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.2015年5月1日;8(5):5053-61.
2015年电子收集。

TRIM29在胃癌中作为癌基因发挥作用,并受miR-185调控

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TRIM29在胃癌中作为癌基因发挥作用,并受miR-185调控

冯秋等。 国际临床实验病理学杂志. .

摘要

含三部分基序29(TRIM29)属于转录因子TRIM家族,根据肿瘤类型可能作为癌基因或肿瘤抑制因子发挥作用。TRIM29在胃癌中的过度表达是常见的,但其潜在机制尚不清楚。在本研究中,我们研究了TRIM29在胃癌衍生细胞MGC803中的功能。RNAi介导的TRIM29沉默导致细胞增殖和集落形成显著降低,G1-S细胞周期阻滞和凋亡。有趣的是,TRIM29敲除细胞中β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达水平均下调,表明TRIM29参与调节Wnt/β-catentin信号通路的活性。此外,基于靶点预测和荧光素酶分析,我们确定TRIM29是miR-185的潜在靶点,miR-185在胃癌中经常下调。MGC803细胞中miR-185的过度表达抑制了TRIM29的表达和Wnt/β-catenin信号的活性。综上所述,我们的结果表明,TRIM29在胃癌中作为癌基因发挥作用,并受miR-185调控。

关键词:TRIM29;Wnt/β-catenin信号;胃癌;miR-185。

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图1
图1
胃癌衍生细胞株MGC803中TRIM29的沉默强烈抑制细胞增殖和集落形成。A.TRIM29 siRNA降低了TRIM29的mRNA表达。B.TRIM29 siRNA降低了TRIM29的蛋白表达。C.TRIM29 siRNA、NC siRNA转染后的MGC803生长曲线。在第1、2、3、4、5、6和7天评估生长指数。直径3×102细胞被镀成6厘米的板。10天后,用甲醇固定细胞,并用0.1%结晶紫染色。所有实验均一式三份**< 0.01.
图2
图2
TRIM29沉默诱导G1-S细胞周期停滞、凋亡和Wnt失活。A.流式细胞术分析TRIM29 siRNA、NC siRNA转染后MGC803细胞的细胞周期进展。B.流式细胞术分析TRIM29 siRNA、NC siRNA转染后MGC803细胞的凋亡。C.Western blotting显示TRIM29沉默抑制了Wnt/β-catenin途径基因的活性,包括β-catentin、C-myc和CyclinD1。
图3
图3
TRIM29被确定为miR-185的直接靶点。A.TargetScan和Miranda显示TRIM29被确定为miR-185的直接靶点。B.经miR-185模拟物(100 nM)或NC.C处理的293T细胞中的TRIM29-3'UTR-WT和TRIM29-3’UTR-MUT报告荧光素酶活性。在MGC803细胞系中,TRIM29在转录和蛋白质水平上均受miR-185.负调控。所有实验均一式三份**< 0.01.
图4
图4
miR-185的过度表达抑制了GC细胞的生长,并诱导了细胞凋亡和Wnt失活。在两种胃癌细胞系中,A.miR-185水平降低。B.在MGC803胃癌细胞中过度表达转染miR-185模拟物的miR-185。C.上调miR-185抑制MGC803细胞的生长。在第1、2、3、4、5、6和7天评估生长指数。D.上调miR-185抑制集落形成。E.流式细胞术分析miR-185模拟转染后MGC803细胞的细胞周期进展。F.miR-185模拟转染后MGC803细胞凋亡的流式细胞术分析。G.Western blotting显示miR-185上调抑制了Wnt/β-catenin途径基因的活性,包括β-catentin、c-myc和CyclinD1。所有实验均一式三份*P<0.05**P<0.01。

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