跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年8月23日；190(4):511-21.
doi:10.1083/jcb.200911141。 Epub 2010年8月16日。

自噬需要内质网通过Atg14L靶向PI3-激酶复合物

松下小治 1, 盛田英治, Tatsuya Saitoh公司, 石佐·阿基拉（Shizuo Akira）, 尼古拉斯·蒂斯塔基斯, 岩井裕久, 野田毅, 吉森田松（Tamotsu Yoshimori）
附属公司

自噬需要内质网通过Atg14L靶向PI3-激酶复合物

松下小治等。 J细胞生物学. .

摘要

自噬是一种分解代谢过程，允许细胞通过自噬体的形成和溶酶体的降解来消化其细胞质成分。最近，在哺乳动物细胞中发现了一种自噬特异性磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-激酶）复合物，由hVps34、hVps15、Beclin-1和Atg14L组成。Atg14L对这种自噬复合体具有特异性，定位于内质网（ER）。敲除Atg14L导致DFCP1阳性omegasome消失，这是一种与自噬体和内质网密切相关的膜结构。Atg14L中导致内质网定位缺陷的点突变在自噬诱导中也有缺陷。将DFCP1的ER靶向基序添加到该突变体中，完全弥补了Atg14L敲除胚胎干细胞中的自噬缺陷。因此，Atg14L将III类PI3-激酶的一个子集招募到内质网，否则磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）基本上不存在。内质网中PI3P依赖Atg14L的出现使该细胞器成为自噬体形成的平台。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
Atg14L参与自噬体形成的初始阶段。（a） 对稳定表达GFP-DFCP1的HEK293细胞转染抗Atg14L的shRNA或不转染shRNA。用所示抗体对细胞裂解物进行免疫印迹。（b） 饥饿前后在这些细胞中观察到GFP信号。（c） 计数每个细胞GFP阳性点的数量；给出了平均值±SD值。N、 营养丰富；S、 饥饿。（d） 如材料和方法所述，对HEK293细胞进行裂解并进行亚细胞分离。用每个细胞器标记抗体对等量的总、细胞溶质和ER组分进行免疫印迹。各部分的回收率以平均值±SD表示。（e） 将稳定表达GFP-DFCP1的HEK293细胞用标记的Atg14L瞬时转化并饥饿。细胞被固定并用所示抗体染色。插图显示方框区域的放大倍数更高。（f） 用GFP-Atg14L转染HEK293细胞，转染或不转染mCherry-linked显性阴性ULK1，并将这些细胞在完全培养基或饥饿培养基中培养60分钟。
图2。
图2。
Atg14L结构的域分析。（a） 用四种携带One-Strep-Flag（OSF）标记的Atg14L、Beclin-1、hVps34和hVps15的质粒同时转染HEK293细胞，并使用Strep-Tactin Sepharose珠去除Atg14L。使用空质粒代替Atg14L作为对照。对沉淀物进行SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色。（b） Atg14L缺失突变体构建图。（c） 瞬时表达每个结构的HEK293细胞用抗GFP抗体进行共免疫沉淀分析。每种沉淀剂都用所示抗体进行免疫印迹。IP，免疫沉淀。（d） Atg14同源基因N末端保守区的比对。保守的半胱氨酸重复序列被装箱。序列保守性表示为：星号表示种间完全匹配，句号表示大部分保守性，冒号表示比句号更保守性。智人（Hs），小家鼠（百万），五倍子（Gg），达尼奥雷里奥（医生），黑腹果蝇（Dm），光滑念珠菌（Cg），以及酿酒酵母（Sc）如图所示。（e） 用表达GFP-Atg14L或GFP-Atg 14L4C4A的腺病毒瞬时转染NRK细胞，并在富含营养的条件下固定。用抗凝血酶抗体作为ER膜标记物对细胞进行染色。方框区域的放大倍数如下所示。棒材，10µm。
图3。
图3。
Atg14L在质膜中的异位表达。（a） 用表达GFP-Atg14L或GFP-Atg 14LCAAX的腺病毒瞬时转染A549细胞，并进行饥饿处理。细胞固定并用抗Beclin-1抗体染色。方框区域的放大倍数如下所示。（b） 用MEF-hVps34和GFP或GFP-Atg14LCAAX共转染HEK293细胞，并用抗Flag抗体染色。棒材，10µm。
图4。
图4。
过表达Atg14L诱导自噬。用携带GFP-Attg14L或GFP-Atg14L4C4A的腺病毒瞬时转染A549细胞。（a和b）将饥饿前（a）或饥饿后（b）的细胞固定并用抗LC3抗体染色。（c） 计算每个细胞的LC3阳性点刺数，并给出平均±SD值。棒材，10µm。
图5。
图5。
Atg14L定位对其功能的影响。（a） 用pCAG载体的GFP、GFP-Atg14L、GFP-Attg14L4C4A或GFP-ER-Atg14L4C4A转染Atg14L4敲除小鼠ES细胞，并进行饥饿处理。细胞固定并用抗Atg16L或抗LC3抗体进行免疫染色。（b和c）至少在10个GFP阳性细胞中计算每个细胞Atg16L阳性点（b）和LC3阳性点（c）的数量，并给出平均±SD值。棒材，10µm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Axe E.L.、Walker S.A.、Manifava M.、Chandra P.、Roderick H.L.、Habermann A.、Griffiths G.、Ktistakis N.T.，2008年。富含磷脂酰肌醇3-磷酸的膜室形成的自噬体，动态连接到内质网。《细胞生物学杂志》。182:685–701 10.1083/jcb.200803137-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bozidis P.，Williamson C.D.，Colberg-Poley A.M.，2007年。从转染细胞和人巨细胞病毒感染的原代成纤维细胞中分离内质网、线粒体和线粒体相关膜组分。货币。协议。细胞生物学。第3章：单元3.27 10.1002/047114303.cb0327s37-内政部-公共医学
    1. Cheung P.C.、Trinkle-Mulcahy L.、Cohen P.、Lucocq J.M.，2001年。一种新型磷脂酰肌醇3-磷酸结合蛋白的表征，该蛋白含有两个串联的FYVE指，靶向高尔基体。生物化学。J.355:113–121 10.1042/0264-6021:3550113-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Fujita N.、Hayashi-Nishino M.、Fukumoto H.、Omori H.、Yamamoto A.、Noda T.、Yoshimori T.2008a。Atg4B突变体阻碍LC3副logue的脂质化并导致自噬体闭合缺陷。分子生物学。单元格。19:4651–4659 10.1091/mbc。E08-03-0312号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Fujita N.、Itoh T.、Omori H.、Fukuda M.、Noda T.、Yoshimori T.2008b。Atg16L复合物为自噬中的膜生物生成指定LC3脂质沉积的位置。分子生物学。单元格。19:2092–2100 10.1091/mbc。E07-12-1257号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源