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.2006年1月；74(1):49-55.
doi:10.1128/IAI.74.1.49-55.2006。

多态性vacA中区的细胞特异性表型与细胞表面受体蛋白酪氨酸磷酸酶β的出现无关

大卫·A·G·斯基宾斯基 1, 克里斯托弗·吉尼塞特, 西尔维娅·巴龙, 约翰·L·特尔福德
附属公司

多态性vacA中间区的细胞特异性表型与细胞表面受体蛋白酪氨酸磷酸酶β的出现无关

大卫·A·G·斯基宾斯基等。 感染免疫. 2006年1月.

摘要

幽门螺杆菌空泡化细胞毒素基因（vacA）中区有两个等位基因m1和m2，编码具有不同细胞特异性的毒素。在这里，我们描述了五个嵌合菌株的构建，其中vacA区域在两种基因型之间交换。通过分析这些菌株对HeLa和RK13细胞的毒性，我们确认148-氨基酸区域决定了这两种形式蛋白质的表型差异，并且整个区域对细胞毒性很重要。此外，我们利用我们的嵌合菌株研究了VacA中区的变异是否对佛波醇12-肉豆蔻酸13-醋酸盐（PMA）诱导的HL-60细胞VacA敏感性有影响。PMA诱导的HL-60细胞VacA敏感性先前与细胞表面受体蛋白酪氨酸磷酸酶β（RPTPbeta）的出现有关。我们的数据表明，m1和m2形式的VacA都能够利用RPTPbeta，并且中间区域的细胞特异性表型独立于RPTPbeta的存在。HL-60细胞中似乎存在另一个as-yet-unidentified受体，该受体解释了该细胞系中的m2表型。此外，通过研究PMA对其他细胞系中RPTPbeta水平的影响以及这些细胞系中VacA的毒性，我们发现RPTPbeta在HeLa细胞的空泡化中并没有发挥主要作用。

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数字

图1。
图1。
A、 构建嵌合体的示意图。暗框表示m1的区域真空吸尘器序列替换为m2序列。VacA氨基酸编号系统基于真空吸尘器来自SPM326菌株的基因。B、 箱形遮阳板(http://bioweb.pasteur.fr/sexanal/interfaces/boxshade.html)预测的中间区域的N末端196个氨基酸的氨基酸序列的一部分。相同的氨基酸被涂成黑色。C、 浓缩上清液的免疫印迹幽门螺杆菌对照和嵌合VacA表达菌株。车道1，野生型SPM326；车道2，95-54；3号车道，SPM326/KO；泳道4，分子量标记；第5车道，SPM326/AB25；6号车道，SPM326/DAGS1；7号车道，SPM326/DAGS2；8号车道，SPM326/DAGS3；9号车道，SPM326/救援。左侧显示了分子质量标准的重量。
图2。
图2。
用VacA嵌合菌株的生长培养上清液处理的RK13（A）和HeLa（B）细胞的中性红摄取测定。在稀释试验之前，使用50%饱和硫酸铵将生长上清液浓缩10倍。数据是四次单独分析的平均值，并归一化为每次实验中SPM326的最低稀释度值，即100%。误差条显示分析之间的标准偏差。
图3。
图3。
PMA对HL-60（A）、HeLa（B）或RK13（C）细胞RPTPβ蛋白的影响。将细胞与（绿线）或（黑线）20 nM PMA孵育24 h，并使用抗RPTPβ单克隆抗体通过间接免疫荧光和流式细胞术定量RPTPβ的表达。使用一个无关的小鼠IgG作为带有（蓝线）或不带有（红线）20 nM PMA的细胞的对照。数据代表了三个单独的实验。
图4。
图4。
PMA处理的HL-60细胞对选定VacA嵌合菌株生长上清液的中性红摄取分析。细胞在20 nM PMA存在或不存在的条件下培养24 h。在稀释用于分析之前，使用50%饱和硫酸铵将生长上清液浓缩10倍。数据是至少三次单独分析的平均值，并在每次实验中归一化为未经PMA处理的HL-60细胞的SPM326值（取100%）。误差条显示分析之间的标准偏差。对值表示未经处理和经PMA处理的细胞结果之间的显著性程度。*，对与未经PMA治疗的SPM326相比，<0.01。**，对与使用20 nM PMA处理的SPM326相比，<0.01。NS，不显著。黑色条，无PMA。绿色条，20 nM PMA。固体棒，上清液1:4稀释。孵化棒，上清液以1:8稀释。点状条，上清液稀释为1:16。
图5：。
图5。
PMA处理的HeLa细胞对选定VacA嵌合菌株生长上清液的中性红摄取分析。细胞在20 nM PMA存在或不存在的条件下培养24 h。在稀释用于分析之前，使用50%饱和硫酸铵将生长上清液浓缩10倍。数据是至少三次单独检测的平均值，并在每次实验中归一化为未经PMA处理的HeLa细胞的SPM326值（取100%）。误差条显示分析之间的标准偏差。对值表示未经处理的细胞和经PMA处理的细胞之间的显著性程度。NS，不显著。*，对与未经PMA治疗的SPM326相比，<0.01。**，对与使用20 nM PMA处理的SPM326相比，<0.01。黑色条，无PMA。绿色条，20 nM PMA。固体棒，上清液按1:4稀释。阴影条，上清液稀释1:8。
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    1. Copass，M.、G.Grandi和R.Rappouli。1997年引入带有蔗糖敏感性标记的幽门螺杆菌vacA基因的无标记突变。感染。免疫。65:1949-1952.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Covacci，A.、J.L.Telford、G.Del Giudice、J.Parsonnet和R.Rappouli。1999年，幽门螺杆菌毒力和遗传地理。科学284:1328-1333。-公共医学
    1. Cover、T.L.和S.R.Blanke。幽门螺杆菌VacA，毒素多功能性的范例。自然修订版微生物。3:320-332.-公共医学
    1. Cover，T.L.、W.Puryar、G.I.Perez-Perez和M.J.Blaser。尿素酶对幽门螺杆菌细胞毒素诱导的HeLa细胞空泡化的影响。感染。免疫。59:1264-1270.-项目管理咨询公司-公共医学

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