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.2017年10月：13:508-521。
doi:10.1016/j.redox.2017.07.011。 Epub 2017年7月13日。

醛固酮诱导氧化引发的Caveolin 1相关自噬促进肝窦内皮细胞防御

罗晓英 1, 王丹（Dan Wang） 2, 宣洛 3, 朱新涛 4, 王国珍 2, 左胃宁 2, 杨丽 2, 马晓欣 2, 杨仁强 5, 四一金 2, 黄云（Yun Huang） 2, 英蒙 6, 徐丽 7
附属机构

醛固酮诱导氧化引发的Caveolin 1相关自噬促进肝窦内皮细胞防御

罗晓英等。 氧化还原生物. 2017年10月.

摘要

醛固酮具有促氧化和促自噬功能，在肝纤维化中起关键作用。然而，醛固酮介导的肝窦内皮细胞（LSEC）防御机制尚不清楚。Caveolin 1（Cav1）与自噬和开窗密切相关。因此，我们旨在研究Cav1相关自噬在LSEC防御中的作用。我们发现，在人类纤维化肝、BDL或醛固酮增多症模型中，LSEC中醛固酮/MR（盐皮质激素受体）水平、氧化、自噬和防御增加；而拮抗醛固酮或抑制自噬可缓解BDL诱导的纤维化或醛固酮增多症模型中LSEC的防御作用。在体外，随着NO-依赖性通路的下调和AMPK依赖性自噬的增加，原代LSEC的窗孔逐渐缩小；雷帕霉素（一种自噬激活剂）或醛固酮治疗加重了这些影响。此外，醛固酮增加Cav1介导的氧化，减少ATP生成，随后诱导AMPK依赖性自噬，导致NO-依赖性通路和LSEC防御下调。MR拮抗剂螺内酯、抗氧化剂或自噬抑制剂可逆转这些作用。此外，醛固酮增强了Cav1与p62和泛素的共免疫沉淀，并在LSEC的核周区域诱导了Cav1与LC3、泛素和F-肌动蛋白的共免疫荧光染色。此外，醛固酮治疗增加Cav1的膜蛋白水平，而降低Cav1细胞质蛋白水平，表明醛固酮诱导Cav1相关的选择性自噬和F-actin重塑，以促进防御。因此，醛固酮诱导氧化引发的Cav1相关选择性自噬通过激活AMPK-ULK1途径和抑制NO-依赖途径促进LSEC的防御。

关键词：醛固酮；自噬；小泡蛋白1；排粪；肝窦内皮细胞；氧化。

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数字

图1
图1
人类肝纤维化患者肝窦内皮细胞醛固酮/MR水平升高，严重氧化和自噬。(A类)肝活检标本中α-SMA和vWF的H&E、天狼星红和免疫组织化学染色（IHC）（比例尺：100µm）。(B)用ISHAK和Metavir评分对肝纤维化进行定量分析*与正常组相比，P＜0.05。(C类)天狼星红染色的面积密度和α-SMA和vWF的免疫组织化学染色（IHC）*与正常组相比，P<0.05。(D类)肝组织中vWF、CD31、MR、NOX4和LC3 II/I的蛋白表达。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示*与正常组相比，P<0.05。CD31与MR的联合定位(E类)以及LC3与vWF的共同本地化(F类)免疫荧光法（比例尺：50µm）。
图2
图2
拮抗醛固酮或抑制自噬可改善BDL诱导的纤维化大鼠的LSEC防御。(A类)第18天大鼠肝脏中肝窦内皮细胞的放大扫描电镜显示窗孔（比例尺：10µm），以及BDL大鼠模型LSEC孔隙度的量化，右侧。黑色箭头表示LSEC的窗式结构*与假手术组相比P<0.05#与BDL组相比，P<0.05。(B)从BDL大鼠模型分离出的初级LSEC中eNOS和VASP的代表性免疫印迹*第18天与假手术组相比P<0.05#第18天与BDL组相比P<0.05$第28天与假手术组相比P<0.05&第28天，与BDL组相比，P<0.05。(C类)实时PCR分析从BDL大鼠模型分离的初级LSEC中cGMP和PKG mRNA水平*第18天与假手术组相比P<0.05#第18天与BDL组相比P<0.05$在第28天与假手术组相比P＜0.05&在第28天与BDL组相比P＜0.05。(D类)H2O（运行）2从BDL大鼠模型中分离出的初级LSEC的含量和有丝分裂-ROS*第18天与假手术组相比P<0.05#第18天与BDL组相比P<0.05$第28天与假手术组相比P<0.05&第28天，与BDL组相比，P<0.05。(E类)从BDL大鼠模型中分离出的初级LSEC中ATP水平的定量*第18天与假手术组相比P<0.05#第18天与BDL组相比P<0.05$第28天与假手术组相比P<0.05&第28天，与BDL组相比，P<0.05。(F类)原发性LSEC中MR、Cav1、NOX4和LC3II/I的代表性免疫印迹*第18天与假手术组相比，P＜0.05#第18天与BDL组相比P<0.05$第28天与假手术组相比P<0.05&第28天，与BDL组相比，P<0.05。(克)使用双荧光mRFP-GFP-LC3标记监测LSEC自噬通量。通过共焦显微镜观察，红色或黄色分别代表自溶体或自噬体。用Image J软件定量分析100个细胞的自噬通量（%）*与假手术组第18天的自溶体和自噬体相比，P<0.05#与BDL组第18天的自溶体和自噬体相比，P<0.05$与假手术组第28天的自溶体和自噬体相比，P<0.05&与BDL组第28天的自溶体和自噬体相比，P<0.05。(H（H）)高倍TEM（比例尺：1µm）显示第18天肝窦内皮细胞中的自噬体结构（用白色三角形表示）和自溶体结构（由黑色三角形表示），以及显示自噬小体和自溶小体计数的条形图，右侧*与假手术组的自噬体相比P<0.05$与假手术组的自体溶酶体相比P<0.05#与BDL组的自噬体相比P<0.05&与BDL组的自体溶酶体相比，P<0.05。n=每组6个。螺内酯：螺内酯。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图3
图3
拮抗醛固酮或抑制自噬可缓解醛固酮增多症小鼠中LSEC的防御作用。(A类) (向上)小鼠肝脏中肝窦内皮细胞的SEM放大图，显示窗孔结构（比例尺：10µm），并量化LSEC中的孔隙度，右侧。黑色箭头表示LSEC的窗式结构。(向下)小鼠肝脏正弦内皮中的自噬体结构（用白色三角形表示）和自溶体结构（用黑色三角形表示）用高倍TEM（比例尺：600nm）显示，条形图显示自噬体和自溶体的计数，右侧*与对照组相比P＜0.05#与Aldo-Sort组相比，P<0.05。(B)通过western blot分析vWF、MR和LC3 II/I的蛋白质水平。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示*与对照组相比P<0.05#与Aldo-Sort组相比，P<0.05。血清醛固酮含量(C类)和H2O（运行）2肝组织中的含量(D类). *与对照组相比P<0.05#与Aldo-Sort组相比，P<0.05。n=9个/组。CTR：控制；醛固酮；CTR组为1%氯化钠组；Aldo-Sort组表示醛固酮增多症组。
图4
图4
慢性醛固酮在LSEC防御过程中促进AMPK依赖性自噬。从正常大鼠分离并在体外培养3天的原代大鼠LSEC用不同剂量（0、1、10、100 nM）的醛固酮治疗3天或从第1天到第3天的剂量（100 nM。(A类)CTR和Aldo（100 nM）治疗组在第1天、第2天和第3天的LSEC SEM放大图，显示窗孔结构（比例尺：5µm），并量化窗孔总直径，右侧。黑色三角形表示LSEC的窗式结构*与同期对照组相比，P<0.05。(B)western blot分析原发性LSEC中eNOS和VASP的蛋白水平。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示#与第1天相比，P<0.05&P<0.05对0毫微米*与同期对照组相比，P<0.05。(C类)典型的TEM图像显示了CTR和Aldo（100 nM）治疗组第3天的主要LSEC中的自噬体结构（用白色三角形表示）和自溶体结构（由黑色三角形表示）（比例尺：600 nM），条形图显示了自噬小体和自溶小体的计数，右图*与同期对照组的自噬体相比P<0.05$与同期对照组的自体溶酶体相比P<0.05#与第一天的自噬体相比，P<0.05&与第一天的自体溶酶体相比，P<0.05。(D类)通过共焦显微镜观察，红色或黄色分别代表自溶体或自噬体。对100个细胞的自噬流量（%）进行定量分析*与同期对照组的自噬体相比P<0.05$与同期对照组的自溶体相比，P＜0.05#与第1天的自噬体相比，P＜0.05&与第一天的自体溶酶体相比，P<0.05。(E类)通过western blot分析AMPK、ULK1和LC3 II/I的蛋白质水平。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示*与对照组自噬体相比P<0.05$与对照组自体溶酶体相比P<0.05#与第一天的自噬体相比，P<0.05&与第一天的自体溶酶体相比，P<0.05。(F类)LSEC中ATP水平的量化*与同期对照组相比，P<0.05。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图5
图5
醛固酮诱导NOX4和Cav1介导的氧化。从正常大鼠分离并在体外培养3天的原代大鼠LSEC用不同剂量（0、1、10、100 nM）的醛固酮治疗3天或从第1天到第3天的剂量（100 nM。(A类)western blot分析原发性LSEC中MR、Cav1和NOX4的蛋白水平。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示&P<0.05对0毫微米*与同期对照组相比，P<0.05。H2O（运行）2内容(B)和mito-SOX(C类)在主要LSEC中*与同期对照组相比，P<0.05。(D类)通过co-IP分析检测Cav1与MR的相互作用。如图所示，对原发性LSEC的Cav1进行单独免疫沉淀并进行免疫印迹分析。(E类)western blots检测原发性LSEC中Cav1和NOX4的蛋白表达。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示*与对照组相比P<0.05#与使用Aldo治疗的NC相比，P<0.05。(F类)H2O（运行）2主要LSEC的含量被量化*与对照组相比P<0.05#与使用Aldo治疗的NC相比，P<0.05。
图6
图6
螺内酯和抗氧化剂减弱了AMPK依赖性自噬，并维持了LSEC的开窗。从正常大鼠中分离并在体外培养的原代大鼠LSEC用醛固酮（100nM）处理，并用螺内酯和抗氧化剂（NAC、TEMPO或mito-TEMPO）预处理3天。H2O（运行）2内容(A类)和mito-SOX(B)在第3天的LSEC中*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。(C类)LSEC中ATP水平的量化*与对照组相比P<0.05#P（P）与Aldo组相比<0.05。(D类)LSEC中NOX4、AMPK和LC3 II/I的代表性免疫印迹。相对蛋白质表达在下图中进行了量化*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。(E类)红色或黄色分别代表自溶体或自噬体。对100个细胞的自噬流量（%）进行定量分析*与对照组自噬体相比P<0.05#与对照组自体溶酶体相比P<0.05$与Aldo组的自噬体相比P<0.05&与Aldo组的自体溶酶体相比，P<0.05。(F类)通过SEM（比例尺：5µm和10µm）揭示了CTR、Aldo和螺内酯和抗氧化剂（NAC、TEMPO或mito-TEMPO）预处理组中LSEC的窗孔结构，以及LSEC总窗孔直径的量化，右侧。黑色三角形表示LSEC的窗式结构*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图7
图7
醛固酮诱导的自噬通过抑制NO-依赖途径导致LSEC防御。(A类)用自噬调节剂（雷帕霉素、3MA或巴非霉素）预处理的初级LSEC中LC3II/I、eNOS和VASP的代表性免疫印迹。相对蛋白质表达在下图中进行了量化*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。(B)在第3天对八组（CTR、3MA、Baf、Rapa、Aldo、Aldo+3MA、Aldo+Baf、Aldo+Rapa）的LSEC进行放大扫描电镜观察，揭示窗孔结构（比例尺：5µm），并量化LSEC的总窗孔直径，右侧。黑色三角形表示LSEC的窗式结构*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。Rapa：雷帕霉素；Baf：巴非霉素A1。
图8
图8
醛固酮诱导Cav1选择性自噬降解和重新分布，促进F-actin重塑。(A类)用自噬调节剂（雷帕霉素、3MA或巴非霉素）预处理的原发性LSEC中Cav1的代表性免疫印迹。相对蛋白质表达在图中进行了量化，如右图所示*与对照组相比P<0.05#与Aldo组相比，P<0.05。(B)通过co-IP检测Cav1与p62和泛素的相互作用。如图所示，对原发性LSEC的P62和泛素进行单独免疫沉淀，并进行免疫印迹分析。(C类)在第3天用自噬调节剂（雷帕霉素、3MA或巴非霉素）和醛固酮处理后，细胞膜上Cav1和ATP1B2的代表性免疫印迹，以及原发性LSEC细胞质中Cav1与β-肌动蛋白的代表性*与对照组相比，P<0.05。(D类)免疫荧光显示Cav1（红色）与泛素（绿色）和F-actin（蓝色）在五组（CTR、Rapa、Aldo、Aldo+3MA和Aldo+Baf）的LSEC中的共同定位。比例尺：10µm。（有关此图例中颜色参考的解释，请读者参阅本文的web版本。）
图9
图9
醛固酮诱导的Cav1自噬降解通过F-actin重塑和抑制NO-依赖性途径促进肝窦内皮细胞的防御，这一结论涉及主要信号转导途径的示意图。
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    1. Levine B.、Kroemer G.自噬在疾病发病机制中的作用。单元格。2008;132:27–42.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Dewaele M.、Maes H.、Agostinis P.ROS介导的自噬刺激机制及其在癌症治疗中的相关性。自噬。2010;6:838–854.-公共医学
    1. Bhogal R.H.、Weston C.J.、Curbishley S.M.、Adams D.H.、Afford S.C.自噬：一种细胞保护机制，可在氧化应激期间防止原代人类肝细胞凋亡。自噬。2012;8:545–558.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Thoen L.F.、Guimaráes E.L.、DolléL.、Mannaerts I.、Najimi M.、Sokal E.肝星状细胞激活期间自噬的作用。《肝素杂志》。2011;55:1353–1360.-公共医学
    1. Guixé-Montet S.、de Mesquita F.C.、Vila S.、Hernández-Gea V.、Peralta C.、García-Pagán J.C.自噬与KLF2之间的交叉对话决定了急性肝损伤中的内皮细胞表型和微血管功能。《肝素杂志》。2017;66:86–94.-公共医学

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