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.2003年11月21日;278(47):46886-94.
doi:10.1074/jbc。M307853200。 Epub 2003年9月3日。

传统蛋白激酶C亚型的活化机制由其C1结构域的配体亲和力和构象灵活性决定

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传统蛋白激酶C亚型的活化机制由其C1结构域的配体亲和力和构象灵活性决定

Bharath Ananthananarayanan学院等。 生物化学杂志. .
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摘要

传统和新型蛋白激酶C(PKC)的调节域有两个C1域(C1A和C1B),已被确定为二酰甘油(DAG)和佛波酯的相互作用位点。据报道,单个PKC亚型的C1A和C1B结构域在其膜结合和活化中发挥不同的作用;然而,单个C1结构域的DAG亲和力尚未定量测定。在本研究中,我们通过等温量热法和表面等离子共振测量了两种传统PKC(PKCalpha和PKCgamma)的分离C1A和C1B结构域对可溶性和膜结合DAG和佛波酯的亲和力。PKCalpha的C1A和C1B结构域与DAG和佛波酯具有相反的亲和力;即对DAG具有高亲和力的C1A结构域和对佛波酯具有高亲和力的C1B结构域。相反,PKCgamma的C1A和C1b结构域对DAG和佛波酯都具有较高的亲和力。与这些结果一致,全长蛋白的突变研究表明,C1A结构域对DAG诱导的PKCalpha激活至关重要,而C1A和C1B结构域都参与DAG诱导PKCgamma激活。结合体外活性测定和单层渗透分析的进一步突变研究表明,与PKCalpha的C1A结构域不同,PKCgamma的C1B结构域和C1A结构都不受构象限制。用增强型绿色荧光蛋白标记的PKCs进行的细胞研究表明,PKCalpha在基本细胞内钙浓度下对DAG的反应中,由于其C1A结构域的不可接近性,不会移位到质膜上,而PKCgamma在相同条件下会迅速移位至质膜。这些数据表明,PKC亚型的不同激活机制是由其C1结构域的DAG亲和力和构象灵活性决定的。

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