背景
划痕试验是研究体外细胞迁移和增殖模式的主要方法。 该分析是一种很好的方法,用于表征和比较细胞在各种受控参数下的运动。 该方法是利用基本原理开发的,即在融合的细胞单层上进行伤口诱导或“划痕”会导致细胞迁移,试图关闭受影响的区域。 分析一段时间内板/孔中的伤口闭合率可用于假设其体内细胞对应物在类似刺激下的行为。 [1] 标准程序包括将所选细胞置于生长介质中形成单层细胞。 一旦达到理想的汇流水平,就可以使用刮擦装置以均匀的方式在井中心去除细胞。 在选择的时间点拍摄伤口区域的图像,以定量分析细胞迁移动力学。 [2] 本试验的主要目的是重述体内细胞过程,并试图得出有关动物系统迁移动力学的结论,因为试验中观察到的许多细胞-细胞相互作用也发生在整个活组织中。 例如,细胞迁移在皮肤组织再上皮化或受伤血管内皮关闭等过程中起着不可或缺的作用。 [3] 使用定制的深度学习图像分割模型对超过80k张图像进行训练,从而量化划痕区域。 在图像采集和分析之后,这些数据可用于对与细胞迁移相关的广泛影响做出结论,包括细胞基质对细胞间相互作用的影响,甚至可用于研究单个细胞的运动。 该检测方法因其简单、成本低和高通量时间而被频繁使用。
协议
一般程序
在第0天以适当的预先优化的播种密度将种子细胞放入微孔板中。 用Inccyte WoundMaker涂抹“刮伤”,以控制和保持刮伤,然后轻轻清洗。 在缺乏血清的培养基中加入所需药物或化合物(以最小化增殖的背景影响)。 成像井在0小时的时间点和所需的间隔(例如4小时、8小时、12小时、24小时和48小时)。 分析图像,量化并比较不同治疗组的伤口闭合情况。
Liang,C.,Park,A.和Guan,J.体外划痕试验:一种方便且廉价的体外细胞迁移分析方法。 Nat协议 2, 329–333 (2007). https://doi.org/10.1038/nprot.2007.30 Cory G.(2011)刮痕试验。 收录:Wells C.、Parsons M.(编辑)《细胞迁移》。 分子生物学方法(方法和协议) ,第769卷。 Humana出版社。 https://doi.org/10.1007/978-1-61779-2007-6_2 Vang Mouritzen,M.,Jenssen,H.使用自动光学相机进行细胞迁移体外测试的优化划痕试验。 J.视觉。 支出。 (138),e57691,doi:10.3791/57691(2018)。