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.2002年8月13日;41(32):10351-9.
doi:10.1021/bi026065r。

PDK2抗蛋白激酶Bγ活性的表征

附属公司

PDK2抗蛋白激酶Bγ活性的表征

康拉德·P·霍奇金森等。 生物化学. .

摘要

蛋白激酶B(PKB),也称为Akt,是一种由胰岛素、各种生长因子和磷脂酰肌醇3-激酶控制的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。PKB酶的完全激活需要激活环中的苏氨酸和C末端尾部的丝氨酸的磷酸化。PDK1已明确显示可磷酸化苏氨酸,但导致丝氨酸(PDK2位点)磷酸化的机制尚不清楚。使用全长人PKBgamma的酵母双杂交筛选鉴定出蛋白激酶C(PKC)zeta,一种非典型PKC,作为PKBgama的相互作用物,这种关联需要PKBga玛的序列同源域。在cos-1细胞和3T3-L1脂肪细胞中,内源性PKBgamma与内源性PKCzeta相关,显示出生理上的相互作用。PKCzeta的免疫沉淀物,无论是来自胰岛素刺激的3T3-L1脂肪细胞的内源性PKCzeta还是来自cos-1细胞的过度表达的PKCze塔,体外磷酸化PKBgamma的S472(C末端丝氨酸磷酸化位点)。在体内,PKCzeta的过度表达刺激了大约50%的PKBgamma分子的磷酸化,表明这是一种具有生理意义的效应。然而,纯PKCzeta蛋白不能磷酸化PKBgamma的S472。反义敲除研究和PDK1抑制剂的使用表明,PKB自身磷酸化和PDK1的磷酸化都不能解释PKCzeta免疫沉淀物中S472的磷酸化。Staurosporine抑制PKCzeta免疫沉淀物中的PKCzeta-活性,但不抑制PDK2活性。这些结果共同表明,存在一种独立的PDK2活性,该活性与PKCzeta有物理关联,并且PKCzeta通过结合PKBgamma发挥作用,将PDK2传递到所需位置。因此,PKCzeta起到衔接子的作用,与一种对星孢菌素不敏感的PDK2酶结合,该酶催化PKBγ的S472磷酸化。由于PKCzeta和PKB都被认为是介导许多关键胰岛素反应所必需的,因此形成包含PKCzetaPKB和PDK2的活性信号复合物是一种很有吸引力的机制,可以确保糖原合成酶激酶-3等靶点上的所有关键位点都被磷酸化。

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