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.2021年12月27日4:4:100069。
doi:10.1016/j.fochms.2021.100069。 eCollection 2022年7月30日。

肽GWN和GW以SIRT1依赖性方式保护肾细胞免受达萨替尼诱导的线粒体损伤

Khushwant S Bhullar公司 1 2, 法特梅赫·阿什卡尔 1, 吴建平 1
附属公司

肽GWN和GW以SIRT1依赖性方式保护肾细胞免受达萨替尼诱导的线粒体损伤

Khushwant S Bhullar公司等。 食品化学（牛津大学）. .

摘要

Dasatinib是一种小分子药物，用于治疗慢性粒细胞白血病，可导致胚胎肾（293 T）细胞线粒体损伤（p<0.05）。通过H3K36me3激活卵转铁蛋白衍生肽GWN和GW，达沙替尼诱导的肾细胞线粒体损伤得到缓解。GWN和GF预处理肾细胞导致细胞保护性sirtuins、SIRT1和SIRT3升高，以应对达沙替尼伤害（p<0.01）在体外GWN和GW这两种肽也能逆转达沙替尼诱导肾细胞线粒体丢失并促进COX4蛋白表达（p<0.01）。从机制上讲，肾细胞中SIRT1的缺失破坏了GWN和GW保护胚胎肾细胞免受达沙替尼损伤的能力在体外总之，我们提供了基于细胞的证据，表明GWN和GW具有以SIRT1依赖性方式保护线粒体免受达沙替尼诱导的线粒体损伤的能力。

关键词：达萨替尼；H3K36me3；肾脏；线粒体；多肽；SIRT1。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有已知的竞争性经济利益或个人关系，这些利益或关系似乎会影响本文报道的工作。

数字

图1
图1
达沙替尼诱导肾细胞线粒体损伤。（A） 达沙替尼（1µM）诱导线粒体DNA片段化，（B）降低人类胚胎肾293 T细胞中呼吸链复合物IV（COX4）线粒体编码亚单位的蛋白质水平。简而言之，使用达沙替尼（1µM）对293个T细胞施加压力6小时，导致线粒体损伤。收集线粒体DNA和总蛋白，并按照上述章节中描述的方法进行DNA凝胶和免疫印迹。实验至少进行了三次，通过单因素方差分析和Dunnett事后检验确定显著差异，以比较肽组和对照组的平均值*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001****p<0.0001。
图2
图2
卵转铁蛋白多肽的毒性和组蛋白修饰能力。（A）三种抗氧化肽中的两种肽GWN和GW诱导（B）对人胚肾293 T细胞的毒性最小，（C）显著提高活性组蛋白标记H3K36me3。简而言之，用三种肽GWNI、GWN和GW处理293个T细胞；并进行细胞活力和组蛋白提取。用台盼蓝法在双琥珀细胞计数玻片上评估细胞活力，同时用酸沉淀法提取组蛋白。实验至少进行了三次，通过单因素方差分析和Dunnett事后检验确定显著差异，以比较肽组和对照组的平均值*p<0.05，**p<0.01。
图3
图3
来源于卵转铁蛋白的多肽对肾细胞达萨替尼损伤的细胞保护作用。（A） Dasatinib（1µM）损伤人类胚胎肾293 T细胞后，两种肽GWN和GW增加了（B）SIRT1（C）SIRT3（D）和COX4水平。简而言之，用GWN和GW预处理293个T细胞24小时，然后用达沙替尼（1µM）细胞应激6小时。在这些处理之后，使用RIPA缓冲液收集总蛋白，并进行免疫印迹。实验至少进行了三次，通过单因素方差分析和Dunnett事后检验确定显著差异，以比较肽组和对照组的平均值**p<0.01。
图4
图4
卵转铁蛋白多肽对肾细胞Dasatinib损伤的抗氧化作用在Dasatinib（1µM）损伤人类胚胎肾293 T细胞后，两种肽GWN和GW（A）降低ROS并增加（B）过氧化氢酶和（C）SOD2水平。简而言之，用GWN和GW预处理293个T细胞24小时，然后用达沙替尼（1µM）细胞应激6小时。在这些处理后，使用RIPA缓冲液收集总蛋白并进行免疫印迹。实验至少进行了三次，通过单因素方差分析和Dunnett事后检验确定显著差异，以比较肽组和对照组的平均值**p<0.01。
图5
图5
来自卵转铁蛋白的多肽保护线粒体免受达沙替尼对肾细胞的损伤。与（A）载体相比，（B）达沙替尼（1µM）治疗导致线粒体数量急剧下降，而线粒体数量在人类胚胎肾293 T细胞损伤后由（C）GWN和（D）GW池恢复。简言之，293个T细胞用GWN和GW预处理24小时，然后用达沙替尼（1µM）预处理6小时。经过各种处理后，使用胰蛋白酶化法收集细胞，用400µM浓度的MitoTracker™Green FM培养细胞，并进行流式细胞术。实验至少重复三次，并使用FlowJo软件进行分析。（对于本图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的网络版。）
图6
图6
源于卵转铁蛋白的多肽对达萨替尼损伤的细胞保护的SIRT1依赖性。Dasatinib（1µM）以SIRT1依赖性方式损伤293 T细胞后，两种肽GWN和GW维持（A）细胞活性（B）COX4水平和（C）H3K36me3水平。简言之，用GWN和GW预处理293T WT和293T SIRT1 KO细胞24小时，然后用达沙替尼（1µM）预处理细胞应激6小时。处理后，收集细胞，并按照方法进行细胞活力、免疫印迹和组蛋白标记分析。实验至少进行了三次，通过单因素方差分析和Dunnett事后检验确定显著差异，以比较肽组和对照组的平均值**p<0.01。
图7
图7
来自卵转铁蛋白的GWN和GW肽的代谢预测。图形显示（A-B）生物利用度雷达（C）BOILED-Egg吸收模型和（D）两种肽的关键药理特性。使用Open Babel软件生成两种活性肽GWN和GW的标准笑容，并使用SwissADME和适当的控制分子进行处理。运行该程序以获取煮蛋结果，同时使用软件提供的CSV文件获取药理数据。
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