跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2020年3月；10(3):460-475.
doi:10.1158/2159-8290.CD-19-0837。 Epub 2019年12月6日。

TBK1是癌症的合成致死靶点VHL（甚高频）损失

胡莲心 1 2, 谢海彪 三, 刘希娟 1, 弗朗西斯·波特朱伊德 4, 林赛一世詹姆斯 4, 艾米丽·威尔克森 5, 劳拉·埃尔林 5, 谢玲（Ling Xie） 6, 西安晨 6, 约翰尼·卡斯蒂略·卡布雷拉 1, 凯虹（Kai Hong） 7, 廖成恒 1 2, 谭显明 1, 阿尔伯特·S·鲍德温 1, 菅公 8, Qing Zhang（张青） 9 2 5 10
附属公司

TBK1是癌症的合成致死靶点VHL（甚高频）损失

胡莲心等。 癌症发现. 2020年3月.

摘要

TANK结合激酶1（TBK1）是一种参与天然免疫反应的重要激酶。在这里，我们发现TBK1被von Hippel-Lindau过度激活(VHL（甚高频）)癌细胞缺失或缺氧。肾癌患者的肿瘤VHL（甚高频）缺失显示TBK1磷酸化升高。通过基因消融、药物抑制或以嵌合体为靶点的新的基于大脑蛋白水解的TBK1缺失可特异性抑制VHL缺陷肾癌细胞的生长，同时保持VHL野生型细胞的完整性。在原位异种移植模型中，TBK1的缺失也显著降低了肾脏肿瘤的发生体内从机械上讲，脯氨酸48上的TBK1羟基化触发VHL以及导致TBK1磷酸化降低的磷酸酶PPM1B结合。我们发现TBK1磷酸化Ser366上的p62/SQSTM1，这对p62稳定性和肾癌细胞增殖至关重要。我们的结果表明，TBK1不同于其在先天免疫信号传导中的作用，是VHL缺失癌症的合成致死靶点。意义：导致肿瘤中TBK1激活的机制以及这种激活是否与其在先天免疫中的作用有关尚不清楚。在这里，我们发现TBK1与其在先天免疫中的作用不同，在癌症中被VHL丢失或缺氧激活。见巴考尼和芭比的相关评论，第348页.本文在第327页的in This Issue专题中重点介绍.

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突：提交人声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1.VHL/EglN1与TBK1相互作用并抑制TBK1活性
A、，用空载体（EV）或VHL恢复的来自RCC4、786-O、UMRC2和UMRC6细胞的裂解物的免疫印迹。B中，通过图像J.n=3个生物复制品对来自面板A的pTBK1/TBK1信号进行量化。C、，使用UMRC2裂解物作为激酶和STING蛋白作为底物的激酶分析样品的免疫印迹。D-E、，感染慢病毒的293T和Caki-1细胞裂解物的免疫印迹，慢病毒编码Ctrl-sgRNA或VHL-sgRNA。F、，293T、Caki-1和HKC细胞裂解物的免疫印迹2，过夜）治疗。G中，使用纯化GST、GST-VHL和在体外翻译的FLAG-TBK1。H、，用载体或HA-VHL转染的293T细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹，然后用DMOG或DFO处理，如图所示。我，293T、RCC4和786-O细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀（IP）的免疫印迹。J-L中，感染编码Ctrl或EglN1 sgRNA慢病毒或转染指定质粒的Caki-1、RCC4EV和RCC4VHL细胞裂解产物的免疫印迹。M、，感染慢病毒编码扰码shRNA（scr）或EglN1 shRNA序列的293T细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹，然后用载体或HA-VHL转染，如图所示。
图2。
图2.羟基化Pro48介导TBK1-VHL相互作用
A、，来自用指定质粒转染的293T细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀（IP）的免疫印迹。B中，肽下拉样品的免疫印迹如图所示。C-D、，用所示质粒转染的293T细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹，并按所示用DMOG（1mM）处理。HyP表示泛羟基Pro抗体。E、，感染编码vec、HA-TBK1或HA-TBK1-P48A的慢病毒，然后感染编码TBK1 sgRNA（sg2）的慢病毒的UMRC2细胞裂解物的免疫印迹。F-G、，感染编码HA-TBK1-WT或HA-TBK1-P48A慢病毒并转染指定质粒或siRNA的UMRC2细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹，然后进行指定治疗。H、，转染有指定质粒的293T细胞的全细胞裂解物（输入）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹。我，感染编码HA-TBK1或HA-TB01-P48A的慢病毒，然后转染HA-VHL的UMRC2细胞的代表性软琼脂生长和菌落数（双孔）量化。HA-TBK1表达式见图2E。误差条代表SEM*P（P）<0.05.J-K、，感染指示慢病毒并转染指示质粒的293T细胞的全细胞裂解物（Input）和免疫沉淀物（IP）的免疫印迹。
图3。
图3 TBK1缺失选择性抑制VHL空ccRCC细胞生长
A-D、，用编码Ctrl-sgRNA或TBK1 sgRNA的慢病毒感染的UMRC6EV/VHL细胞的裂解物的免疫印迹（A）、结晶紫染色（B）、3D软琼脂生长图（C）和菌落数的定量（D，重复孔）。E-H、，感染了编码Ctrl-sgRNA或TBK1-sgRNA慢病毒的UMRC2EV/VHL细胞的裂解物免疫印迹（E）、结晶紫染色（F）、代表性三维软琼脂生长（G）和细胞集落数量量化（H，三倍微孔）。I-J、，如图所示，感染编码sgCtrl、sgTBK1（sg2）或pLenti6-vec、pLenti6-FLAG-TBK1的慢病毒的UMRC2细胞的裂解物免疫印迹和结晶紫染色。K-M公司，经4μM CMPD1处理的UMRC6EV/VHL细胞的代表性结晶紫染色（K）、三维软琼脂生长图（L）和菌落数（M，重复孔）的定量。N-P、，如图所示，经二甲基亚砜或3μM TBK1 PROTAC（UNC6587）处理的UMRC6EV/VHL细胞的裂解物免疫印迹（N）、代表性三维软琼脂生长图片（O）和菌落数量（P，重复孔）的量化。误差条代表SEM*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）<0.001，n.s.表示无显著性。
图4。
图4 TBK1缺失选择性抑制VHL阴性ccRCC肿瘤生长
A-C、，感染了编码可诱导Ctrl-shRNA或可诱导TBK1-shRNA的慢病毒的UMRC2细胞的裂解物（A）、代表性结晶紫染色（B）和三维软琼脂生长图片（C）的免疫印迹，然后按照指示使用强力霉素进行处理。D-E中，强力霉素治疗前（0周）和治疗10周后的代表性生物发光成像（D）和定量强力霉素处理后的生物发光成像，来自感染编码Teton-control（Ctrl）Teton-shTBK13185（shTBK1）慢病毒的UMRC2荧光素酶稳定细胞将原位注射到NSG小鼠的肾包膜中。对大肠杆菌进行双向方差分析。F、，量化肾肿瘤重量（n=12）。G-H、，代表性肺活体外生物发光成像（G）和活体外成像定量（H，n=12）。误差条代表SEM*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）<0.001
图5。
图5 ccRCC肿瘤组织中TBK1磷酸化增加
A-F、，来自21对ccRCC队列（a，B）、ccRCC TMA1（C，D）和TMA2（E，F）的肿瘤和配对正常组织的代表性TBK1和pTBK1（Ser172）IHC染色图片和相对pTBK1/TBK1信号强度的量化。误差条代表SEM**P（P）<0.01, ***P（P）<0.001（Wilcoxon配对试验）。G中，根据VHL表达，TMA2样本分为3组。条形图表示每个肿瘤样本的相对pTBK1/TBK1比率。
图6。
图6 TBK1磷酸化Ser366上的p62并稳定肾癌细胞中的p62
A、，用于识别ccRCC细胞中TBK1底物的全局定量磷蛋白组筛查示意图。B中，MS的热图确定了磷酸化位点，其磷酸化水平在CMPD1治疗后15分钟/1h、1小时/3h或15分钟/1hr/3小时下降。C、，免疫印迹和放射自显影在体外如图所示，用热ATP进行激酶分析。D、，转染有指示质粒的7293T细胞裂解物的免疫印迹。E、，如图所示，感染慢病毒的786-O、UMRC2和UMRC6细胞裂解物的免疫印迹。选择嘌呤霉素后3-5天收集细胞。F、，感染编码shTBK1（3185）的慢病毒并用强力霉素治疗指定时间的UMRC2细胞裂解物的免疫印迹。G-I、，来自786-O、UMRC2和UMRC6细胞的裂解物的免疫印迹，所述细胞用慢病毒感染，然后用MG132（10μM）或BA1（10nM）处理过夜。J-L、，如图所示，感染了编码Ctrl-sgRNA或TBK1-sgRNA的慢病毒，然后感染了编码FLAG-p62突变体的慢病毒的UMRC6细胞的裂解物免疫印迹（J）、代表性三维软琼脂生长图片（K）和菌落数量化（L，重复孔）。误差条代表SEM*P（P）<0.05, **P（P）<0.01，n.s.表示无显著性。M、，正常条件下（VHL WT）和VHL缺失/缺氧条件下TBK1活性的羟化依赖性调节示意图模型。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Godwin JL，Zibelman M，Plimack ER，Geynisman DM。免疫检查点阻断作为肾癌的新型免疫治疗策略：临床试验综述。2014年发现医学；18(101):341–50.-公共医学
    1. Kaelin WG Jr.VHL遗传性癌症综合征的分子基础。国家癌症研究所2002年版；2(9):673–82.-公共医学
    1. Haase VH。VHL肿瘤抑制剂在发育和疾病中的作用：通过条件基因靶向对小鼠的功能研究。《精液细胞开发生物学》2005；16(4–5):564–74.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ivan M、Kondo K、Yang H、Kim W、Valiando J、Ohh M等。靶向脯氨酸羟化VHL介导的破坏的HIFalpha：对O2传感的影响。科学2001；292（5516）:464–8个doi 10.1126/science.1059817。-内政部-公共医学
    1. Jaakkola P、Mole DR、Tian YM、Wilson MI、Gielbert J、Gaskell SJ等。通过O2-调节脯氨酰羟基化将HIFalpha靶向von Hippel-Lindau泛素化复合物。科学2001；292(5516):468–72.-公共医学

出版物类型