跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年1月5日；107(1):58-63.
doi:10.1073/pnas.0900121106。 Epub 2009年12月4日。

Myc需要Cdk2的磷酸化来抑制Ras诱导的共转化衰老

根据Hydbring 1, 福阿德·巴赫拉姆, 苏英涛, 苏珊娜·特隆内尔舍尔, 卡里·霍格斯特朗, 娜塔莉·冯·德莱尔, 哈米德·雷扎·谢里菲, 理查德·利利什基斯, 纳丁·海因, 吴思勤（Siqin Wu）, Jörg Vervoorts公司, 玛丽·亨利克森, 阿尔夫·格兰迪安, 伯恩哈德·吕舍, 拉尔斯·贡纳尔·拉尔森
附属公司

Myc需要Cdk2的磷酸化来抑制Ras诱导的共转化衰老

根据Hydbring等。 美国国家科学院程序. .

摘要

MYC和RAS致癌基因在癌症中经常被激活，加在一起足以转化啮齿动物细胞。这种合作的基础尚不清楚。我们发现，尽管Ras干扰了Myc诱导的凋亡，但Myc抑制了Ras诱导的衰老，同时消除了肿瘤发生的两个主要障碍。抑制细胞衰老需要cyclin E/cyclin-dependent kinase（Cdk）2在Ser-62对Myc进行磷酸化。Cdk2在启动子处与Myc相互作用，影响Myc依赖的基因调控，包括编码已知控制衰老蛋白质的Bmi-1、p16、p21和hTERT。Cdk抑制剂p27Kip1可消除Myc对衰老的抑制，后者由IFN-gamma等抗增殖信号或Cdk2药物抑制剂诱导，但不由其他Cdk的抑制剂诱导。相反，模仿磷酸化的Myc-S62D突变体对这些操作具有抗性。细胞周期蛋白E/Cdk2的抑制逆转了Myc/细胞周期蛋白E/Cdk2引起的衰老相关基因表达模式。这表明Cdk2作为Myc抗衰老功能的转录辅因子和激活剂的作用，并提供了对Myc-p27Kip1拮抗作用的机制性见解。最后，我们的研究结果强调，药物抑制Cdk2活性是癌症治疗的潜在治疗原则，尤其是对活化Myc或Ras的肿瘤。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
REF中Myc抑制Ras诱导的衰老依赖于Ser-62。(A类)用Myc和/或致癌Ras的表达质粒转染初级REF。显微照片显示转染细胞培养5天后，通过SA-β-Gal染色分析衰老。(B类)根据对50个随机选择的细胞的分析，给出了至少三个实验的SA-β-Gal染色（蓝色柱）的平均值和标准偏差。细胞凋亡（红柱）分析如材料和方法. (C类–F类)REF被转染并分析为A类和B类使用活化的c-Raf或MEK或接受TPA治疗(C类和D类)或用不同的Myc突变体转染(E类和F类). (G公司)转染Ras+WT-Myc或突变体的REF的焦点形成分析。(H（H）)焦点数量G公司转染12天后计数（蓝色柱）并分析SA-β-Gal染色（红色柱）。控制。
图2。
图2。
Cdk2-选择性药物抑制剂和p27Kip1可消除Ser-62磷酸化和Ras诱导衰老的抑制。用Myc-T58A转染U2OS细胞并用指示的激酶抑制剂处理（4小时）(A类和B类)蛋白酶体抑制剂MG115（2小时）或与抗GFP、Cdk2或cyclin E的siRNA寡核苷酸共转染(C类). 使用磷酸化和pan-Myc抗体通过免疫印迹分析Myc蛋白。Roscovitine（Rosc）（抑制Cdk2/Cdk1）、kenpaullone（Kenp）（抑制Cdk1>Cdk2）、fascalipsin（Fasc）（阻止Cdk4>Cdk1/Cdk2）、PD98059（PD）（抑制Mek1），SB203580（SB）（禁止p38 MAPK>JNK）、AR-A014418（AR）（抑制GSK3）、wortmannin（Wort）（抑制PI3K）、Y27632（抑制ROCK）、CVT-313（抑制Cd k2），CVT T-2454（抑制Cdk2），CVT-2584（抑制Cdk2）、RO3306（抑制Ck1）、238811（抑制Cd k9）和U0126（抑制Mek1/2）。(C类)为了观察敲除效率，对总细胞裂解物进行了Western blot分析，如图所示。(D类)将WT c-Myc或Myc-T58A与p27共转染到HeLa细胞中，随后如A类–C类采用T58A/S62A双突变体作为阴性对照。(E类和F类)在存在激酶抑制剂或p27共表达的情况下，Myc+Ras转染REF的衰老，如图1所示A类和B类. (G公司)CVT-2584对Myc+Ras转染REF增殖的影响。图形表示每个板的单元数。抑制剂浓度见材料和方法.
图3。
图3。
IFN-γ消除了v-Myc表达的人U-937细胞衰老的抑制，与诱导的p27表达相关，抑制Cdk2活性，降低Ser-62磷酸化。(A类)描述U-937分化模型的示意图。IFN-γ逆转单核细胞分化和衰老的v-Myc阻断。(B类)U-937-GTB亲代细胞(左侧)和U-937-myc-6细胞(赖特)在SA-β-Gal染色前用TPA和/或IFN-γ处理6天。控制。(C类)根据对50个随机选择的细胞的分析，给出了SA-β-Gal染色的平均值和标准偏差。Ser-62磷酸化(D类)和p27表达(F类)免疫印迹分析测定IFN-γ+TPA处理的细胞。(E类)用细胞周期蛋白E抗体免疫沉淀的细胞裂解物在体外检测组蛋白H1磷酸化。罗斯科维汀。
图4。
图4。
p27或Cdk2药物抑制剂对Cdk1的抑制会导致v-Myc表达的人类U-937-Myc-6细胞衰老。(A类和B类)用编码p27WT或p27T187A和GFP作为荧光标记的逆转录病毒载体转导细胞。GFP公司+细胞分选培养6天，±TPA，SA-β-Gal染色。(B类)为了估计p27转导细胞的相对SA-β-Gal强度，测量了25个细胞的像素强度。
图5。
图5。
由IFN-γ和Cdk2抑制剂CVT-313调节的Myc靶启动子处的Myc磷酸化和Myc-cyclin E/Cdk2/p27关联。(A类–D类)Myc与磷酸化Myc结合的定量ChIP分析(左侧)以及Cdk2和p27(赖特)使用B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(A类),第16页(B类),p21蛋白(C类)、和小时(D类)在U-937-myc-6细胞中IFN-γ+TPA或Cdk2抑制后的启动子。对照，免疫前血清；N.D.，未确定。
图6。
图6。
细胞周期蛋白E/Cdk2作为Myc驱动转录的辅因子发挥作用。(A类和B类)U2OS细胞中M4mintk-Luc荧光素酶报告基因活性(A类)和，共小时-REF中的Luc(B类)与表达所示WT和突变Myc和/或cyclin E/Cdk2的构建物共转染后。(C类)IFN-γ和/或TPA处理后U-937细胞中的M4mintk-Luc活性。(D类和E类)用定量RT-PCR分析IFN-γ+TPA（24 h）或CVT-313 Cdk2抑制剂（48 h）处理的U-937-Myc-6细胞中指示Myc靶基因的mRNA表达。Myc和Ras在转型中的合作性模型(F类)以及Myc对衰老的调节(G公司). E/K2、细胞周期蛋白E/Cdk2。（更多解释请参见文本和图表。）
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. 土地H，帕拉达LF，温伯格RA。原代胚胎成纤维细胞的肿瘤转化需要至少两个协同的癌基因。自然。1983;304:596–602.-公共医学
    1. Karnoub AE，Weinberg RA。致癌基因：人格分裂。Nat Rev Mol细胞生物学。2008年；9:517–531.-项目管理委员会-公共医学
    1. 艾勒斯·M，艾森曼·RN。Myc的广泛影响力。基因开发2008；22:2755–2766.-项目管理委员会-公共医学
    1. Bahram F、von der Lehr N、Cetinkaya C、Larsson LG。淋巴瘤中c-Myc热点突变导致泛素化效率低下，蛋白酶体介导的周转减少。鲜血。2000;95:2104–2110.-公共医学
    1. Vervoorts J，Lüscher Firzlaff J，Lüscher B.通过翻译后机制调节MYC的来龙去脉。生物化学杂志。2006;281:34725–34729.-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源