A trithorax-group complex purified from Saccharomyces cerevisiae is required for methylation of histone H3

doi:10.1073/pnas.221596698

.2002年1月8日；99(1):90-4.

doi:10.1073/pnas.221596698。 Epub 2001年12月18日。

组蛋白H3的甲基化需要从酿酒酵母中纯化的三羟杂合物

彼得·L·纳吉¹, 约阿希姆·格里森贝克, 罗杰·科恩伯格, 迈克尔·L·克利里

附属公司

采购管理信息： 11752412
预防性维修识别码：项目经理117519
内政部： 10.1073/pnas.221596698

组蛋白H3的甲基化需要从酿酒酵母中纯化的三羟杂合物

彼得·L·纳吉等。美国国家科学院程序. 2002.

.2002年1月8日；99(1):90-4.

doi:10.1073/pnas.221596698。 Epub 2001年12月18日。

作者

彼得·L·纳吉¹, 约阿希姆·格里森贝克, 罗杰·德科恩伯格, 迈克尔·L·克利里

附属

¹美国加利福尼亚州斯坦福市斯坦福大学医学院病理学系94305。

采购管理信息： 11752412
预防性维修识别码：项目经理117519
内政部： 10.1073/pnas.221596698

摘要

组蛋白甲基化已成为调节染色质转录可及性的重要机制。几种甲基转移酶已被证明靶向组蛋白氨基末端尾部，并标记与常色或异色状态相关的核小体。然而，负责调节组蛋白甲基化并将其与其他细胞事件整合的生化机制尚未得到很好的描述。我们报告了酿酒酵母赖氨酸残基4处组蛋白H3甲基化所必需的Set1蛋白复合物的纯化、分子鉴定、遗传和生化特征。7个月的363-kDa复合物包含果蝇黑腹果蝇蛋白Ash2和Trithoris以及秀丽隐杆线虫蛋白DPY-30的同源物，它们分别参与Hox基因表达的维持和X染色体剂量补偿的调节。Set1蛋白的突变与破坏果蝇同源物Trithorisa发育功能的突变相似，可消除酵母中的组蛋白甲基化。这些研究表明，发育和性别特异性基因表达的表观遗传调控是与组蛋白甲基化相关的常见染色质重塑机制的物种特异性读数。

PubMed免责声明

数字

图1
含Set1p蛋白复合物的纯化*美国。酿酒*. (一个)粗提物*美国。酿酒*蛋白质通过凝胶过滤柱，并通过Western blot分析对所得组分进行分析使用抗Set1p单克隆抗体或针对设置1p复杂组件Bre2p、Saf41p、Saf17p和Saf19p（指示各面板右侧）。(B类)银色染色免疫纯化的凝胶过滤级分的SDS4-16%梯度PAGE抗Set1p的丙二醇辅助释放后的Set1p复合物关联列。点表示从上到下的复杂组件：Set1p、Bre2p、Saf49p、Sav41p、Saf17p、Saf25p和Saf19p产品的*设置1*基因和ORF2015瓦,*YAR003W公司*,*YPL138C型*,*YKL018W型*,*YBR175瓦*、和*YDR469W型*分别是。

图2
Set1p复合体的子单位组成。(一个)考马斯蓝染色SDS/10%PAGE分析用于回收复合物的凝胶过滤馏分9（见图1）质谱分析组件。(B类)Set1p复合体的域结构示意图组件。域分配是使用聪明的工具（32），除了分配了DPY-30同源结构域基于*酿酒酵母*,*秀丽隐杆线虫*,*D。黑腹食肉动物*、和智人蛋白质序列。

图3
Set1p复合物缺陷酵母菌株的端粒沉默缺陷组件。电镀效率和应变分段*URA3公司*和*ADE2型*存在于端粒部位在缺乏Set1p复合物的酵母菌株中评估（UCC3537）组件或*证券投资风险2*(上部)已转换与pRS315载体互补后，携带各自的外源基因(下部). 等分当量将10倍系列稀释液涂布在缺乏合成介质的情况下亮氨酸是否存在FOA或尿嘧啶。请注意*saf37型*突变体无法研究，因为它是无法工作。

图4
组蛋白H3的Lys-4甲基化需要Set1p复合物体内. (一个)核心组蛋白纯化自野生型（1号道）或突变酵母菌株（2-7号道）Set1p复合物成分不足（如凝胶层所示）是考马斯蓝染色SDS/PAGE分析(上部)和Western blotting使用抗甲基赖氨酸-4抗血清(下部).(B类)核心组蛋白从*集合1*表达凝胶层上方所示结构的菌株和通过SDS/PAGE和Western分析组蛋白H3 Lys-4甲基化印迹分析。

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