跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2007年8月；133（2）：647-58。
doi:10.1053/j.gastro.2007.05.022。 Epub 2007年5月21日。

MicroRNA-21调控人肝癌PTEN抑癌基因的表达

《梵音梦》 1, 罗杰·亨森, 哈尼娅·韦赫贝·珍妮克, 卡尔帕纳·戈沙尔, 萨姆森·雅各布, 图沙·帕特尔
附属公司

微小核糖核酸-21调节人肝细胞癌中PTEN抑癌基因的表达

《梵音梦》等。 胃肠病学. 2007年8月.

摘要

背景和目标：microRNAs（miRNAs）是一种短的非编码RNA，对基因表达进行负调控。尽管miRNA异常表达在癌症中的作用已经被假设，但异常表达的miRNA的病理生理作用和与肿瘤生物学的相关性尚未确定。

方法：我们通过表达谱分析评估了miRNA在人肝细胞癌（HCC）中的表达，并确定了靶基因和上调miRNA的生物学功能效应。

结果：在使用miRNA微阵列进行的表达谱分析研究中，发现miR-21在HCC肿瘤和细胞系中高度过度表达。抑制培养的肝癌细胞中的miR-21可增加磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）抑癌基因的表达，并降低肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。通过转染前体miR-21增强miR-21的表达，可增加肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。此外，在转染前体miR-21的正常人肝细胞中观察到细胞迁移增加。PTEN被证明是miR-21的直接靶点，并有助于miR-21对细胞侵袭的影响。miR-21的调节改变了黏着斑激酶磷酸化和基质金属蛋白酶2和9的表达，这两种PTEN下游介质都参与细胞迁移和侵袭。

结论：miR-21的异常表达可通过调节PTEN表达和参与调节癌细胞表型特征（如细胞生长、迁移和侵袭）的PTEN依赖性通路，促进肝癌的生长和扩散。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
人类恶性和非恶性肝组织和细胞中miRNA的表达谱。按照材料和方法一节中的描述，通过与环氧涂层载玻片上的miRNA特异性探针杂交，分离miRNA并进行分析。正常肝组织样本用Cy3标记，而肝癌肿瘤样本用Cy标记（n=8）。图示了具有代表性的芯片图像和所选表达增加的miRNA的斑点。底部面板中的数据表示日志的平均±标准误差2每个特定miRNA的Cy5/Cy3荧光强度比值。
图2
图2
miR-21在人类原发性肝癌中上调。从HCC（T）和匹配对照（N）中分离出总RNA，并按照材料和方法部分所述进行Northern blot分析。通过Kodak Imaging软件对每条泳道中的信号进行量化，并测定miR-21与5S核糖体RNA的比率。星号表示mir-21上调的人类原发性肝癌。在前9个样本中，由于更多的RNA（20μg） 已加载。对于样品10–20、10μ加载了g RNA。
图3
图3
肝癌细胞系中miR-21的表达增加。从正常人肝细胞和5个肝癌细胞系中分离出miRNA。(一个)用miRNA微阵列标记和分析miRNA。miR-21的代表性杂交点如左图所示，而来自4个独立研究的定量表达数据如右图所示。(B类)使用TaqMan microRNA检测试剂盒对miR-21进行实时定量PCR。代表性放大图和分离曲线显示在左侧，而代表三次实验平均值和SD的定量数据显示在右侧的条形图中。miR-21的表达被标准化为U6B小核RNA基因（RNU6B）对照的表达*P（P）与正常肝细胞中的表达相比，<0.05。
图4
图4
miR-21对细胞增殖和迁移的调节。(一个)用30 nmol/L miR-21特异性抑制剂转染肝癌细胞(■) 或控制miRNA抑制剂(□), 72h后测定增殖指数。(B类)用30nmol/L的miR-21前体（灰色条）或对照miRNA前体转染HCC细胞(□), 72h后测定增殖指数。(C类)用抗miR-21转染肝癌细胞(■) 或控制抑制剂(□). 细胞在8-μm孔按照材料和方法一节中的描述进行评估，并表示为任意荧光单位（AFU）。(D类)通过实时PCR检测转染对照组或miR-21前体的正常人肝细胞（HHC），或转染对照或抗miR-21抑制剂的HepG2细胞中miR-21的表达。(E类)正常人肝细胞转染mir-21前体（灰条）或对照miRNA前体(□), 并评估细胞迁移情况。对4个独立实验的平均误差和标准误差进行了说明*P（P）与对照组相比，<0.05。
图5
图5
miR-21对细胞侵袭的调节。(一个)正常人肝细胞（HEP）或HCC细胞（5×104)接种在96个预先涂有细胞外基质的平板中，并按照材料和方法一节中的描述评估细胞侵袭。入侵指数表示为任意荧光单位（AFU）。细胞系侵袭细胞外基质的能力不同(B类)用30 nmol/L抗miR-21转染肝癌细胞(■) 或控制抑制剂(□), 72小时后检测细胞浸润情况。抗miR-21可降低所有4种细胞系的细胞侵袭性。所示结果代表4个独立实验的平均±标准误差*P（P）与对照组相比，<0.05。
图6
图6
PTEN是miR-21的靶点。HCC细胞被放置在6孔板中。细胞转染1μ肾素荧光素酶表达结构pRL-TK和1的gμg的pGL3-PTEN-3′-UTR萤火虫荧光素酶表达结构，以及抗miR-21或对照抑制剂。在存在抗miR-21的情况下，萤火虫荧光素酶相对活性的增加表明PTEN的3′-UTR包含一个受miR-21调控的靶点。数据表示8次单独测定的平均值±标准误差*P（P）与对照组相比，<0.05。
图7
图7
miR-21调节PTEN和下游激酶的表达。(一个)在11例HCC肿瘤（灰条）和匹配的非肿瘤切片的RNA中评估PTEN表达的实时PCR(□). PTEN表达式的标准化比率显示在每个条的上方。(B类)细胞裂解物取自在100 mm培养皿中培养的正常人肝细胞和HCC细胞系。使用磷酸化状态依赖性抗体对PTEN和FAK激活进行免疫印迹分析。污渍被剥离并重新处理α-微管蛋白作为负荷控制和定量。代表性免疫印迹与定量数据一起显示了4个单独印迹的平均±标准误差*P（P）<0.05相对于正常肝细胞的表达。(C类)用30 nmol/L miR-21前体或对照转染正常人肝细胞。72小时后进行PTEN和磷酸化FAK的免疫细胞化学。与对照组相比，转染miR-21前体的细胞中PTEN表达减少，FAK磷酸化增加。(D类)用30 nmol/L抗miR-21或对照抑制剂转染肝癌细胞。72小时后获得细胞裂解物，用于PTEN蛋白表达的免疫印迹分析及其下游靶激酶Akt和FAK的磷酸化。显示了4个单独的免疫印迹的代表性免疫印迹和定量数据（平均值±标准误差）*P（P）相对于对照组的表达<.05。
图8
图8
miR-21调节MMPs的mRNA表达。(一个)用miR-21前体或对照转染正常人肝细胞。对MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-11和β-肌动蛋白mRNA表达。miR-21的增强表达增加了正常人肝细胞中MMP-9 mRNA的表达*P（P）<.05（相对于对照）。(B类)用抗miR-21转染SK-HEP-1、SNU-182和HEP-G2细胞。通过实时PCR评估MMP-2、MMP-9和MMP-11 mRNA的表达，并将其归一化为β-肌动蛋白mRNA。数据总结自一式四份的三个实验。与对照组相比，抑制miR-21降低了肝癌细胞株中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达*P（P）<.05（相对于对照）。
图9
图9
PTEN的下调减弱了抗miR-21对肝癌细胞生长和侵袭的影响。(一个)用对照或PTEN siRNA，或对照或miR-21前体转染非恶性人类肝细胞，并进行免疫印迹分析PTEN公司，磷酸化Akt Ser（P）473，磷酸FAKTyr（P）516/517和微管蛋白。(B类)在与对照或PTEN miRNA孵育的人肝细胞中评估细胞迁移(C–F类)肝癌细胞（5×104/well）在96个平板中，用siRNA与PTEN或对照siRNA以及30 nmol/L抗miR-21共同转染。(□, 控制抗miRNA+控制siRNA；■, 抗miR-21+对照siRNA；灰色条，抗miR-21+PTEN siRNA）。(C类)细胞增殖或(D类)按照材料和方法一节的描述，在72小时后评估侵袭。给出了4个独立实验的平均误差和标准误差。mRNA表达(E类)MMP-2和(F类)MMP-9通过实时PCR定量，并相对于β-在同一样本中同时检测肌动蛋白mRNA。(G公司)用抗mir-21和对照或PTEN siRNA共同转染细胞PTEN公司，磷酸化Akt Ser（P）473和磷酸-FAK Tyr（P）516/517微管蛋白检测。代表性免疫印迹与定量数据一起显示了4个单独印迹的平均值±标准误差*P（P）与对照siRNA-转染细胞相比，<.05。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. El Serag HB，Mason AC。美国肝细胞癌发病率上升。《新英格兰医学杂志》，1999年；340:745–750.-公共医学
    1. Thorgeirsson SS，Grisham JW。人类肝细胞癌的分子发病机制。自然遗传学。2002年；31:339–346.-公共医学
    1. Hanahan D，Weinberg RA。癌症的特征。单元格。2000年；100:57–70.-公共医学
    1. Thorgeirsson SS、Lee JS、Grisham JW。肝细胞癌的功能基因组学。肝病学。2006;43:S145–S150。-公共医学
    1. Calin GA，Croce CM。MicroRNA-cancer连接：新故事的开始。2006年癌症研究；66:7390–7394.-公共医学

出版物类型

MeSH术语