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。2018年11月28日；11(4):132.
doi:10.3390/ph11040132。

放射性标记吉仑妥昔单抗的体内外评价

泰斯巴萨科 1 2, 斯蒂芬妮·佩克托 三, 何苏·贝穆德斯 4, 纽尔卡·梅内塞斯 5, 曼弗雷德·海勒 6, 何塞·A·加尔文 7, Kayluz F Boligán公司 8, 斯特凡·舒尔奇 9, 斯蒂芬·冯·冈滕 10, 安德烈亚斯·特勒 11, 马提亚斯·米德勒 12
附属公司

放射性标记吉仑妥昔单抗的体内外评价

泰斯巴萨科等。 制药（巴塞尔）。 。

摘要

Girentuximab（cG250）靶向碳酸酐酶IX（CAIX），这是一种在大多数肾癌细胞（RCC）表面表达的蛋白质。cG250标有177Lu已用于RCC放射免疫治疗（RIT）的临床试验。在这项工作中，对免疫偶联物进行了广泛的表征，从而优化了标记条件177Lu同时保持cG250的免疫反应性，然后在体外和体内实验中进行研究。cG250与S-2-（4-异硫氰基苄基）-1,4,7,10-四氮杂环十二烷四乙酸（DOTA（SCN））通过30至90 min的孵育时间偶联，并通过质谱进行表征。获得了每个cG250分子与5到10个DOTA（SCN）分子的免疫偶联物。比值小于6 DOTA（SCN）/cG250的偶联物具有较高的体外抗原亲和力，无论是标记前还是标记后177在抗坏血酸钠的存在下，放射化学稳定性增加，从而防止辐射分解。当每个结合物的DOTA含量增加时，通过与SK-RC-52细胞特异性结合测试的放射性标记cG250的免疫反应性降低。体内肿瘤摄取量<10%ID/g，与每只动物5至100µg cG250范围内的蛋白质总量无关。低肿瘤摄取被发现是由于显著的坏死区域和异质性CAIX表达。此外，低血管性表明CAIX靶点的可及性相对较差。

关键词：177Lu-放射性药物；碳酸酐酶IX；吉伦妥昔单抗；放射免疫治疗；肾细胞癌。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
cG250通过苄基硫氰基与DOTA的偶联：(一)不同选择的DOTA（SCN）-cG250共轭物与天然cG250相比的尺寸排除-高效液相色谱（SE-HPLC）色谱图；(b条)尺寸排除-同一批次制备的DOTA（SCN）-cG250共轭物的高效液相色谱/紫外（SE-HPLC/UV）色谱图；和(c)还原条件下cG250共轭物的SDS-PAGE色谱图。
图2
图2
DOTA（SCN）-cG250共轭物的质谱表征：(一)蛋白质经胰蛋白酶凝胶消化后DOTA（SCN）-cG250的LC（顶部）和HC中的赖氨酸占有率(n个=3）共轭C2（90分钟）、C3、C4、C5（60分钟）和C7（30分钟）(b条)用MALDI-TOF MS测量天然cG250和共轭C3和C7的质量。
图3
图3
DOTA（SCN）-cG250在体外和肿瘤组织中与SK-RC-52细胞结合的免疫反应性。(一)通过流式细胞术评估天然cG250与SK-RC-52细胞和SK-RC-18（对照）的浓度依赖性结合。红色虚线对应IC50。(b条)流式细胞术评估免疫结合物C2（90分钟）、C3（60分钟）和C7（30分钟）的SK-RC-52细胞对CAIX的识别。(c)流式细胞术评估免疫偶联物C3、C4和C5对SK-RC-52细胞的CAIX识别（60分钟）。(d日)使用天然cG250单克隆抗体和免疫偶联物C2、C3、C4、C5和C7对冷冻SK-RC-52肿瘤样本进行CAIX免疫染色。CAIX Abcam（ab15086）作为阳性对照，Dako（P0214）作为阴性对照。100μm比例尺和10X物镜。
图4
图4
体外稳定性[177薄层色谱法测定NaAsc存在下的Lu]DOTA（SCN）-cG250：(一)不含和含NaAsc的不同活性浓度的C3放射性构建物(b条)人血清中的C2、C3和C7放射性构建物（2 MBq/µg）和含有NaAsc的20%HSA。
图5
图5
体外放射免疫活性[177Lu]DOTA（SCN）-cG250至SK-RC-52细胞(n个= 3). (一)浓度相关绑定[177Lu]DOTA（SCN）-cG250使用共轭C3（60分钟）。(b条)通过2 MBq/µg比活性的放射免疫分析，识别结合物C2（90分钟）、C3（60分钟）和C7（30分钟）到SK-RC-52细胞的放射构造物。(c)使用共轭C3，HSA 20%、HS和PBS在2 MBq/µg比活性下的放射免疫活性。(d日)放射性免疫活性[177使用共轭C3在不同活性浓度下的Lu]DOTA（SCN）-cG250。使用50µg天然cG250进行阻断研究。
图6
图6
生物分布[17748小时时，使用总蛋白剂量调整为每只动物5至100µg和12 MBq的共轭C7中的Lu]DOTA（SCN）-cG250(n个= 4). (一)器官：肿瘤、血液、脾脏和肝脏。(b条)活动平衡。
图7
图7
肿瘤生物分布中肿瘤摄取量与每只动物肿瘤体积的关系[17748小时时，使用总蛋白剂量调整为每只动物5至100µg和12 MBq的共轭C7中的Lu]DOTA（SCN）-cG250(n个= 4).
图8
图8
生物分布[177每只动物使用0.5微克（2 MBq）和5微克（18 MBq）蛋白质剂量的共轭C7中的Lu]DOTA（SCN）-cG250(n个= 4).
图9
图9
四种不同SK-RC-52肿瘤FFPE中血管密度和缺氧的评估：(一–d日)（H&E）染色；(e（电子）–小时)CD31免疫染色；和(我–我)HIF1α染色。(一)200µm标尺，5倍物镜。(b条–d日)1000µm标尺，1.5倍物镜；（插图）50µm比例尺，20倍物镜。
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