跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2013年7月9日；8（7）：e68549。
doi:10.1371/journal.pone.0068549。 2013年印刷。

Msl2是脊椎动物DNA损伤反应的一种新成分

郑来 1, 西蒙娜·莫拉夫科夫á, 伊万·卡尼特罗, 卢卡斯·安德热耶夫斯基, 德夫拉·M·沃尔什, 斯蒂芬·雷阿
附属公司

Msl2是脊椎动物DNA损伤反应的一种新成分

郑来等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

hMSL2（男性特异性致死2，人类）是一种具有泛素连接酶活性的环指蛋白。尽管已经证明组蛋白H2B靶向赖氨酸34，p53靶向赖胺酸351，表明其在转录调节和凋亡中的作用，但其在这些和其他过程中的功能仍不明确。为了进一步表征这种蛋白质，我们破坏了鸡DT40细胞中的Msl2基因。Msl2（-/-）细胞是活的，有轻微的生长缺陷。对这些细胞中的染色质进行生化分析后发现，与DNA损伤反应途径有关的几个组蛋白修饰水平发生了畸变。DNA修复实验表明，Msl2（-/-）鸡细胞和hMSL2缺失的人细胞都存在非同源末端连接（NHEJ）修复缺陷。DNA损伤分析也表明，Msl2和hMSL2蛋白在DNA损伤诱导后很快被修饰和稳定。此外，hMSL2介导赖氨酸1690处关键DNA修复介质53BP1的修饰，可能是泛素化。类似地，hMSL1和hMOF（第一只雄性不存在）在DNA损伤后不久在hMSL2的存在下被修饰。这些数据确定了Msl2/hMSL2在细胞对DNA损伤的反应中的新作用。其稳定的动力学表明NHEJ修复途径的早期功能。此外，Msl2在维持正常组蛋白修饰谱方面发挥作用，这也可能有助于DNA损伤反应。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。女士2敲除细胞可以存活，但有轻微的生长缺陷。
(A类)示意图绘制女士2位点和靶向策略：带有2.4和4 Kb同源臂的靶向盒靶向第二个Msl2的两个外显子（黑盒子）。成功靶向（KO）导致产生8.6/9 Kb BamH1消化片段，这取决于盒的嘌呤霉素（Pur）/布拉西菌素（Bla）抗性。(B类)Southern blot靶向性确认。(C类)Q-PCR衍生的表达水平Gapdh公司和女士2野生型mRNA，女士2−/−、和女士2-救援细胞系。表达式规范化为ß-肌动蛋白并与野生型水平进行比较。误差条表示标准偏差（n = 3). (D类)野生型扩散分析，女士2−/−、和女士2-救援细胞系。误差条表示标准偏差（n = 4). (E类)根据流式细胞术分析，由H3S10ph阳性细胞百分比确定的有丝分裂指数。误差条表示标准偏差（n = 3).
图2
图2。组蛋白修饰受到Msl2缺失的干扰。
(A类)从野生型，女士2−/−、和女士2-救援细胞系。用指示的抗体对面板进行了检测。(B类)量化（A）。对细胞系中各种修饰的平均表达水平进行量化，并在归一化到H3水平后相对于野生型细胞中的表达水平进行表达。误差条表示标准偏差（n≥3）。(C类)Q-PCR显示所指示的基因的表达水平。细胞系中的表达水平相对于野生型细胞中的表达，经过标准化处理Gapdh公司.
图3
图3。缺乏Msl2/hMSL2的细胞在NHEJ修复中存在缺陷。
(A类)野生型端接效率，女士2−/−和Prkdc公司−/−转染XmnI-digested GFP质粒16小时后，通过流式细胞术分析测定GFP表达，从而确定DT40细胞系。使用未切割的GFP质粒对转染效率进行标准化。将修复效率与野生型细胞进行比较。与野生型（n = 5):第页的值女士2−/−#1 = 0.0237（牛顿 = 5);第页的值女士2−/−#2 = 0.0586（牛顿 = 3); 和第页的值Prkdc公司−/− = 0.0912（n = 5). (B类)代表性免疫印迹显示hMSL2（上两个面板）和hMOF（下两个面板。(C类)用对照（续）或hMSL2-siRNAs处理的U2OS细胞中的末端连接修复试验，如（A）所示。第页价值 = 0.0014（牛顿） = 4). (D类)通过I-SceI消化的染色体内报告物修复测定用对照、hMSL2或hMOF-siRNAs处理的GC92细胞中NHEJ修复效率。通过流式细胞仪分析，以CD4阳性细胞百分比进行量化。将效率与对照细胞进行比较。hMSL2-siRNA处理细胞的p值 = 0.0318（牛顿 = 4） hMOF-siRNA处理细胞的p值 = 0.1947（牛顿 = 2). 误差线表示标准偏差。双尾学生的t吨-测试用于生成第页值。
图4
图4。Msl2和hMSL2在DNA损伤后稳定。
(A类)DT40野生型和女士2-在5 Gy IR之前和之后的指定时间内，用抗体拯救细胞。箭头表示HA2F-Msl2，上部带是在DT40全细胞提取物中看到的非特异性抗Flag伪影。(B类)Q-PCR分析女士2-救援细胞系显示HA2F-Msl2型在指定时间经5 Gy IR处理后表达。误差条表示标准偏差（n = 3). (C类)免疫印迹分析女士2-用DMSO（载具）、50或100µM ALLN或3µM MG132处理8小时后的救援细胞。HA2F-Msl2用箭头表示。修改后的HA2F-Msl2用开放箭头表示。(D类)对于（A），除了U2OS细胞，在指定时间进行10 Gy IR后，或用100µM ALLN处理6小时后，对其进行分析。hMSL2用箭头表示。修改后的hMSL2用开放箭头表示。
图5
图5。hMSL2介导53BP1、hMSL1和hMOF的修饰。
(A类)对53BP1（受试者）中的两个肽序列进行比对，报告为与含有H2BK34的序列相似（查询），并绘制出53BP1的M结构域示意图。赖氨酸1568（白圈）位于第二个都铎结构域内，赖氨酸1690（灰圈）位于核定位序列（NLS）内。OD代表齐聚结构域。还显示了RAD18报告的泛素化赖氨酸1273（黑圈）。(B类)对同时转染His-ubiquitin和HA2F-hMSL2以及V5-53BP1-M域野生型或点突变构建物的U2OS细胞进行免疫印迹分析。模拟细胞未转染任何质粒。(C和D)U2OS细胞的免疫印迹分析，转染His-ubiquitin和转染/不转染HA2F-hMSL2。如图所示，用10Gy的IR处理细胞，并在IR后15分钟收获。箭头表示V5-M域、内源性hMSL1和内源性hMOF。改性蛋白质用开放箭头表示。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 拉布拉多猎犬前交叉韧带断裂和AKC标准毛色相关遗传变异的鉴定。
    Lee BT、Baker LA、Momen M、Terhaar H、Binversie EE、Sample SJ、Muir P。 Lee BT等人。 BMC基因组数据。2023年10月26日；24(1):60. doi:10.1186/s12863-023-0164-z。 BMC基因组数据。2023 PMID：37884875 免费PMC文章。
  • E3s对p53的调节。
    Pan M、Blattner C。 Pan M等人。 癌症（巴塞尔）。2021年2月11日；13（4）:745。doi:10.3390/cancers13040745。 癌症（巴塞尔）。2021 PMID：33670160 免费PMC文章。 审查。
  • MSL1和CDK7之间的功能相互作用控制RNA聚合酶II Ser5磷酸化。
    Chlamydas S、Holz H、Samata M、Chelmicki T、Georgiev P、Pelechano V、Dündar F、Dasmeh P、Mittler G、Cadete FT、Ramírez F、Conrad T、Wei W、Raja S、Manke T、Luscombe NM、Steinmetz LM、Akhtar A。 衣原体S等。 自然结构分子生物学。2016年6月；23(6):580-9. doi:10.1038/nsmb.3233。Epub 2016年5月16日。 自然结构分子生物学。2016 PMID：27183194
  • 通过泛素-蛋白酶体途径限制p53的作用。
    裤子V，Lozano G。 Pant V等人。 基因开发2014年8月15日；28(16):1739-51. doi:10.1101/gad.247452.114。 基因开发2014。 PMID：25128494 免费PMC文章。 审查。

参考文献

    1. Brandsma I，Gent DC（2012），DNA双链断裂修复中的路径选择：平衡行为的观察。基因组整合3:9。-项目管理委员会-公共医学
    1. Wyman C，Kanaar R（2006）《DNA双链断裂修复：一切顺利，结局良好》。《基因年鉴》40:363–383。-公共医学
    1. Ciccia A，Elledge SJ（2010）DNA损伤反应：让刀子更安全。分子细胞40:179–204。-项目管理委员会-公共医学
    1. Polo SE，Jackson SP（2011）DNA断裂时DNA损伤反应蛋白的动力学：蛋白质修饰的重点。基因Dev 25:409–433。-项目管理委员会-公共医学
    1. Bunting SF，Callen E，Wong N，Chen HT，Polato F，et al.（2010）53BP1通过阻断DNA断裂的切除来抑制Brca1-缺陷细胞中的同源重组。手机141:243–254。-项目管理委员会-公共医学

出版物类型

MeSH术语

赠款和资金

SM得到了IRCSET学生奖学金和托马斯·克劳福德-海斯基金的支持(网址：http://www.irchss.ie/). ZL获得了贝克曼基金奖的支持。LPA得到了乳腺癌运动博士生奖学金的支持，2011NovPhD03(http://www.breastcancercampaign.org/). 这项工作得到了爱尔兰科学基金会PIYRA奖07/YI4/B1054的支持(http://www.sfi.ie网站/). 资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。