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.2022年12月3日：78:100143。
doi:10.1016/j.clinsp.2022.10143。 eCollection 2023年。

LncRNA ZFAS1通过miR-520b和miR-520e介导的RHOC信号抑制促进骨肉瘤进展

刘晓峰 1, 王明阳 1, 张丽文 1, 雷黄（Lei Huang） 2
附属公司

LncRNA ZFAS1通过miR-520b和miR-520e介导的RHOC信号抑制促进骨肉瘤进展

刘晓峰等。 诊所（圣保罗）. .

摘要

目标：我们检测了Lnc-ZFAS1在骨肉瘤中的表达，并在体内外综合评估了其对骨肉瘤的影响。此外，我们揭示了Lnc-ZFAS1与miR-520b/miR-520e介导的RHOC之间的调节机制，为改善骨肉瘤提供了新的线索。

方法：分析TCGA数据库中骨肉瘤组织和正常组织中长非编码RNA锌指反义1（LncRNA ZFAS1）的表达。然后，通过qRT-PCR进一步验证LncRNA ZFAS1在临床样本和骨肉瘤细胞系（U2OS和KHOS）以及人成骨细胞系hFOB1.19中的表达。此后，LncRNA ZFAS1过度表达或沉默，以探讨其对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和上皮-间充质转化（EMT）的影响。进一步研究和验证了Lnc-ZFAS1影响骨肉瘤进展的基本机制。

结果：我们发现LncRNA ZFAS1在骨肉瘤中上调，Lnc-ZFAS1的过度表达促进了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT，而Lnc-Z FAS1的沉默则产生了相反的影响。从机制上讲，Lnc-ZFAS1在功能上充当了microRNA-520b（miR-520b）和microRNA-520e（miR-520e）的海绵，以上调Ras同源性C（RHOC）。此外，缺失的Lnc-ZFAS1抑制了骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，这可以通过RHOC过度表达来挽救。Lnc-ZFAS1在骨肉瘤中表达上调，Lnc-Z FAS1可在体外促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT。

结论：Lnc-ZFAS1作为miR-520b和miR-520e的海绵促进RHOC，表明Lnc-ZFAS1/miR-520b/RHOC和Lnc-Z FAS1/mi R-520e/RHOC轴可能是骨肉瘤的潜在治疗策略。

关键词：细胞凋亡；入侵；LncRNA ZFAS1；迁移；骨肉瘤；RHOC；miR-520b；miR-520e。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
骨肉瘤中Lnc-ZFAS1上调。（A） 利用TCGA数据库评估Lnc-ZFAS1在骨肉瘤组织和正常组织中的表达。（B） 采用qRT-PCR检测Lnc-ZFAS1在骨肉瘤组织和正常组织（n=8）中的表达。（C） qRT-PCR用于测量骨肉瘤细胞系（U2OS和KHOS）和人成骨细胞系hFOB1.19中Lnc-ZFAS1的表达（*p<0.05，**p<0.01）。
图2
图2
Lnc-ZFAS1促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡。为了进行功能研究，U2OS和KHOS细胞分别用Lnc-ZFAS1过表达和Lnc-ZFAS1 shRNA质粒感染，并进行qRT-PCR以检查转染的效力（A）。克隆形成（B和D）和EdU（C和E）分析用于增殖分析。（F） 采用Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达（**p<0.01）。
图3
图3
Lnc-ZFAS1促进骨肉瘤细胞的迁移、侵袭和EMT。采用伤口愈合（A）和transwell（B和C）分析来检查迁移和侵袭能力。（D） 对EMT相关蛋白的表达进行蛋白质印迹。（E） 使用免疫荧光染色检测F-actin（**p<0.01）。
图4
图4
Lnc-ZFAS1海绵在骨肉瘤中的miR-520b和miR-520e。（A） 确定了Lnc-ZFAS1的亚细胞定位。GAPDH和U6分别作为细胞质和细胞核的标记物。（B） FISH结果显示Lnc-ZFAS1（绿色）细胞在KHOS细胞中分布。（C） 使用Starbase和GSE28423数据库获取交叉的hsa-miR-520b、hsa-miR520e和hsa-miR 934。利用RNA下拉（D）、荧光素酶报告子（E）和RIP（F）分析来探讨Lnc-ZFAS1与两个miRNA的结合。（G） qRT-PCR在Lnc-ZFAS1上调的U2OS细胞和Lnc-Z FAS1下调的KHOS细胞中检测到miR-520b和miR-520e。（H） 采用qRT-PCR检测骨肉瘤组织和正常组织（n=8）中miR-520b和miR-520e的表达。（I） Lnc-ZFAS1与两种miRNA之间的相关性分析（*p<0.05，**p<0.01）。
图5
图5
miR-520b和miR-520e对骨肉瘤中的RHOC具有负调节作用。（A） 利用PITA、miRmap、microT、miRanda、PicTar和TargetScan数据库预测miR-520b和miR-520e的靶基因。（B） 通过交叉预测基因和GSE16088数据库获得交叉基因。（C） 利用靶数据库分析骨肉瘤中RHOC的不同表达。采用双荧光素酶报告子（D）、q-PCR（E）、RIP（F）和RNA下拉（G）分析验证miR-520b或miR-520e与RHOC之间的相关性。
图6
图6
Lnc-ZFAS1通过RHOC促进骨肉瘤进展。为了验证Lnc-ZFAS1是否以RHOC依赖的方式在骨肉瘤进展中发挥致癌驱动因素的作用，用Lnc-Z FAS1 siRNA和RHOC过表达质粒转染KHOS细胞，进行qRT-PCR（a）检测转染效率。（B） 进行EdU以进行增殖分析。（C） western blotting检测凋亡相关蛋白。通过伤口愈合（D）和transwell（E）评估转移和侵袭。通过蛋白质印迹（F）测量EMT相关蛋白。（G） 使用免疫荧光染色检测F-actin（*p<0.05）。
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