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.2009:497:19-31.
doi:10.1007/978-1-59745-566-42。

用定量蛋白质组学鉴定SUMO靶蛋白

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用定量蛋白质组学鉴定SUMO靶蛋白

延斯·安徒生等。 分子生物学方法. 2009.

摘要

小泛素样修饰物(SUMOs)靶蛋白的鉴定是深入了解SUMOs细胞功能的关键一步。SUMO靶标丰度低、这些靶标蛋白中只有一小部分被sumoylated,以及解偶联酶的高活性阻碍了SUMOs底物蛋白的鉴定。定量蛋白质组学是克服这些挑战的有力工具,因为它可以区分富含SUMO的制剂中的污染蛋白质和真正的靶蛋白。本章描述了应用细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记(SILAC)鉴定SUMOs靶蛋白的方法学细节。除了稳态的琥珀酰化外,琥珀酰化蛋白质组还经历动态重排,以响应各种刺激。SILAC还允许研究对这些刺激作出反应的磺酰化动力学。

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