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比较研究
.2006年10月27日;281(43):32207-16.
doi:10.1074/jbc。M606357200。 Epub 2006年8月30日。

剖析5'-AMP在变构刺激、激活和失活AMP-活化蛋白激酶中的作用

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剖析5'-AMP在变构刺激、激活和失活AMP-活化蛋白激酶中的作用

玛丽安·苏特等。 生物化学杂志. .
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摘要

AMP-activated protein kinase(AMPK)是一种异源三聚体蛋白激酶,对真核细胞和生物体的细胞能量稳态至关重要。在这里,我们报告了AMPKα1β1gamma1和α2β2gamma1通过其上游激酶(Ca(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶-beta和LKB1-MO25alpha-STRADalpa)激活,蛋白磷酸酶2Calpa失活,以及AMPK变构激活剂AMP对AMPK的刺激程度,使用纯化的重组酶制剂。建立了一种准确的基于高压液相色谱的AMPK活性测量方法,允许直接定量非磷酸化和磷酸化人工肽底物以及腺嘌呤核苷酸。我们的结果显示,上游激酶和AMP饱和浓度的联合作用使AMPK活化1000倍。这两种AMPK亚型表现出相似的特异性活性(6μmol/min/mg),并且它们对AMP的反应性没有显著差异。由于ATP和ADP的固有不稳定性,证明在绝对缺乏AMP的情况下不可能测定AMPK活性。然而,AMP的半最大刺激效应低于2微米。在纯化的体外系统中,AMP似乎不会通过上游激酶增加磷酸化,但通过蛋白磷酸酶2Calpha在Thr-172处对AMPKα亚基的去磷酸化失活被AMP减弱。此外,在0-300微米的浓度范围内,纯化的NAD(+)和NADH均未改变AMPK的活性。最后,有证据表明,ZMP是5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核苷处理的细胞中形成的一种化合物,在体内激活AMPK,在体外变构激活纯化的AMPK。但与AMP相比,没有达到最大活性。这些数据为AMPK调节的生理学重要方面提供了新的线索。

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