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.2013年1月11日；288(2):1365-73.
doi:10.1074/jbc。M112.434142。 Epub 2012年11月12日。

高迁移率组Box 1通过Toll样受体4和干扰素反应因子3依赖机制抑制人肺动脉内皮细胞迁移

艾琳·M·鲍尔 1, 理查德·夏皮罗, 蒂莫西·比利亚尔, 菲利普·鲍尔
附属公司

高迁移率组Box 1通过Toll样受体4和干扰素反应因子3依赖机制抑制人肺动脉内皮细胞迁移

艾琳·M·鲍尔等。 生物化学杂志. .

摘要

在肺动脉高压中，毛细血管前小动脉的丢失是由血管损伤引起的内皮功能障碍引起的。内皮细胞迁移和增殖对血管再生至关重要。本研究主要研究高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对这些关键过程的影响。HMGB1对人肺动脉内皮细胞（HPAEC）增殖无影响。相反，HMGB1剂量依赖性地抑制VEGF刺激的HPAEC迁移。HMGB1对HPAEC迁移的影响是TLR4依赖性的，因为它被TLR4 siRNA或TLR4-中和抗体逆转。低氧暴露于HPAECs会导致HMGB1的移位和释放，并抑制HPAEC的迁移。低氧对HPAEC迁移的影响由HMGB1介导，因为HMGB1-中和抗体而非控制性IgG恢复了HPAEC的迁移。同样，TLR4 siRNA而非对照siRNA逆转了HPAECs中缺氧的抑制作用。经典TLR4信号通路需要适配器蛋白MyD88并导致下游NFκB活化。有趣的是，HMGB1未能刺激NFκB转位到细胞核，而是激活了以干扰素反应因子3（IRF3）激活为特征的替代途径。这与HMGB1刺激NFκB核转位而非IRF3的人脐静脉内皮细胞形成对比。IRF3 siRNA，而非MyD88 siRNA，逆转了HMGB1对HPAEC迁移的抑制作用。这些数据表明HMGB1通过TLR4和IRF3依赖机制抑制HPAEC迁移，这是血管再生的关键过程。

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数字

图1。
图1。
缺氧诱导HPAEC中HMGB1的释放。 A类用免疫荧光染色法（HPAECs，绿色; DAPI、，蓝色;比例尺，25微米）。显微照片是三个独立实验的代表。B类和C类，Western blot分析(B类)和定量密度测定(C类)HMGB1在缺氧暴露指定时间的HPAECs细胞培养基中的蓄积量如图所示。印迹是四个独立实验的代表。*，第页< 0.05;误差线、瑞典。
图2。
图2。
HMGB1抑制VEGF诱导的HPAEC迁移。 A类，用VEGF（50 ng/ml）或VEGF+HMGB1（1μg/ml）处理10 h的HPAECs细胞迁移检测的代表性图像。B类在没有/存在HMGB1（100 ng/ml–1μg/ml）的情况下，用VEGF（50 ng/ml）刺激血清缺乏的HPAEC，并使用单层伤口试验评估细胞迁移。C类和D类HMGB1（1μg/ml）对VEGF（50 ng/ml）刺激的HUVEC迁移的影响(C类)和HDMEC迁移(D类).E类，多粘菌素对HMGB1抑制的HPAEC迁移的影响（1000 ng/ml）。F类，使用[3H]胸苷掺入法研究HMGB1对HPAEC增殖的影响。数据表示平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05.
图3。
图3。
TLR4介导HMGB1对HPAEC迁移的影响。 A类、对照组TLR4和TLR4 siRNA处理的HPAECs的定量PCR。B类，用TLR4 siRNA转染HPAECs（25 n米)或对照siRNA（25 n米)以及在有/无HMGB1（1μg/ml）的情况下评估VEGF诱导的细胞迁移。(C类)用TLR4阻断抗体（20μg/ml）或对照IgG（20μg/ml）处理HPAEC，并在HMGB1存在/不存在的情况下评估VEGF诱导的细胞迁移。数据表示平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05.
图4。
图4。
缺氧诱导的HMGB1释放通过TLR4抑制HPAEC的迁移。在暴露于(A类)缺氧（1%O2)(B类)αHMGB1-中和抗体（10μg/ml）或IgG对照抗体(C类)转染抗TLR4的siRNA后缺氧（25 n米)或对照siRNA（25 n米). 数据表示平均值±S.E(误差线)三到四个独立实验。方差分析；*，第页< 0.05.
图5。
图5。
HMGB1刺激HPAECs中IRF3的核移位。 A类用免疫荧光染色法检测HMGB1（1μg/ml）暴露2 h的HPAECs的IRF3核易位(绿色; 核染色DAPI，蓝色;比例尺，50μm）。图像是三个独立实验的代表。
图6。
图6。
HPAEC中的差异信号与HUVEC。HPAECs细胞质和核组分中NUMA（150 kDa，核标记）、HSP90（90 kDa（细胞质标记）、β-肌动蛋白（42 kDa）、NFκB-65（65 kDa(A类)和HUVEC(C类)用HMGB1（1μg/ml）处理指定时间。印迹是三个独立实验的代表，并在B类和D类分别是。E类Western blot分析HPAECs和HUVECs在指定时间内磷酸化p38 MAPK和总p38 MAPK。印迹是三个独立实验的代表，并在F类图表示平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05与非模拟控制。
图7。
图7。
LPS刺激HPAECs中MyD88依赖和独立的TLR4信号。 A类用免疫荧光染色法检测LPS（1μg/ml）暴露1 h的HPAECs的IRF3核易位(绿色; 核染色DAPI，蓝色;比例尺，25μm）。图像是三个独立实验的代表。B类Western blot分析显示，经LPS（1μg/ml）处理的HPAECs的细胞质和核组分中NUMA（150 kDa，核标记）、HSP90（90 kDa（细胞质标记）、β-肌动蛋白（42 kDa）、NFκB-65（65 kDa。印迹是三个独立实验的代表，并在C类数据表示平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05与非模拟控制。
图8。
图8。
HMGB1诱导HPAECs差异基因与HUVEC。 A类和B类、HPAEC(A类)和HUVEC(B类)用HMGB1（1μg/ml）刺激4h，然后通过RT-PCR评估ISG20、IFNβ或iNOS mRNA的诱导。C类和D类每个基因的相对表达在直方图中量化，并归一化为GAPDH mRNA表达。数据表示平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05与非模拟控制。
图9。
图9。
HMGB1对HPAEC迁移的抑制依赖于IRF3。 A类用对照组或MyD88siRNA治疗HPAECs后，通过定量RT-PCR评估MyD88的相对表达。B类用抗MyD88的siRNA处理的HPAECs中评估VEGF刺激的细胞迁移（25 n米)或使用对照siRNA（25 n米)在有/无HMGB1的情况下（1μg/ml）。C类用干扰或IRF-3 siRNA处理HPAECs后，使用定量PCR检测IRF-3的相对表达。D类用抗IRF3的siRNA处理的HPAEC中评估VEGF刺激的细胞迁移（25 n米)或使用对照siRNA（25 n米)在存在/不存在HMGB1（1μg/ml）的情况下。在所有面板中，数据代表平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。方差分析；*，第页< 0.05.
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    1. Evankovich J.、Cho S.W.、Zhang R.、Cardinal J.、Dhupar R.、ZhangL.、Klune J.R.，Zlotnicki J.、Billiar T.、Tsung A.（2010）缺血和再灌注损伤期间肝细胞释放的高迁移率族蛋白框1由组蛋白脱乙酰酶活性降低介导。生物学杂志。化学。285, 39888–39897-项目管理委员会-公共医学
    1. Park J.S.、Svetkauskaite D.、He Q.、Kim J.Y.、Strassheim D.、Ishizaka A.、Abraham E.（2004）Toll样受体2和4通过高迁移率族蛋白1参与细胞激活。生物学杂志。化学。279, 7370–7377-公共医学
    1. Park J.S.、Gamboni-Robertson F.、He Q.、Svetkauskaite D.、Kim J.Y.、Strassheim D.、Sohn J.W.、Yamada S.、Maruyama I.、Banerjee A.、Ishizaka A.、Abraham E.（2006）高迁移率族蛋白盒1与多个Toll样受体相互作用。美国生理学杂志。细胞生理学。第290页，第917页–第924页-公共医学
    1. Huang W.，Tang Y.，Li L.（2010）HMGB1，一种在败血症中有效的促炎细胞因子。细胞因子51、119–126-公共医学
    1. Ohmori H.，Luo Y.，Kuniyasu H.（2011）非甾体核因子HMGB1作为结直肠癌的治疗靶点。专家操作。疗法。目标15183–193-公共医学

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