An essential function of the mitochondrial sulfhydryl oxidase Erv1p/ALR in the maturation of cytosolic Fe/S proteins

doi:10.1093/embo-reports/kve161

.2001年8月；2(8):715-20.

doi:10.1093/embo-reports/kve161。

线粒体巯基氧化酶Erv1p/ALR在细胞溶质Fe/S蛋白成熟中的基本功能

H兰格¹, T利索夫斯基, J Gerber先生, 乌穆伦霍夫, G基斯帕, 里尔

附属公司

PMID： 11493598
预防性维修识别码：项目编号1083998
内政部： 10.1093/embo-reports/kve161

线粒体巯基氧化酶Erv1p/ALR在细胞溶质Fe/S蛋白成熟中的基本功能

H兰格等。 EMBO代表. 2001年8月.

.2001年8月；2(8):715-20.

doi:10.1093/embo-reports/kve161。

作者

H兰格¹, T利索斯基, J Gerber先生, 乌穆伦霍夫, G基斯帕, 里尔

附属

¹德国马尔堡罗伯特·科赫大街5号菲利普斯大学马尔堡生物与病理研究所，邮编35033。

PMID： 11493598
预防性维修识别码：项目编号1083998
内政部： 10.1093/embo-reports/kve161

摘要

Fe/S簇的生物发生涉及许多必需的线粒体蛋白质。在这里，我们确定酿酒酵母线粒体的必需Erv1p是一种新的成分，它是细胞液中Fe/S蛋白成熟所需的特殊成分，而不是线粒体。此外，Erv1p被发现对细胞铁稳态非常重要。同源哺乳动物蛋白ALR（“肝再生增强因子”），也称为肝生成素，可以在功能上替代Erv1p中的缺陷，因此代表酵母Erv1p的哺乳动物同源性。此前，据报道，ALR的一个片段表现出细胞外肝营养生长因子的活性。Erv1p和全长ALR均位于线粒体膜间空间，是该隔室的第一组分，在细胞溶质Fe/S蛋白的生物生成中发挥作用。Erv1p/ALR可能在线粒体ABC转运体Atm1p/ABC7/Sta1的下游运行，后者也在这个重要的生化过程中执行特定的任务。

PubMed免责声明

数字

**图1。**Erv1p失活会导致细胞溶质Fe/S蛋白成熟过程中的特定缺陷。野生型（WT）和Erv1^时间将含有或不含有编码HA-epitope-tagged Rli1p质粒的细胞在24°C的无铁最小培养基中培养过夜，其中一半转移到37°C培养5小时。用放射标记法对细胞进行标记(⁵⁵1 mM抗坏血酸（Kispal）存在下的Fe）氯化铁等.，1999）在24或37°C下持续1 h，制备细胞裂解物，并摄取⁵⁵通过液体闪烁计数对进入细胞的Fe进行定量(C类)。使用针对细胞溶质Leu1p的抗血清进行免疫沉淀(A类)、HA-epitope(B类)或线粒体Bio2p(D类)和共沉淀⁵⁵用液体闪烁计数法测定铁含量。用免疫前血清（<2×10）进行免疫沉淀所获得的背景信号^三c.p.m/g细胞）。实验至少进行了四次。条形图表示标准误差。

**图2。**线粒体Fe/S蛋白的正常活性不需要Erv1p功能。从野生型（WT）和Erv1中分离出线粒体^时间细胞在含有0.1%葡萄糖的乳酸培养基中24或37°C下培养5小时。测定了所示含Fe/S簇的蛋白质和苹果酸脱氢酶的酶活性。脱氢酶；琥珀酸细胞*c（c）*红色，琥珀酸-细胞色素*c（c）*还原酶。

**图3。**人ALR可以替代酵母Erv1p在细胞溶质Fe/S蛋白的生物生成中的功能。(A类)野生型（WT）和Erv1^时间用表达Erv1p、ALR和各种ALR融合蛋白的突变细胞分析⁵⁵通过图1所述的分析，铁进入细胞溶质Leu1p。每个实验至少进行三次。标准误差以条形表示。(B类)ALR融合蛋白的示意图。将各种蛋白的指定部分融合到全长或截短的人类ALR（Hofhaus等., 1999). 通过细胞分馏确定融合蛋白的定位（参见图4）。酵母Erv1生长缺陷的补充^时间通过在37°C含甘油的富培养基上培养3天，对不同融合蛋白的细胞进行检测，并与野生型细胞的生长进行比较。

**图4。**Erv1p和ALR位于线粒体膜间隙。(A类)从表达HA-epitope-tagged Erv1p的酵母细胞中分离出线粒体和线粒体后上清液（PMS）。通过细胞器（Sw）的低渗肿胀导致外膜破裂，以及细胞器在含有0.1%Triton X-100（Det）的缓冲液中溶解，然后用50µg/ml蛋白酶K（PK；Diekert等., 2001). 使用针对HA表位和线粒体膜间间隙蛋白（CC）产生的抗血清，通过免疫染色对样品进行分析₁HL）和矩阵（Tim44p，Mge1p）。(B类)新鲜人肝脏用于制备分离线粒体（M）和线粒体后上清液。免疫染色检测ALR、细胞溶质Hsp70（ctHsp70）和线粒体frataxin。(C类)如（A）所示，对人肝线粒体进行肿胀、去污和蛋白酶处理(D类)他们接受非还原性4–12%梯度SDS–PAGE（Lee等2000）在存在或不存在10mM二硫代treitol（DTT）的情况下，随后对ALR进行免疫染色。

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