跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2015;61(2):145-53.
doi:10.1262/jrd.2014-081。 Epub 2015年2月3日。

胶原蛋白复合物提高成年小鼠成纤维细胞生成iPS细胞的效率

Byung-Soo Chang公司 1, Yun Jung Choi先生, 金浩（Jin-Hoi Kim）
附属公司

胶原蛋白复合物提高成年小鼠成纤维细胞生成iPS细胞的效率

Byung-Soo Chang公司等。 J Reprod开发. 2015.

摘要

正在测试不同的干预措施，以恢复成年鼠源性成纤维细胞的青春活力。然而，一些基本问题仍未解决，例如成年小鼠源性成纤维细胞活性随年龄增长而下降。因此，在本研究中，我们研究了胶原蛋白复合物治疗对成年小鼠源性成纤维细胞的再生或重新编程是否有有利影响。此外，我们研究了用总胶原蛋白复合物治疗期间成年小鼠源性成纤维细胞的再生机制。我们从幼年小鼠的尾部分离出总胶原蛋白复合物，并培养成年小鼠衍生成纤维细胞（含或不含胶原蛋白复合体）。与不含胶原蛋白复合物培养的成纤维细胞相比，含胶原蛋白复合体培养的成年成纤维细胞在连续五代中表现出更年轻的状态，扩张速度更快，并表现出减少的自发细胞死亡。在胶原复合物存在下培养的成纤维细胞在细胞周期相关基因（如PCNA）的启动子区域也表现出广泛的去甲基化，增殖增加，衰老减少。此外，与单独培养的成人成纤维细胞相比，年轻和成年成纤维细胞通过重组成纤维细胞成为诱导多能干细胞的效率明显更高。此外，机制证据表明，与抗增殖途径有关的基因，包括Ink4a/Arf位点基因和p53，在暴露于胶原复合物的成纤维细胞中下调。有趣的是，我们的结果表明，再生过程是通过α2β1整合素依赖的Bmi-1途径介导的。因此，胶原蛋白复合物既能刺激成纤维细胞增殖，又能抑制细胞死亡和生长停滞，这似乎是提高重编程效率的一种有希望的方法。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
构建逆转录病毒载体以产生转基因小鼠。（A） 设计逆转录病毒载体，通过四环素介导的诱导表达四种干细胞因子。有关更多详细信息，请参阅方法部分。（B） 用四因子PCR确认转基因小鼠。红色虚线表示转基因小鼠。（C） 用四环素介导的诱导作用对对照组和转基因小鼠来源的成纤维细胞中的四种干细胞因子进行Western blotting分析。通过添加强力霉素分离和培养成纤维细胞10天，然后使用每种抗体进行Western blot分析。
图2。
图2。
对胶原复合物衰老和凋亡的影响。A） Y、Ac和A-成纤维细胞的衰老相关β-半乳糖苷酶染色（蓝色）。放大倍数，×200。B） 细胞增殖试验。数据为三次实验的平均值±SEM，一式三份，p值<0.05。C） 根据胶原类型对A型成纤维细胞进行衰老相关β-半乳糖苷酶染色。D） 通过FACS分析测定凋亡的Y-、Ac-和A-成纤维细胞。（向下）数据来自三个独立实验（平均值±SD；下面板；P<0.05）。标有不同字母（a–c）的组之间存在显著差异，P<0.05。
图3。
图3。
胶原复合物培养成人成纤维细胞中α2β1整合素依赖性Bmi-1调控分析。（A） Y、Ac和A-成纤维细胞的Western blot分析。（B） Y、Ac和A-成纤维细胞中细胞周期调节蛋白的Western blot分析。（C） Y-、Ac-和A-成纤维细胞中Ink4/Arf抑癌基因表达的RT-qPCR分析。RT-qPCR标准化为GAPDH水平。标有不同字母（a–c）的组之间存在显著差异，P<0.05。（D） 胶原复合物涂层培养皿上老年成纤维细胞的再生模式。
图4。
图4。
AKT/mTOR相关基因表达的实时RT-qPCR和流式细胞术分析。A） Y、Ac和A衍生成纤维细胞中Akt、Src、Map2K1和mROR mRNA的表达。使用GAPDH看家基因对基因表达进行标准化。B） 使用流式细胞术比较Y、Ac和A衍生成纤维细胞中p-Akt和p-mTOR的表达。
图5。
图5。
iPS细胞的生成。A） 使用c-myc、Nanog、Oct3/4、Sox2和SSEA-1等多能性标记进行免疫染色分析。细胞核用DAPI染色。B） 多能性标记表达。底漆用于10月4日，Sox2系统，Klf4公司，c-Myc公司，纳克，Utf1号机组，Rex1型，Fbx15型，Dax公司，电子Ras、和克里普托特异性检测mRNA转录物。
图6。
图6。
iPS细胞的分化在体外和体内.A）三个胚层（内胚层）分化标记的RT-PCR分析、GATA4和α-甲胎蛋白; 中胚层，短梗和GATA2协议; 和外胚层，内斯廷和βIII-管蛋白). 值得注意的是，蒸馏水中BMP4 RT-PCR产物的微弱信号可能是由电泳过程中的流动引起的，该流动是由a衍生iPS细胞产生的RT-PCR产品引起的。Y、 Ac、A和DW分别表示Y、Ac、A-衍生iPS细胞和蒸馏水。B） 期间典型iPS细胞系的免疫细胞化学分析在体外利用三种生殖层标记（外胚层，微管蛋白；中胚层，短梗；内胚层，HNF3b）进行分化。C） 畸胎瘤形成分析。组织切片用H&E染色和免疫组织化学检查。内胚层衍生物，上皮细胞表达高水平的β-catenin。中胚层衍生物以横纹肌和平滑肌为例（中部）。外胚层谱系的组织，包括神经上皮，表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Takahashi K，Yamanaka S.通过特定因子从小鼠胚胎和成年成纤维细胞培养物中诱导多能干细胞。细胞2006；126: 663–676.-公共医学
    1. Takahashi K、Tanabe K、Ohnuki M、Narita M、Ichisaka T、Tomoda K、Yamanaka S。通过特定因子从成人成纤维细胞诱导多能干细胞。细胞2007；131: 861–872.-公共医学
    1. Yu J、Vodyanik MA、Smuga-Otto K、Antosiewicz-Bourget J、Frane JL、Tian S、Nie J、Jonsdottir GA、Ruotti V、Stewart R、Slukvin II、Thomson JA。从人体体细胞诱导的多能干细胞系。科学2007；318: 1917–1920.-公共医学
    1. Lowry WE、Richter L、Yachechko R、Pyle AD、Tchieu J、Sridharan R、Clark AT、Plath K。从皮肤成纤维细胞生成人诱导的多能干细胞。2008年美国国家科学院院刊；105: 2883–2888.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Nakagawa M、Koyanagi M、Tanabe K、Takahashi K、Ichisaka T、Aoi T、Okita K、Mochiduki Y、Takizawa N、Yamanaka S。从小鼠和人类成纤维细胞中产生无Myc的诱导多能干细胞。国家生物技术2008；26: 101–106.-公共医学

出版物类型