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.2004年11月26日;279(48):50110-9.
doi:10.1074/jbc。M409226200。 Epub 2004年9月13日。

SCF(Fbw7)泛素连接酶识别人细胞周期蛋白E中的磷酸化简基模体

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SCF(Fbw7)泛素连接酶识别人细胞周期蛋白E中的磷酸化简基模体

新叶等。 生物化学杂志. .
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摘要

周期蛋白E的周转由SCF(Fbw7)控制。Fbw7的三种亚型是通过选择性剪接产生的。在293T细胞中,Fbw7alpha和-gamma为核,β亚型为细胞质,但在体内降解试验中,这三种亚型均诱导细胞周期蛋白E破坏。在体内,细胞周期蛋白E在Thr(62)、Ser(88)、Ser(372)、Thr(380)和Ser(384)上磷酸化。为了研究磷酸化在细胞周期蛋白E转换中的作用,对这些位点中的一系列丙氨酸点突变进行了Fbw7驱动的降解分析。正如预期的那样,先前特征化的Thr(380)残基突变为丙氨酸导致了细胞周期蛋白E周转的严重缺陷,并在很大程度上消除了与Fbw7的关联。Thr(62)突变为丙氨酸导致Thr(380)磷酸化程度显著降低,表明这种突变对细胞周期蛋白E周转产生间接影响。然而,以Thr(62)为中心的磷酸肽与Fbw7相关,而细胞周期蛋白E(T380A)与Fbw7的残余结合在Thr(61)突变后被消除,这表明该残基与Fbv7直接相关的作用很小。Ser(384)突变为丙氨酸也使cyclin E对Fbw7的降解具有抵抗力,Fbw7beta的影响最大。细胞周期蛋白E(S384A)与Fbw7α和β亚型的相关性较弱,但在Thr(380)磷酸化方面没有缺陷。对cyclin E突变体蛋白的定位分析表明,cyclin E(S384A)在细胞核中选择性积累,这可能是细胞质Fbw7beta无法促进该cyclin E-突变体蛋白周转的原因之一。

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