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.2017年8月；50（4）：e12353。

doi:10.1111/cpr.12353。

雪旺细胞分泌细胞外小泡以促进和维持hDPC的增殖和多能性

李子悦^1 2, 阎良^1 2 三, 匡武盘^1 2 三, 李慧（音）^1 2 三, 梅雨^1 2, 郭伟华^1 2 4, 陈国庆^1 2, 田伟东^1 2 三

附属公司

附属公司

¹四川大学华西口腔医院口腔疾病国家重点实验室，成都。
²四川大学华西口腔医院口腔再生医学国家工程实验室，中国成都。
^三四川大学华西口腔医院口腔颌面外科，中国成都。
⁴四川大学华西口腔医学院口腔科，中国成都。

PMID： 28714175
预防性维修识别码： PMC6529079型
DOI（操作界面）： 10.1111/cpr.12353

雪旺细胞分泌细胞外小泡以促进和维持hDPC的增殖和多能性

李子悦等。细胞Prolif. 2017年8月.

.2017年8月；50（4）：e12353。

doi:10.1111/cpr.12353。

作者

李子悦^1 2, 阎良^1 2 三, 匡武盘^1 2 三, 李慧（音）^1 2 三, 梅雨^1 2, 郭伟华^1 2 4, 陈国庆^1 2, 田伟东^1 2 三

附属公司

¹四川大学华西口腔医院口腔疾病国家重点实验室，成都。
²四川大学华西口腔医院口腔再生医学国家工程实验室，中国成都。
^三四川大学华西口腔医院口腔颌面外科，中国成都。
⁴四川大学华西口腔医学院口腔科，中国成都。

PMID： 28714175
预防性维修识别码： PMC6529079型
DOI（操作界面）： 10.1111/cpr.12353

摘要

目标：雪旺细胞（Schwann cells，SC）是外周神经系统中的主要胶质细胞，参与神经病变，具有巨大的再生潜能。据报道，牙髓细胞具有维持神经原潜能的功能。相反，树突状细胞对人牙髓细胞（hDPCs）发育的调节作用尚不明确。

材料和方法：收集SC分泌物和SC衍生细胞外囊泡（EVs）用于治疗hDPC；EVs处理后检测hDPC的增殖和多分化。最后，我们通过质谱分析了SC-EV和SCs的蛋白质组。

结果：在这项研究中，我们发现SC分泌对hDPC的发育具有主要的调节作用。此外，我们从SC分泌物中鉴定出EV，其在调节hDPC增殖和多能性方面的功能与SC分泌品相似。在SC分泌物和EVs以及Sox2和Nanog处理后，转录因子Oct4的表达上调。我们检测到EVs中Oct4的大量富集，这可能是hDPC中干细胞相关基因上调的原因。通过蛋白质组和western blot分析，我们发现EV中富含TGFβs，表明hDPC的加速增殖可能由激活的TGFβ-Samd和TGFβ-MAPK信号介导。

结论：总之，我们的研究揭示了SC-derived EVs对hDPCs增殖和多向性的关键调节能力，这对组织工程中的种子细胞具有重要意义。

©2017 John Wiley&Sons有限公司。

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数字

图1
人牙髓细胞的特性(hDPC公司s） ●●●●。A、雪旺细胞的形态学(联合国安全理事会s） ●●●●。联合国安全理事会施万细胞标记物S100阳性染色。B、形态hDPC公司第条。hDPC公司s为梭形，类似于成纤维细胞。而且hDPC公司s阳性表达GFAP公司，部分表达Nestin。C、，FACS公司分析hDPC公司s表明它们强烈表达间充质表面标记光盘29,光盘44,光盘90,光盘105,光盘166人，为阴性光盘三，光盘34，以及光盘45、比例尺：A，100μm；B、 100微米

图2
人牙髓细胞的增殖(hDPC公司s）由联合国安全理事会md治疗。（A）扩散hDPC公司施万细胞治疗后s(联合国安全理事会)总经理立方厘米8.（B）CFU（循环流化床）进行了分析，以比较联合国安全理事会md的治疗和控制hDPC公司s.紫点是指细胞集落。（C）菌落形态。（D）计算形成的细胞集落联合国安全理事会md处理组和对照组，仅计数细胞数超过20的菌落。茜素红染色的总图（E）和局部放大（F）hDPC公司第条。hDPC公司s接受了治疗联合国安全理事会md持续7d，然后进行10d成骨刺激。Ctrl、control、，hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司;联合国安全理事会医学博士，hDPC公司用雪旺细胞条件培养基培养。误差线，±标准偏差（n≥3）*P（P）<0.05。比例尺：100μm

图3
干细胞相关基因和蛋白质表达。人类牙髓细胞中干细胞相关基因（A‐C）和蛋白质（D）的表达(hDPC公司s）之后联合国安全理事会md治疗3、7和14d。Ctrl、control、，hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司;联合国安全理事会md中，hDPC公司用雪旺细胞条件培养基培养。C3，对照组培养3d；S3、，联合国安全理事会md组培养3d。误差线，±标准偏差（n=3）*P（P）＜0.05**P（P）<.005

图4
雪旺细胞胞外囊泡(联合国安全理事会‐电动汽车s）人牙髓细胞的治疗(hDPC公司s） ●●●●。A、形状和尺寸电动汽车s.白点代表电动汽车s.B，表达于电动汽车s和联合国安全理事会裂解物。C、，hDPC公司s形态学电动汽车s处理3d。D、扩散hDPC公司经处理后s联合国安全理事会md（左）和不同浓度的电动汽车s.黑色星号表示所有组的统计数据，彩色星号表示各自组的统计信息。E、干细胞相关基因表达hDPC公司s之后电动汽车s处理3天和7天。F、干细胞相关蛋白表达hDPC公司s之后电动汽车s处理3、7和14d。G、 7天茜素红染色电动汽车‐经过处理hDPC公司s，然后进行成骨诱导10d。H、，CFU（循环流化床）进行了分析，以比较电动汽车s的治疗和控制hDPC公司s.紫点是指细胞集落。联合国安全理事会，雪旺细胞；Ctrl、control、，hDPC公司用α-MEM公司/2%FBS公司;联合国安全理事会md中，hDPC公司施万细胞条件培养基培养；电动汽车第页，hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司含有雪旺细胞衍生的细胞外小泡。误差线，±标准偏差（n≥3）*P（P）<.05, **P（P）<.005. 比例尺：A，500 nm；C和G，200μm

图5
人牙髓细胞的多系分化(hDPC公司s）由联合国安全理事会md和电动汽车s治疗。A、成骨相关基因在7天成骨分化诱导中的表达hDPC公司s.B，脂肪生成相关基因在7天脂肪分化诱导中的表达hDPC公司s.C，神经发生相关基因在1天神经发生分化诱导中的表达hDPC公司s.所有组均接受Ctrl，联合国安全理事会md和电动汽车s诱导分化前7d。Ctrl、control、，hDPC公司用α-MEM公司/2%FBS公司;联合国安全理事会md中，hDPC公司施万细胞条件培养基培养；电动汽车第页，hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司含有雪旺细胞衍生的细胞外小泡。误差线，±标准偏差（n=3）*P（P）<.05, **P（P）<.005

图6
细胞外囊泡的蛋白质组分析(电动汽车s）和雪旺细胞(联合国安全理事会s）通过质谱分析。（A）鉴定出的常见和独特蛋白质总数电动汽车和联合国安全理事会样品。基因本体论(GO（开始）)以样品中蛋白质的细胞成分（B）、分子功能（C）和生物过程（D）最丰富为特征的术语。电动汽车胞外囊泡；联合国安全理事会，雪旺细胞

图7
胞外囊泡中富集倍数大于10的共表达蛋白的生物信息学分析(电动汽车)vs施旺细胞(联合国安全理事会). （A）KEGG公司共表达蛋白富集途径分析（蛋白数大于3）。GO（开始）以共表达蛋白的分子功能（B）、生物过程（C）和细胞成分（D）最丰富为特征的术语（2级）电动汽车与联合国安全理事会实现了P（P）显示值<.05

图8
TGF公司β/Smad信号和MAPK公司发出信号。A、，Smads公司和地图1中的表达式hDPC公司s与联合国安全理事会md和电动汽车s治疗。B、，TGF公司β/Smad信号和MAPK公司信令表达hDPC公司s与联合国安全理事会md和电动汽车s治疗。C、，TGF公司β2和干细胞相关蛋白Oct4和Sox2在电动汽车和联合国安全理事会.D，琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链式反应干细胞相关基因的结果联合国安全理事会‐电动汽车秒信使核糖核酸白色通道表示基因。C、控制，hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司; S中，联合国安全理事会md‐管理层hDPC公司施万细胞条件培养基培养；E、，电动汽车‐hDPC公司用α‐培养MEM公司/2%FBS公司含有雪旺细胞衍生的细胞外小泡；联合国安全理事会，施万细胞。误差线，±标准偏差（n=3）*P（P）<.05, **P（P）<.005

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