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.2000年4月7日;275(14):10697-701.
doi:10.1074/jbc.275.14.10697。

假底物在磷酸化和二酰甘油协同调节蛋白激酶C中的双重作用

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假底物在磷酸化和二酰甘油协同调节蛋白激酶C中的双重作用

E M职责等。 生物化学杂志. .
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摘要

蛋白激酶C的活性由一种自身抑制性假底物可逆调节,该假底物在缺乏激活剂的情况下阻断酶的活性位点。然而,在变构调控之前,蛋白激酶C必须首先通过三种有序磷酸化进行处理,第一种是由磷脂酰肌醇依赖性激酶-1(PDK-1)催化的活化环修饰。在这里,我们使用有限的蛋白水解来证明:1)新合成的蛋白激酶C采用了一种构象,在这种构象中,其假底物序列被从活性部位移除,2)这种暴露对于PDK-1磷酸化酶至关重要。通过1)体外转录和翻译,2)磷酸化缺陷突变体(T500V)的表达,或3)体内用[(35)S]半胱氨酸/蛋氨酸脉冲标记获得的前体(非磷酸化)蛋白激酶CβII在氨基末端假底物处被内蛋白酶Arg-C裂解。与成熟(磷酸化)酶形成鲜明对比的是,蛋白质水解在没有脂质活化剂的情况下发生,这表明前体蛋白激酶C的假底物序列被组成性移除。此外,我们发现当活性位点被肽底物空间位阻时,PDK-1不能磷酸化蛋白激酶C。当活性位点被假底物序列或异源底物结合所阻断时,成熟酶也不能去磷酸化。因此,激活环对磷酸化和去磷酸化的可及性需要暴露的假底物。总之,新合成的蛋白激酶C采用了一种构象,在这种构象中,其假底物序列从活性位点上移除,从而使活化环可通过PDK-1进行磷酸化。磷酸化作为一个构象开关来定位假底物,从而阻断活性位点,这种构象一直维持到依赖刺激的膜结合释放它,从而激活酶。

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