种是当地特有种，通常仅限于中高海拔溪流（1500-3000 m a.s.l.）沿线非常有限的区域（La Marca et al.2005），尽管一些物种的海拔低至海平面，其他物种的海拔高至永久积雪（lˆtters 2007）。在113种已描述和推测的物种中，至少有30种似乎已灭绝，在所有已知地点消失至少8年（La Marca等人，2005年）。只有52个幸存物种有足够的数据来评估种群趋势；其中，81%（52个中的42个）的人口规模至少减少了一半（La Marca等人，2005年）。海拔较高的物种（>1000 m a.s.l.）表现最差，75%（28个中的21个）已完全消失（La Marca等人，2005年）。尽管栖息地损失发生在阿特洛属物种，它似乎不是大多数物种数量下降的主要因素阿特洛普斯物种；尽管在保护区出现了22种物种，但数量仍有所下降（La Marca等人，2005年）。相反，Luger等人（2008年）发现阿特洛普斯·胡格莫迪来自苏里南和圭亚那，没有下降，也没有显示出糜烂感染的证据。

一些蛙类对乳糜菌病的死亡不太敏感，可能是携带者。已被提议作为Bd公司（中美洲物种见下文）包括牛蛙，牛蛙（Daszak等人，2004年）；北豹蛙，淡色蛙（Woodhams等人，2008年）；非洲爪蛙，非洲爪蟾（Parker等人，2002年；Weldon等人，2004年），《太平洋树报》，红假单胞菌（Padgett-Flohr和Hopkins，2009年），波多黎各大学，多明尼加树蛙（Beard和O'Neill，2005年），在澳大利亚利托里亚·莱苏里复杂(石克里克蛙和L.荣格; Retalick等人，2004年），以及塔斯马尼亚物种伊文吉利托里亚（Obendorf 2005；Ricardo 2006）和显色革兰（Obendorf，2005年）。牛蛙原产于北美东部，但作为实验室和食用物种出口到世界各地；北豹蛙原产于美国和加拿大，但作为实验室物种出口；非洲爪蛙原产于非洲，但作为实验室物种出口到世界各地；太平洋树蛙广泛分布于美国西部、加拿大和墨西哥；科基是一种入侵物种，在夏威夷和其他地方已经很成熟。在澳大利亚，石克里克蛙/容盖乳杆菌显示了乳糜吸虫感染的高流行率，并且在生命阶段、地点或季节之间没有差异。此外，该物种群的数量没有与其他物种的数量同时下降（即恩格尔牛趾虫和卵黄黄颡鱼). 在塔斯马尼亚岛，里卡多（2006）发现了这名俘虏伊文吉利托里亚变态能够耐受高水平的Bd公司变态后感染至少31天。中美洲蛙类，可能携带Bd公司包括红树蛙(红眼树蛙)甘蔗蟾蜍(海蟾蜍)黄树蛙(小头树突)，烟雾弥漫的丛林蛙(五趾细趾蟾)，蒙面树蛙(淡色菝葜)，以及淡色蛙)（Lips等人，2006年）。上述所有中美洲物种仍以高丰度存在于巴拿马圣菲遗址（El Copé以西）Bd公司感染后Bd公司-伴随而来的物种数量下降已经使那里的其他两栖动物物种数量锐减（Lips等人，2006年）。此外Bd公司-抗性树松岛百合（墨西哥、危地马拉）被提议作为Bd公司从而加剧了溴化蝾螈的感染（Cheng等人，2011年）。

Bd公司易感性也因生活阶段而异。青蛙蝌蚪，Bd公司只会感染口器（蝌蚪身体中唯一含有角蛋白的部分），对口腔造成损伤，但不会导致直接死亡。当蝌蚪经历蜕变并开始变成小青蛙时，口器就会丢失。然而，外部皮肤变得更加角质化，真菌随后能够扩散到幼小青蛙的身体上（Marantelli等人，2004年；Rachowicz和Vredenburg，2004年）。青蛙皮肤的组织学检查显示Bd公司感染主要发生在青蛙的下侧，尤其是盆腔“饮水贴片”和手指（Berger等人，1998年）。在所有生命阶段中，新变质的蛙类似乎死亡率最高（例如，Lamirande和Nichols 2002）。由于蝌蚪一般不会死于Bd公司感染，它们也可能是Bd公司; 特别是，蝌蚪到蝌蚪的转移可能有助于维持Bd公司在环境中，尤其是对于诸如利托里亚·埃文吉在永久性静水环境中越冬（Obendorf 2005）。

关于蝾螈和乳糜菌病，对蝾螈的研究少于对青蛙的研究。近来中美洲蝾螈的大规模不明原因的数量下降与衣原体病有关（Lips等人，2006年；Rovito等人，2009年；Cheng等人，2011年）。与青蛙一样，一些蝾螈物种似乎不太容易死于乳糜菌病，因此可能是Bd公司（例如，东方虎蝾螈(虎纹钝口螈)（Davidson等人，2003年）。因此，同话题蝾螈和青蛙（发生在同一栖息地中的蝾螈）可能会相互充当病原体库（Davidson等人，2003年）。相反，Bd公司-抗药性青蛙可能将病原体传播给易感蝾螈；在中美洲松岛百合; 这Bd公司-抗药性青蛙在水中繁殖，但在凤梨中花费了相当长的时间，在那里它可能会将糜烂真菌转移到凤梨蝾螈身上（Cheng等人，2011年）。能够在夏天进行夏眠的陆生蝾螈可能不太容易受到糜烂感染；实验感染的衰减蝙蝠在潮湿的条件下被关在实验室中死亡，但在干燥的条件下可以摆脱感染（Weinstein，2009年）。

Bd公司是嗜角性的，蝾螈对Bd公司与青蛙幼虫不同，大多数蝾螈的幼虫没有角质化的口器，这一事实也可能影响野生感染（Pough等人，2004年）。例外情况包括蝾螈科的蝾螈幼虫，以及大多数蝾螈科长有角质化的颚鞘（Altig和Ireland 1984）；因此，如果有角质化的口器，则更容易受到Bd公司，双齿齿类和无齿齿类应该受到更大的影响Bd公司而不是其他种类的蝾螈。到目前为止，还没有足够的数据表明这是否属实。与蝾螈幼虫相比，蝾螈的幼虫是食肉性的，有真牙（Pough等人，2004年），大多数类型的蝌蚪（青蛙幼虫）是草食性的，通常没有牙齿，相反，它们有角质化的口器，专门用于从底物上刮（刮）藻类（McDiarmid和Altig，1999年）。

还有另一个可能影响较低水平的因素Bd公司蝾螈的流行是，许多蝾螈物种在陆地上直接发育，卵产在陆地上，直接孵化成幼蝾螈，绕过水生幼虫阶段（从而避免接触水生游动孢子阶段）。然而，陆生直接发育并不排除糜烂感染或随后死亡。在Cheng等人（2011年）的一项研究中，成人麻风假单胞菌在野外发现感染者和成人红毛Bolitoglossa rufescens红毛Bolitoglossa rufescens被实验感染Bd公司在实验室中；一旦感染强度达到约10000个游动孢子，所有受感染的蝾螈都会死亡。

对糜烂的抗性可能是由遗传免疫差异、抗微生物皮肤菌群的差异以及该物种是否能够进行行为缓解（寻找温暖和/或干燥的环境）所致。Weinstein（2009）的研究结果表明，至少有一种多头蝾螈(衰减蝙蝠)在实验室中死亡率为100%Bd公司感染，但如果保持在模拟夏季夏眠的较潮湿和干燥条件下，则能够清除感染。Richards-Zawacki（2009）专注于现场感染巴拿马金蛙研究表明，较高的体温与Bd公司-在野外调查受感染的青蛙。



八、。如何Bd公司杀死两栖动物？

感染强度是关键。Vredenburg等人（2010年）发现，曾经的青蛙(黄腿蛙)达到约10000个真菌游动孢子的感染水平，随后死亡。蝾螈(麻风假单胞菌和鲁费森氏Bolitoglossa rufescens)一旦感染阈值达到10000，也会死亡Bd公司达到游动孢子（Cheng等人，2011年）。关于死亡的实际机制，Bd公司两栖动物皮肤的感染可以通过损害电解质运输到发生心脏骤停的程度来杀死两栖动物（Voyles等人，2009）。在两栖动物中，皮肤是最重要的器官之一，参与呼吸、水合、渗透调节和体温调节（Duellman和Trueb，1986年）。两栖类通常有薄而可渗透的皮肤，许多物种至少部分通过皮肤呼吸；一些两栖动物没有肺，必须完全通过皮肤呼吸（Duellman和Trueb，1986年）。两栖动物也通过皮肤吸收水分和电解质；青蛙这样做尤其是通过腹部的一块特殊皮肤来实现的，称为“骨盆贴片”或“饮水贴片”，它特别容易受到Bd公司感染（Berger等人，1998年）。严重感染的青蛙Bd公司某些电解质（钠、钾、镁和氯化物）的血液水平异常低（Voyles等人，2007年，Voyles等，2009年）。当通过给受感染的青蛙口服电解质溶液来恢复电解质时(蓝色立陶宛)濒临死亡时，青蛙恢复了翻正反射，在某些情况下还恢复了跳跃能力（Voyles等人，2009年）。尽管实验中的所有青蛙都继续蜕皮，最终死于Bd公司感染后，死亡延迟了约20小时Bd公司-感染了用电解质处理过的青蛙（Voyles等人，2009年）。目前尚不清楚电解质运输中断是由真菌毒素引起的（Berger等人，1998年，Voyles等人，2009年），还是由两栖动物皮肤细胞的物理损伤引起的（Voyles et al.2009年）。

Bd公司感染通常也会导致过度角化（皮肤最外层角化层的“增厚”，其厚度可能是正常的2-5倍（Longcore等人，1999年），也可能是正常厚度的30倍（Berger等人，1998年）。严重感染可导致受感染皮肤的脱落（脱落）增加（Berger等人，1998年）。变形后青蛙（幼年和成年）严重乳糜菌病的临床症状包括厌食、嗜睡、后腿伸展时姿势异常以及缺乏翻正反射（Berger等人，2005年）。死亡率和死亡时间Bd公司接触和感染受病原体剂量、温度、年龄和生命阶段、物种和Bd公司菌株（Berger等人，1999年、2004年；Lamirande和Nichols，2002年；Woodhams等人，2003年；Rachowicz和Vredenburg，2004年；Berger等，2005年）。

在青蛙蝌蚪中，乳糜菌只感染口器（蝌蚪身体中唯一含有角蛋白的部分），导致色素脱失，有时会损坏口腔（Rachowicz和Vredenburg，2004年；Marantelli等人，2004年）。虽然蝌蚪通常不会被Bd公司乳糜菌感染可间接导致死亡或生存率降低。Bd公司感染，尤其是口器的损伤可能会妨碍进食，从而影响生长发育。反过来，生长和发育较慢会导致变形时体积变小，如果幼蛙不屈服于乳糜真菌病，则可能影响存活（Parris 2004）。

当蝌蚪经历蜕变并开始变成小青蛙时，口器就会丢失。然而，外部皮肤变得更加角质化，真菌游动孢子随后能够进入幼蛙身体上方的皮肤细胞并囊化，特别是在腹部和盆腔饮水贴片上（Marantelli等人，2004年；Rachowicz和Vredenburg，2004年）。新变质的蛙类似乎死亡率最高（例如，Lamirande和Nichols，2002年）。


九、 当Bd公司到达一个区域？当Bd公司导致两栖动物灭绝？

1998年，由Karen Lips博士在巴拿马的El CopÉ建立了一个研究区，监测河岸（河流相关）和陆地样带沿线的两栖动物，并进行日间和夜间调查。1998年至2004年的六年期间，埃尔科普的两栖动物物种丰富度沿河岸样带增加，沿陆地样带相对稳定。从2000年开始，对两栖动物进行了系统的乳糜菌病监测，但没有发现任何病例。2004年9月初，河岸样带两栖动物的丰富度和密度突然开始下降。2004年9月23日，aBd公司-发现了受感染的青蛙。不到两周后，2004年10月4日，第一只两栖动物死亡Bd公司已找到。在四到六个月内，50%的当地两栖动物物种被彻底灭绝，其余物种的数量约为碰撞前水平的20%。重新克隆预计需要15年或更长时间（Lips等人，2008年）。

一次Bd公司到达一个区域，它以波前的形式传播。在中美洲，乳糜菌病已向南发展，两栖动物种群相继减少（Lips等人，2006年；Cheng等人，2011年）。在南美洲北部，乳糜菌病似乎以四种不同的方式从至少两个不同的传入中心（一个在厄瓜多尔，一个在委内瑞拉；见Lips等人2008）传播。在澳大利亚东部，Bd公司从昆士兰南部向北和向南扩张；在澳大利亚西部，Bd公司似乎是从珀斯南部的一个地点向外扩散的（Skerratt等人，2007年）。在北美，对Bd公司入侵和蔓延通过加利福尼亚州内华达山脉三个高海拔湖盆（Milestone、Sixty lake和Barrett Lakes），相隔20-50公里，也揭示了感染和两栖动物种群灭绝的波浪型模式（Vredenburg等人，2010年）。采样（每个1-12倍黄腿蛙60湖流域每年的人口，1-5倍黄腿蛙Milestone Basin每年的人口数量，以及1x/山脉蛙巴雷特湖盆每年的人口）通过皮肤拭子PCR分析未检测到Bd公司1996年至2004年间。2004年6月，Bd公司在Milestone Basin被发现，在那里几乎传播到所有黄腿蛙一年内的人口。2004年8月，Bd公司在六十湖盆地发现，2005年7月在巴雷特湖盆地发现。在这两个较大的盆地中，Bd公司在最初检测的3-5年内，已传播到所有蛙类种群。Milestone Basin的成年青蛙数量下降了99%（之前为1680只Bd公司2008年达到22人；到2008年，13个种群中有9个灭绝了），其中98%在60湖流域（从2193到47；27个种群灭绝），92%在巴雷特湖盆（从5588到436；33个种群灭绝了）。考虑到传播速度，预计2010-2013年间，随着剩余的蝌蚪变质并感染Bd公司.

来自内华达山脉八个集中采样人口的数据黄腿蛙表明当首次检测到感染时Bd公司患病率和感染强度较低（Vredenburg等人，2010年）。这些人群的感染流行率迅速上升，在大多数人群中，不到50天就达到100%感染，最长的时间约为375天。除一人外，所有抽样人群的患病率均达到100%Bd公司感染率为97%。感染强度呈指数级增加，青蛙一旦达到约10000个真菌游动孢子的感染水平，就会死亡。即使在第二年夏天最后存活的蛙类中，感染率和感染强度仍然很高（这些蛙类是以蝌蚪的形式越冬后变态的亚成虫）。

国家科学基金会资助的TADS项目（溪流中的热带两栖动物减少）的研究人员一直在调查当青蛙和蝌蚪不再存在时溪流群落会发生什么。一旦青蛙和蝌蚪死亡，藻类就会生长，氮水平也会发生变化，从而在溪流食物网上下产生级联效应（Connelly等人，2008年）。吃蛙的蛇已经灭绝，而其他蛇却在增加。在西非农村地区，Mohneke和Rˆdel（2009）指出，淡水生态系统的改变导致无尾两栖类幼虫的损失，可能会对人类和牲畜造成重大后果；蝌蚪的消失影响了淡水生态的许多方面，其后果可能包括疟疾的增加和溪流健康的显著下降。


十、产品的生命周期是什么Bd公司?

这个Bd公司生命周期由两个不同的生命阶段组成，即感染性鞭毛游动孢子和叶状体，它们可以产生一个或多个称为游动孢子囊的无柄生殖体（游动孢子在那里发育）（Longcore等人，1999年；Berger等人，2005年）。在22°C时，寿命周期在体外需要4到5天才能完成（Berger等人，2005年）。游动孢子是自由生活的，它带着尾巴状的鞭毛在水中游动，直到接触到两栖动物的皮肤，然后进入角化皮肤细胞（在表皮的颗粒层或角质层内）和细胞内的囊泡（Longcore等人，1999年）。游动孢子如何侵入皮肤细胞（并逃避潜在的宿主免疫防御）尚不清楚，但已经观察到细胞质延伸从皮肤细胞中伸出并收缩Bd公司游动孢子（Longcore等人，1999年）。

一旦游动孢子囊在皮肤细胞内形成，它就开始发育到第二阶段Bd公司生命周期，叶状体，产生游动孢子囊（Longcore等人，1999年）。叶状体可以是单中心的，发育成单个游动孢子囊，也可以是群体性的，在那里内部隔膜发育，然后每个叶状体片段发育成游动孢子腔（Longcore等人，1999年）。从每个游动孢子囊中，线状根瘤突起（Longcore等人，1999年）。在真菌中，根瘤起着锚定作用，也可能释放消化酶和吸收消化的有机物质，这取决于真菌的种类。此外，假根可以用于繁殖（透明镰刀菌Miller和Dylowski，1981年）。在每个Bd公司游动孢子囊，多个新游动孢子开始发育，一个或多个堵塞的排泄管或乳头从游动孢子腔延伸到皮肤细胞表面（Longcore等人，1999年）。游动孢子成熟后，堵塞物溶解或腐烂，游动孢子随后通过排放管释放到周围的水中（Longcore等人，1999年）。动植物既可以游走，也可以重新感染同一种动物。

Bd公司是二倍体，主要表现为有丝分裂繁殖（即克隆繁殖），这是基于世界各地菌株的DNA变异水平极低以及存在单一位点Bd公司基因型以及多个位点的高水平固定杂合度Bd公司基因型（Morehouse等人，2003年；Morgan等人，2007年）。由于没有发现高水平的纯合性，菌株显然没有自交（Morgan等人，2007年）。然而，Morgan等人（2007）无法拒绝两种基因型多样性的重组的无效假设Bd公司网站，并指出这表明Bd公司可能能够异交，尽管与克隆繁殖相比，异交速率较低。Fisher等人（2009年）指出，另一种解释可能是，不同的种群可能会以不同的速率经历杂合性的丧失，从而导致人们误以为有性繁殖正在发生。在其他种类的乳糜菌中，有性繁殖通常会导致厚壁，抗性孢子囊菌（Sparrow 1960；Miller和Dylewski 1981），尽管尚未证明这种抗性孢子囊存在于Bd公司（Longcore等人，1999年；Berger等人，2005年）。自Bd公司是二倍体，具有高杂合度和低序列多样性，这表明它可能是由亲缘关系密切的亲本菌株和杂合菌株之间的交配造成的（Fisher等人，2009年）。

尚未确定如何Bd公司分散。如前所述，到目前为止，还没有发现抗药性孢子的生活阶段Bd公司（Longcore等人，1999年；Berger等人，2005年），尽管其他种类的糜烂菌要么有耐干燥和耐热的孢子，要么有耐孢子囊，例如糜烂菌玫瑰根霉菌). 因此，人们假设Bd公司传播必须通过受感染的两栖动物（成虫或幼虫）、水中的游动孢子或其他宿主进行（Morgan等人，2007年）。受感染的两栖动物可以很明显地驱散Bd公司特别是那些携带Bd公司但对乳糜菌病的发病率或死亡率的影响较小（例如，Parris等人，2004年，见下文）。目前尚不清楚游动孢子是否可以作为传播阶段，因为在两栖动物宿主皮肤细胞中包绕之前，游动孢子在培养物中只能游动很短的距离（<2厘米），并且似乎寿命很短，只有5%的游动孢子24小时仍在游动（Piotrowski等人，2004年）。然而，Johnson和Speare（2003）发现，动孢子在自来水中可以存活三周，在去离子水中可以存活四周，在高压灭菌的湖水中可以存活七周。Parris等人（2004年）发现游动孢子可以存活并感染南方豹蛙游动孢子形成后的蝌蚪在介观水体中已经生存了至少六周，没有两栖动物宿主。许多Bd公司-相关死亡事件发生在海拔较高的地区；有人建议Bd公司可能会被风吹散，也许雾、云或雾中的水滴可能会传播游动孢子或Bd公司（Collins and Crump，2009年）。

关于替代（非两栖）宿主，已经提出了许多建议（昆虫、鸟类羽毛、澳大利亚水龙等），但没有一种得到确认（Johnson和Speare，2005年；Phillott等人，2009年）。目前尚不清楚如何Bd公司可能存在于除两栖动物宿主以外的环境中。有一份关于Bd公司-巴拿马死亡事件现场岩石底部的拭子呈阳性（Lips等人，2006年），但只有少数拭子检测为阳性Bd公司从该网站测试的许多DNA（John Woods，双鱼座分子，pers.comm.）。虽然Bd公司岩石下的DNA并不能证明除两栖动物外还存在活的游动孢子（Collins and Crump 2009），目前的研究表明Bd公司可能存在于生物膜中（Carty 2009）。也许Bd公司可能附着在受感染水生栖息地的树叶、树枝或碎片上运输（Collins和Crump，2009年）。有人认为，真菌在自然界中可以在角蛋白上腐烂存活，因为它可以在宿主死亡后在死青蛙皮肤上繁殖一代，但也观察到青蛙皮肤很快就会被侵占Bd公司似乎被卵菌真菌和细菌击败（Longcore等人，1999年）。


Bd公司生命周期

Bd生命周期

发件人Rosenblum等人（2008年）.
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有关更多信息，请参阅门生物学衣原体属



十一、。如何才能Bd公司是否检测到感染？

Bd公司当发现死亡或濒临死亡的青蛙时，就怀疑有感染（尽管其他病原体也可能导致死亡：参见两栖类网站两栖类疾病概述第页）。变形后青蛙（幼年和成年）严重乳糜菌病的临床症状包括食欲不振、嗜睡、后腿伸展时姿势异常以及缺乏翻正反射（Berger等人，2005年）；在里面热带Silurana tropicalis在垂死的青蛙中也观察到黑斑和缺乏粘液层（Parker等人，2002年）。如果有蝌蚪口器可以检查是否存在未着色区域（糜烂感染可导致蝌蚪口器失去深色）（Rachowicz和Vredenburg，2004年）。在蝾螈中，壶菌感染可能在腹面（腹部）上以小黑点的形式可见，并导致皮肤脱落（Davidson等人，2003年；Cummer等人，2005年；Bovero等人，2008年；Weinstein，2009年）。

Bd公司通常通过两种方式确认感染：首先，通过组织学（切片皮肤并寻找皮肤内是否存在糜烂虫游动孢子囊；参见Berger等人1998）和第二，通过擦拭两栖动物被认为已感染，并使用实时PCR检测是否存在糜烂DNA（参见Boyle等人2004，以及下文的更多信息）。嵌套PCR也用于检测Bd公司存在（第一轮PCR使用真菌特异性引物，第二轮PCR使用Bd公司-特异性引物；参见Annis等人2004），但定量实时PCR（也称为qPCR）更可取，因为它可以估计感染负荷。其他不太常用的检测方法Bd公司包括免疫组织化学（见Berger等人2002年，Van Ells等人2003年，Olsen等人2004年）和电子显微镜（见Berge等人2002年）。

直到最近，只有活标本（或尚未固定在防腐剂中的死标本）可以通过qPCR进行检测，而博物馆标本则必须使用组织学方法进行检测。Soto-Azat等人（2009年）能够使用qPCR检测Bd公司乙醇固定的两栖动物标本（试验前在EtOH中保存2-4年）感染，但福尔马林固定标本中未感染。然而，Walker等人（2008）能够检测到Bd公司通过qPCR对部分福尔马林固定标本进行DNA检测，在扩增前使用Qiagen DNeasy Blood and Tissue试剂盒清理DNA。随后，Cheng等人（2011）改进了该方法并成功检测到Bd公司高比例的样本样本中的感染被确定为Bd公司-组织学检查阳性；他们的数据表明Bd公司在已知两栖动物数量减少前几年从哥斯达黎加、危地马拉和墨西哥采集的标本中未检测到，但与减少时间大致一致。

还开发了一种新的快速方案，用于区分活的、能动的树枝状叶状巴氏杆菌使用由荧光染色剂SYBR 14和碘化丙啶组成的双色荧光分析法，从死亡动物体内提取游动孢子（Stockwell等人，2010年）。SYBR 14穿过完整的细胞膜，当它与核酸结合时发出绿色荧光。碘化丙啶只能通过受损的细胞膜（死亡/濒临死亡的细胞），当它与核酸结合时会发出红色荧光。因此，活的、活动的游动孢子染成绿色，而死亡或死亡的游动芽孢染成红色。


  1. 检测Bd公司组织学感染

    2. 白色树蛙皮肤切片的组织学(蓝色立陶宛)表现为重度糜烂感染。

    脚趾皮肤表面的扫描电子显微镜利托里亚·莱苏里表现为重度糜烂感染。
    图图例：
    一： 游动孢子囊的未成熟阶段。
    D： 含有游动孢子的成熟游动孢子囊可见。
    箭头：游动孢子囊排空后。
    E： 表皮。
    图来自Berger等人（1999）。    		 在每个上皮细胞的表面可以看到一个堵塞的放电纸（见箭头）。当游动孢子成熟时，塞子会溶解，从而能够排出。

    图来自Berger等人（2005）


  2. 检测Bd公司实时PCR检测活标本感染

    a.如何对动物进行测试，以确定它是否携带乳糜菌？

    通过擦拭成年或幼年动物的下侧收集样本（参见AmphibiaWeb视频教程（关于抽吸青蛙）。对于两栖类幼体蝌蚪口器应擦洗（有关蝌蚪口部擦洗的协议，请参见Retalick等人2006）。这个成人和青少年抽吸方案包括戴上手套，用无菌的小号Q-tip（参见抽汲方案用于订购信息）。如果存在糜烂游动孢子，游动孢子将粘附在Q-端。然后将Q-尖放入无菌、带标签的密封管中，直到可以提取DNA并通过实时PCR进行分析。



    3. b.什么是实时PCR？实时PCR如何评估感染负荷？

    一旦从拭子中提取出DNA，我们就可以分析Bd公司使用实时PCR（也称为qPCR）技术从两栖动物皮肤拭子中采集的游动孢子。实时PCR分析比较Bd公司样本中的DNA符合一套通用标准，其中包含已知数量的Bd公司DNA。下面您可以看到我们其中一个示例运行的输出。任何穿过绿色水平线的样本都为正Bd公司。放大过程中较早穿过该线的样本（在下图的左侧）具有更多Bd公司DNA，而那些越过界线的人则更少Bd公司DNA。


    实时PCR：来自弗伦登堡实验室在SFSU。


十二、。一旦青蛙和其他两栖动物感染了糜烂，有什么方法可以治愈它们吗？

受感染的野生两栖动物还没有治愈方法Bd公司（尽管一些物种比其他物种更不易受感染）。对圈养动物进行的大多数治疗（升高温度、增加盐度、各种抗真菌化学品、抗生素氯霉素和生物增强）在野外是不可能或不切实际的。利用天然两栖类皮肤抗真菌细菌进行生物增强以增强先天免疫防御能力是目前为止显示出一些前景的一种治疗方法。现已分离出几种两栖类皮肤寄居细菌，可抑制Bd公司（Harris等人，2006年；Woodhams等人，2007年）。抗肿瘤药物生物强化的初步试验-Bd公司皮肤细菌已在人工饲养条件下成功地在黄腿蛙、内华达山脉黄卵蛙（Harris等人，2009a）和红背蝾螈，东方红背蝾螈（Harris等人，2009b）。希望可以将一些野生个体圈养起来，并对其进行治疗，以可持续地降低对Bd公司，使足够的个体存活下来，以维持Bd公司-感染区域。在野外使用这种处理方法之前，还必须仔细考虑对当地生态系统中其他物种的潜在影响，因为之前尝试在其他系统中使用生物控制会产生灾难性影响（例如，进口甘蔗蟾蜍的灾难性影响(海蟾蜍)以控制农作物害虫）。然而，有先例表明，在农业环境中使用细菌扩增来控制疾病，而不会对其他非目标物种产生负面影响（Berg等人，2007年；Scherwinski等人，2008年，Harris等人，2009年引用），两栖动物的策略是只使用两栖动物皮肤上已经存在的细菌（Harris等人，2009a）。

黄腿蛙内华达山脉黄卵蛙Bd公司但个体群体表现出不同程度的敏感性。虽然大多数黄腿蛙在野生环境中，人群因乳糜菌病几乎全部死亡黄腿蛙尽管存在Bd公司（Rachowicz等人，2006年）。黄腿蛙持续存在的人口Bd公司具有较高比例的青蛙具有可检测到的皮肤抗真菌细菌（Woodhams等人，2007年）。测试生物强化是否会影响Bd公司-青少年诱发发病率和死亡率黄腿蛙（生命阶段最容易受到Bd公司)从野外采集的鸡蛋中圈养而成（Harris等人，2009年a）。在任何治疗之前，实验中的所有青蛙都被发现含有抗真菌细菌青黄色Janthinobacterium lividum（Harris等人，2009年a）。这种细菌产生抗真菌和抗-Bd公司代谢物紫精，但仅当存在于高密度时（Brucker等人，2008年）。生物强化利维杜姆导致暴露于Bd公司（Harris等人，2009年a）。只有在含有细菌的溶液中浸泡的青蛙紫色J皮肤上有紫罗兰素；经生物强化处理的青蛙都能生长、增重，并且在暴露于Bd公司而所有未经处理的青蛙都暴露于Bd公司被感染（随着时间的推移越来越严重），未能生长，体重减轻，在实验结束139天时，除一人外，其他人都已死亡（Harris等人，2009a）。目前还不知道保护的最长时间是什么Bd公司通过生物强化；细菌接种20周后，在处理过的青蛙皮肤上发现了紫精（Harris等人，2009a），但尚未公布更长时间间隔的测试结果。

在囚禁期间Bd公司试验取得了不同程度的成功：提高温度、增加盐度、各种抗真菌化学品、抗生素氯霉素和生物增强（通过涂抹两栖动物皮肤）某些种类的细菌具有抗真菌特性（参见Garner等人2009年关于这些不同治疗的一些参考，以及Young等人2007年）。目前还没有一种处理方法在不同物种间持续有效，但热处理目前被认为对圈养两栖动物有用（Young等人，2007年）。天然抗-Bd公司两栖类皮肤细菌也有希望（Harris等人，2009a，2009b）。Young等人（2007年）强烈建议将新获得的青蛙隔离在单独的容器中至少2个月，并在隔离期间定期检查疾病迹象，并对任何死亡动物进行尸检。皮肤拭子应在到达时和到达后7周收集，用于PCR检测是否存在Bd公司感染（Young等人，2007年）。

热处理可能被证明是处理圈养两栖动物及其围栏的最安全和最有效的方法（Woodhams等人，2003年）。据报告，青蛙（例如，Woodhams等人2003年，Retalick和Miera 2007年；Andre等人2008年）、蝾螈（例如，Weinstein 2009年）和盲肠动物（Raphael和Pramuk 2007年，未出版）已被清除Bd公司在较高温度下放置一段时间会感染。实验感染时氯化锂连续两天将密封室温度提高到37°C，持续8小时（每天允许45分钟升温，45分钟降温），青蛙能够完全清除糜烂感染（Woodhams等人，2003年）。同样，实验感染三线假丝酵母能够摆脱Bd公司在32°C下保持五天之后（Retalick和Miera，2007年）。然而，也有报道称，这种治疗方法并不适用于所有物种（Marantelli，pers.comm.，引自Young等人2007）。Bd公司可通过加热至37°C并持续4小时来杀死（Johnson和Speare 2003；Johnson等人2003）。因此，Young等人（2007年）建议将耐热两栖类物种保持在它们能忍受的最高温度。

伊曲康唑（一种抗真菌化学品）已成功用于治疗Bd公司-受感染的两栖动物，通过在浅水浴缸中给两栖动物洗澡（Forz·n et al.2008；Garner et al.2009）和口服（Young et al.2007）。然而，对于伊曲康唑是否对两栖动物，尤其是蝌蚪有负面影响，还需要进行更多的研究（Garner等人，2009年）。同时还使用了伊曲康唑（0.01%伊曲康唑浴，每天10分钟，14天）和氟康唑（0.01%氟康唑浴，隔天24小时，共10次治疗）的联合治疗（Une等人，2008年）。

治疗Bd公司-被感染的热带Silurana tropicalis（实验室研究中使用的一种耐寒物种）成功使用商业福尔马林（25 p.p.m.）和孔雀石绿（0.1 mg/L）溶液，将0.007 mL/L水箱水稀释24小时，每隔一天重复一次，共进行四次处理（Parker等人，2002年）。然而，孔雀石绿不建议用于濒危物种，因为它会导致发育畸形（Young等人，2007）。

笼子可以用10%的漂白剂清洗，并每周进行两次高压灭菌（Harris等人，2009a）。与两栖动物接触的水、土壤或栖息地材料可通过加热至47°C以上30分钟进行消毒（约翰逊和Speare 2003；Johnson等人，2003年）。两栖动物围栏中使用的水应在处置前进行消毒；加热至37°C 4小时、47°C 30分钟或60°C 5分钟以上将导致死亡Bd公司（Young等人，2007年）。


十三、。一个人如何避免传播Bd公司?

在场地之间移动之前，应使用10%的漂白剂清洁靴子和野外设备。


用10%的氯仿（漂白剂）溶液清洗靴子和野外设备（如勺子）是防止人类无意中运输糜烂的最常见（且价格低廉）的方法之一。其他化学品也被用于对鞋类和设备进行消毒（列表），加热和干燥相结合似乎对野战服有效（Young等人，2007年）。处理野生青蛙时应使用一次性手套（在标本之间更换），捕获的青蛙应单独隔离在塑料袋中（Young等人，2007年）。

食糜虫传播的最高风险可能是通过人为介导的青蛙和蝌蚪的传播，无论是有意还是无意（Obendorf，2005年）。将糜烂传播到新地点的两种最常见方式可能是使用两栖动物作为鱼饵，以及收集和释放青蛙和蝌蚪作为宠物（Obendorf 2005）。两栖动物一旦被捕获，不应被用作诱饵或放归野外。

所有新获得的圈养两栖动物应首先进行隔离。有关如何治疗个体和笼子的详细信息，请参阅上一节（第十二节。一旦青蛙和其他两栖动物感染了糜烂，有什么方法可以治愈它们吗？）。请注意，笼子水和土壤基质也应视为受到污染，不应倾倒到环境中。

2008年，由174个成员国和地区组成的联合体世界动物卫生组织（OIE）Bd公司以及拉那韦病毒列入其法定报告疾病清单（Schloegel等人，2009年）。内审办的决定意味着所有172个成员国都必须报告Bd公司每六个月在其境内发现拉那韦病毒。目前尚未实施任何控制措施来防止受感染青蛙的交易，但国际兽疫局的新政策被视为第一，重要步骤朝这个方向。对OIE新政策的初步评估是积极的（Schloegel等人，2010年）。


十四、。关于Bd公司基因组？

这个树枝状叶状巴氏杆菌基因组已测序。两株Bd公司已测序：JEL423，取自水母狐猴在巴拿马，和JAM81，取自黄腿蛙在美国加利福尼亚州。Bd公司菌株JEL423的基因组大小估计为23.7Mb，菌株JAM81的基因组大小估计为24.3Mb，包含约9000个基因（Rosenblum等人，2008）。它是目前Chytridiomycota门中唯一被分析的基因组。

这个罗森布鲁姆实验室还生成了不同生命阶段的基因表达谱Bd公司，发现可能与生长、感染和致病性有关的候选基因（Rosenblum等人，2008年）。

尽管Bd公司是二倍体，似乎是克隆繁殖而不是有性繁殖。这一发现部分基于多位点序列分型和线粒体序列分析发现的极低遗传多样性。（Morehouse等人，2003年；Morgan等人，2007年；James等人，2009年）。

水平基因转移是否影响了糜烂病菌的致病性？（凯尔·萨默斯）
乳糜虫基因组序列发布后不久，Sun等人（2011）利用系统发育学方法搜索通过水平基因转移（HGT）获得的糜烂虫基因。他们鉴定了从其他生物体获得的糜烂基因组中的各种基因，其中一些是已知的毒力效应器。特别是，一个大的CRN（“皱褶蛋白”）基因家族从卵菌转移到糜样体，另一个编码丝氨酸肽酶的家族来自细菌（图1）。CRN基因在乳糜体内的拷贝数急剧增加，这两个基因家族在正选择下都发生了变异，表明它们适应了新的寄主环境。已知这两组基因在多种情况下都与致病性有关，包括角化组织在其他病原体中的感染（糜烂菌感染的一个关键特征）。此外，这两个基因家族在糜烂菌侵染寄主组织时都有表达。最近对植物细胞系中CRN13基因效应产物的研究表明，它们以核DNA为靶点，诱导DNA损伤，导致细胞损伤和死亡。此外，这种CRN效应器在非洲爪蟾胚胎中的表达导致了细胞发育异常(Ramirez-Garces等人，2016年). 一项新的研究(Sun等人2016)进一步证明了致病基因水平转移到糜烂中的证据。在广泛的调查和分析中，作者确定了23个HGT获得的基因家族，包括5个可能参与感染和致病性的基因家族。这些包括来自细菌的几丁质酶、糖苷水解酶和α/β水解酶（已知可介导各种致病细菌与其宿主之间的相互作用的基因家族），以及来自卵菌的锚定重复蛋白基因（在感染中也起主要作用）。因此，有越来越多的证据表明，糜烂菌通过HGT获得的基因可能促成了这种真菌病原的毁灭性毒力。