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内皮细胞表达miR-126。(A类) (上部)从各种小鼠组织中获取总RNA，并通过Northern印迹分析miR-126 RNA(下部)总RNA的溴化乙锭染色(B类) (上部)从各种细胞类型中采集总RNA，并通过Northern印迹法分析miR-126 RNA(下部)总RNA的溴化乙锭染色(C类)从不同类型的细胞中获取总RNA，并通过定量RT-PCR分析miR-126 RNA(D类)用AS寡核苷酸或premiR-126寡核苷酸转染HUVEC，然后培养3天。将1 ng/ml的TNF-α添加16 h。收集总RNA并通过Northern印迹分析miR-126 RNA水平(上部)溴化乙锭染色(下部).

Tamia A.Harris等人，《美国科学院院刊》，2008年2月5日；105(5):1516-1521.

引用全文

图2。来源：MicroRNA-126调节血管细胞粘附分子1的内皮表达。

miR-126通过靶向miR-126-结合位点抑制基因表达。(A类)miR-126与VCAM-1 3′-UTR中的一个区域部分互补。(上部)VCAM-1 mRNA和miR-126的示意图。(下部)VCAM-1 3′-UTR中miR-126的序列及其潜在匹配位点。(B类)互补miR-126结合位点被插入pMIR-Report质粒上荧光素酶报告子的下游，并转染到HEK293细胞中，其中含有不同浓度的前体R-126(n个=3±SD；*，对<0.01（0 nM vs.20 nM预混R-126）。(C类)将VCAM-1 3′-UTR中发现的部分互补miR-126结合位点（或突变结合位点）插入pMIR-Report质粒上荧光素酶报告子的下游，并转染到HEK293细胞中不同浓度的前体R-126(n个=3±SD；*，对<0.001（0 nM vs.30 nM预混R-126）。

Tamia A.Harris等人，《美国科学院院刊》，2008年2月5日；105(5):1516-1521.

引用全文

三。

图4。来源：MicroRNA-126调节血管细胞粘附分子1的内皮表达。

miR-126抑制白细胞粘附体外. (A类)用前体R-126或对照寡核苷酸转染HUVEC 2天，然后用TNF-α或对照处理6小时。将BCECF-AM标记的白细胞添加到HUVEC中，在37°C下培养45分钟，然后清洗。用荧光照相机拍摄粘附细胞。(B类)用前体R-126或对照寡核苷酸转染HUVEC 2天，然后用TNF-α或对照处理6小时。将HRP标记的白细胞添加到HUVEC中，在37°C下培养45分钟，然后清洗。对粘附细胞进行裂解，并用分光光度计在A类₄₅₀，然后校准为标准曲线(n个=2±SD；对=0.1（0 nM vs.30 nM预混R-126）。(C类)用前体R-126或对照寡核苷酸转染HUVEC 2天，然后用TNF-α或对照处理6小时。用VCAM-1抗体对细胞裂解物进行免疫印迹。(D类)用AS-miR-126或AS对照寡核苷酸转染HUVEC 2天，然后用TNF-α或对照处理6小时。将HRP标记的白细胞添加到HUVEC中，在37°C下孵育45分钟，然后洗涤。对粘附细胞进行裂解，并用分光光度计在A类₄₅₀并校准为标准曲线(n个=3±SD；*，对=0.02（0 vs.30 nM AS-miR-126）。(E类)用AS-miR-126或对照寡核苷酸转染HUVEC 2天，然后用TNF-α或对照处理6小时。用VCAM-1抗体对细胞裂解物进行免疫印迹。(如果)用TNF-α或对照组处理HUVEC 6 h。在37°C下，用VCAM-1、ICAM-1抗体或对照IgG孵育30 min。然后将HRP标记的白细胞加入HUVEC，在37°C下孵育45分钟，并洗涤。对粘附细胞进行裂解，并用分光光度计在A类₄₅₀并校准为标准曲线(n个=3±SD；*，对< 0.02).

Tamia A.Harris等人，《美国科学院院刊》，2008年2月5日；105(5):1516-1521.

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图3。来源：MicroRNA-126调节血管细胞粘附分子1的内皮表达。

miR-126抑制VCAM-1表达。(A类)TNF-α诱导HUVEC中VCAM-1的表达。用增加剂量的TNF-α刺激HUVEC 16小时，并用VCAM-1抗体免疫印迹细胞裂解物。(B类)内源性miR-126降低VCAM-1蛋白水平，击倒miR-126。用对照寡核苷酸（AS-control）或miR-126反义寡核苷酸（AS-miR-126）转染HUVEC，敲低内源性miR-126.然后培养3天。采集总蛋白并通过VCAM-1免疫印迹分析。(C类)内源性miR-126降低VCAM-1蛋白水平，增加miR-126。用前体R-126寡核苷酸转染HUVEC以增加miR-126，然后培养3天。将1 ng/ml的TNF-α添加16 h。采集总蛋白并通过免疫印迹法分析VCAM-1。(D类)用30 nM AS-miR-126、premiR-126或对照寡核苷酸转染HUVEC，并用TNF-α刺激，免疫印迹如上所述进行。信号强度被量化，并与对照转染细胞进行比较(n个=6±SD；*，对与对照组相比<0.03）。(E类)用对照寡核苷酸或premiR-126处理HUVEC，并用上述TNF-α刺激，用FACS测定VCAM-1的表达(n个=4±SD；*，对< 0.01). (如果)miR-126不影响稳态VCAM-1 mRNA水平。用premiR-126转染HUVEC，用TNF-α处理3h，通过Northern blotting分析VCAM-1的总RNA。(G公司)miR-126不影响VCAM-1 mRNA的稳定性。用预处理R-126转染HUVEC，用TNF-α处理3h，然后暴露于放线菌素D。放线菌素D后不同时间分离RNA，并通过定量RT-PCR分析VCAM-1和GAPDH mRNA水平。

Tamia A.Harris等人，《美国科学院院刊》，2008年2月5日；105(5):1516-1521.

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