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.2002年5月;1(5):376-86。
doi:10.1074/mcp.m200025-mcp200。

细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记SILAC是一种简单而准确的表达蛋白质组学方法

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细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记SILAC是一种简单而准确的表达蛋白质组学方法

邵恩翁等。 分子细胞蛋白质组学. 2002年5月.
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摘要

定量蛋白质组学传统上是通过双向凝胶电泳进行的,但最近,基于稳定同位素定量的质谱方法在同时自动识别和定量复杂蛋白质混合物方面显示出巨大的前景。在这里,我们描述了一种称为SILAC的方法,用于通过细胞培养中的氨基酸进行稳定同位素标记,以便在体内将特定氨基酸并入所有哺乳动物蛋白质中。哺乳动物细胞系生长在缺乏标准必需氨基酸的培养基中,但补充了该氨基酸的非放射性同位素标记形式,在本例中为氘化亮氨酸(Leu-d3)。我们发现,在这些培养基中维持的细胞生长与在正常培养基中的生长没有区别,这可以从细胞形态、倍增时间和分化能力方面得到证明。在所研究的细胞系和蛋白质中进行五次加倍后,Leu-d3完全掺入。采集后直接混合来自实验和对照样品的蛋白质群体,质谱鉴定很简单,因为每个含亮氨酸的肽都包含所有正常亮氨酸或所有亮氨酸-d3。我们将此技术应用于肌肉细胞分化过程中蛋白质表达变化的相对定量。在此过程中发现上调的蛋白质包括甘油醛-3-磷酸脱氢酶、纤维连接蛋白和丙酮酸激酶M2。SILAC是一种简单、廉价、准确的程序,可以在任何细胞培养系统中用作定量蛋白质组方法。

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