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.2019年11月:194:105432。
doi:10.1016/j.jsbmb.2019.105432。 Epub 2019年7月22日。

富马酸二甲酯和富马酸单甲酯可减轻氧化应激和线粒体改变,从而导致经7β-羟基胆固醇处理的158N小鼠少突胶质细胞发生氧凋亡

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富马酸二甲酯和富马酸单甲酯可减轻氧化应激和线粒体改变,从而导致经7β-羟基胆固醇处理的158N小鼠少突胶质细胞发生氧凋亡

兰达·斯盖尔等。 类固醇生物化学分子生物学杂志. 2019年11月.

摘要

氧化应激和线粒体功能障碍有助于神经退行性疾病的发病机制,并有利于脂质过氧化,导致7β-羟基胆固醇(7β-OHC)水平升高,从而诱导氧凋亡(氧化应激、凋亡、自噬)。在暴露于7β-OHC(50μM,24 h)和DMF或MMF(25μM)的小鼠少突胶质细胞158N上,评估用于治疗复发缓解型多发性硬化症的富马酸二甲酯(DMF)及其主要代谢物富马酸单甲酯(MMF)的细胞保护作用。在有无DMF或MMF的情况下,7β-OHC的活性根据以下几个参数进行评估:细胞粘附;用碘化丙啶(PI)、台盼蓝和二乙酸荧光素(FDA)测定质膜完整性;乳酸脱氢酶活性;抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx));产生脂质过氧化产物(丙二醛(MDA)、共轭二烯(CD))和蛋白质氧化产物(羰基化蛋白质(CP));使用DHE和DHR123进行活性氧(ROS)过量生产。用补充标准测定对线粒体的影响:琥珀酸脱氢酶活性的测量、线粒体电位(ΔΨm)和线粒体超氧阴离子(O2●-)使用DiOC生产6(3) 和MitoSOX;用Mitotracker Red对线粒体质量以及心磷脂和有机酸进行定量。通过透射电子显微镜测定对线粒体和过氧化物酶体超微结构的影响。测定了细胞内固醇和脂肪酸分布。通过Hoechst 33342、Giemsa和吖啶橙染色,以及抗caspase-3和LC3抗体的升高来表征细胞凋亡和自噬。DMF和MMF减弱7β-OHC诱导的细胞毒性:细胞生长抑制;细胞活力降低;线粒体功能障碍(琥珀酸脱氢酶活性降低,ΔΨm损失,线粒体O增加2●-三羧酸(TCA)循环的产生、改变和心磷脂含量);氧化应激诱导(ROS过度生成,GPx、CAT和SOD活性改变,MDA、CD和CP水平升高);脂肪酸和胆固醇代谢的变化;和细胞死亡诱导(caspase-3裂解,LC3-II中LC3-I的激活)。线粒体和过氧化物酶体的超微结构改变被阻止。这些结果表明,DMF和MMF可预防与神经退行性疾病相关的主要功能障碍:氧化应激、线粒体功能障碍、凋亡和自噬。

关键词:158N细胞;7β-羟基胆固醇;细胞凋亡;自噬;富马酸二甲酯;血脂谱;线粒体;富马酸单甲酯;氧化质吞噬;氧化应激;过氧化物酶体。

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