本文中提到：

介绍

香精油（EO）是一种天然挥发性复合物具有强烈气味的化合物，由芳香植物作为次级代谢产物(1)。EO主要用于他们著名的天然抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗菌性能(2)。目前，约有3000名EO已确定，其中300个具有商业重要性，尤其是在制药、农业、食品、卫生、，化妆品和香水行业。EO及其部分组件用于香水和化妆品行业，以及卫生产品、牙科和农业的制造；他们也被用作食品防腐剂、添加剂和自然救济(三,4)。EOs也用于按摩与植物油的混合物，或在浴缸中。他们最常用的正在进行芳香疗法(1)。一些EO可能具有被认为可以治愈的特殊药用特性某些器官功能障碍或系统性疾病。EO有很长时间被用作香水的成分。过去几年，人们对了解它们的生物学特性重新产生了兴趣由于其在人体中潜在的新应用而产生的特性卫生、农业和环境。

过敏性疾病的流行，例如过敏性鼻炎、特应性皮炎、哮喘和食物过敏在大多数国家增加(5)。免疫活性肥大细胞和嗜碱性粒细胞表达免疫球蛋白E的高亲和力受体（IgE）在其表面，并在各种与过敏性疾病相关的生物过程(6)。多价体的相互作用表面结合IgE的抗原触发介质储存在细胞质颗粒中并导致判定元件新生代细胞因子的合成(7)，从而激活迁移中性粒细胞和巨噬细胞，导致组织炎症(8).

炎症是宿主最初的免疫反应由炎症细胞因子介导，如肿瘤坏死因子-α（肿瘤坏死因子-α）(9)。巨噬细胞发挥着在宿主防御有害物质中的重要作用(10)。巨噬细胞活化脂多糖（LPS），革兰氏阴性菌的主要成分细菌外膜，导致促炎细胞因子，从而介导主要的细胞毒性以及参与先天性许多哺乳动物的反应(11).然而，活化的巨噬细胞过度产生细胞因子与几种炎症的病理生理学有关疾病，包括类风湿关节炎、动脉粥样硬化、慢性肝炎、肺纤维化与炎症性脑疾病(11)。因此，LPS刺激巨噬细胞是研究炎症和抗炎作用的潜在机制化合物。

在本研究中，抗过敏和20种不同EOs的抗炎特性对草本植物和柑橘类水果进行了检测。柠檬草EO表现出最强的抗过敏和抗炎作用因此，它的主要化学成分通过气相色谱（GC）-质谱法评估环氧乙烷（MS）。这些结果对于认识从这些植物中提取的EO的未来新应用。

材料和方法

材料

20个商用EO由长冈香水有限公司（日本大阪）。17种类型的研究中使用的水蒸馏EO来自草本植物，包括罗勒(罗勒八角L.，产自欧盟科摩罗）、香菜(卡维颈肉L.，欧洲），胡萝卜种子(胡萝卜L.，法国），芹菜籽(阿皮姆格拉沃伦斯L.，印度），洋甘菊(洋甘菊L.，埃及），香茅(冬青乔维特，印度尼西亚），clary sage(鼠尾草巩膜L.，美国），丁香(芳香丁香L.，马达加斯加），孜然(孜然芹属cyminum公司L.，印度），桉树(蓝桉L、。，中国），柠檬草[柠檬香茅（DC）Stapf，印度]，马约兰(马六甲莫恩。，法国），肉豆蔻(肉豆蔻霍特。，印尼），鼠尾草(萨尔瓦多药用植物L.，阿尔巴尼亚），檀香木(桑塔卢姆相册L、。，印度），留兰香(薄荷美国洛杉矶）和百里香(寻常百里香L.，印度）。冷挤压EO是源自3种柑橘类水果：柠檬(柠檬L.，美国），石灰(枳壳Swingle，墨西哥）和橙色(中华绒螯蟹L.，葡萄牙）。五萜类，柠檬醛（3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醛），香叶醇，乙酸香叶酯，芳樟醇和莰烯购自Sigma-Aldrich，Inc.（St。路易斯，密苏里州，美国）。曲尼司特和甘草次酸，抗过敏也分别获得了抗炎药对照组来自Sigma-Aldrich，Inc.的Geranial是通过氧化如前所述，含有二氧化锰的香叶醇(12)。对于蛋白质印迹分析，抗核因子κB（NF-κB）p65和NF-κ的抗抑制剂（IκB）-α抗体购自Santa Cruz Biotechnology，公司（美国加利福尼亚州圣克鲁斯）。辣根过氧化物酶偶联物抗兔免疫球蛋白G（IgG）抗体从Thermo Scientific（神奈川，日本）。所有其他试剂均为分析等级，从Nacalai Tesque公司获得。（日本京都）。

细胞

RBL-2H3大鼠嗜碱性白血病和RAW264.7小鼠巨噬细胞系取自美国型培养基收藏（ATCC；马纳萨斯，弗吉尼亚州，美国）。RBL-2H3细胞为在Eagle的最低基本培养基中培养，补充4.5g葡萄糖/l加上10%胎牛血清（FBS），5 mM l-谷氨酰胺，50U/ml青霉素和50 U/ml链霉素。RAW264.7细胞是在Dulbecco改良的Eagle培养基中培养，补充4.5克葡萄糖/升加10%FBS、5 mM l-谷氨酰胺、50 U/ml青霉素和50 U/ml链霉素。所有细胞在37°C下培养5%增湿空气中的各介质合作2/95%空气。

β-己糖胺酶的测定释放

肥大细胞脱颗粒介导的组胺释放伴随着β-己糖胺酶的释放(13)。因此，我们执行了β-己糖胺酶释放试验，如前所述(14)稍作修改确定肥大细胞脱颗粒作为受检化合物的抗过敏活性。简单地说8×10时的RBL-2H3细胞424孔板中的细胞/孔为用Tyrode的缓冲液（137 mM NaCl，5.6 mM葡萄糖，11.9 mM氯化钠三2.7 mM KCl和0.32 mM不2人事军官4)含1 mM CaCl2和0.5 mM氯化镁2，然后添加EO（在0.5%二甲基亚砜中）最终浓度为100μg/ml然后用5μM A23187刺激细胞并培养30最小值：细胞上清液和总细胞裂解液溶于2%收集Triton X-100并与底物溶液（2mM第页-硝基苯-N个-0.1 M中的乙酰-β-D-葡糖苷柠檬酸钠缓冲液，pH 4.5）。混合物培养90在37°C下进行min，然后通过添加pH值为11.0的含有0.2 M甘氨酸缓冲液的停止缓冲液。使用微孔板阅读器测量405nm处的吸光度（Vmax-K；美国加利福尼亚州桑尼维尔市分子器件有限责任公司）。这个EO介导的β-己糖胺酶释放和活性抑制表示为抑制百分比，并使用以下公式：%活性=[（β-己糖胺酶在在存在的情况下，EO−β-己糖胺酶没有释放EO）/β-己糖胺酶在无EO情况下的释放]×100。

EO介导抑制的测量TNF-α

将RAW264.7细胞置于12孔板中5×104细胞/孔，孵育24小时然后用最终浓度为100μg/ml的环氧乙烷进行预处理在添加LPS（100 ng/ml）之前，在0.5%二甲基亚砜中放置30分钟。LPS刺激24小时后，细胞培养液为收集以量化分泌的TNF-α可用酶联免疫吸附试验（ELISA）的发展系统（Bay Bioscience Co.，Ltd.，Kobe，Japan），根据制造商的说明。EO介导的TNF-α的产生以抑制百分比表示，使用以下公式计算：%活性=[（TNF-α在没有EO−TNF-α生产的情况下生产EO）/TNF-α在无EO的情况下的产量]×100。

气相色谱-质谱

使用安捷伦6890气体进行GC-MS色谱仪与安捷伦5972A MSD质谱仪耦合（安捷伦科技日本有限公司，日本东京）。色谱仪装有InertCap WAX（聚乙二醇）熔融二氧化硅毛细管柱（60 m×0.25 mm内径；薄膜厚度，0.25μm；GL科学公司，日本东京），含纯氦（≥99.99995%）149 kPa入口压力下的载气，处于分流/无分流模式，以及1.2 ml/min。烤箱温度编程如下：570°C时最小，然后3°C增量/min至240°C喷油器和传输线保持在240°C。质谱仪在70 eV电子冲击下工作，离子源温度150°C，以及在大规模扫描的全扫描模式下收集的数据范围显示米/z第27-400页。每个0.6μl样品以1:60的分流比注入。定性分析是通过私人和商业大众的相似搜索执行光谱数据库（Wiley 275和国家标准与技术02）。

细胞处理和细胞核制备全细胞裂解物和western blot分析

用10μg/ml的试验化合物30分钟，然后用100 ng/ml处理液化石油气。30分钟后，核蛋白和全细胞裂解物使用西泉研究中描述的方法收集等(15)。蛋白质核蛋白和全细胞裂解物的浓度为使用BCA™蛋白质检测试剂盒（皮尔斯，罗克福德，伊利诺伊州，美国），根据制造商说明。简单地说，25μl添加2 mg/ml BSA溶液（作为标准）96 well微孔板，然后200μl BCA工作将试剂添加到每个孔中。微孔板在37°C持续30分钟，蛋白质浓度由在575nm处测量吸光度。核蛋白和整体对细胞裂解物进行蛋白质印迹分析以评估核因子-κB的核转位及其蛋白表达IκB-α。

核蛋白（30–50μg蛋白质/样品）将全细胞裂解物（50μg蛋白质/样品）在四分之一体积的样品缓冲液[1M Tris-HCl，pH 7.5，640mM2-巯基乙醇、0.2%溴酚蓝、4%十二烷基硫酸钠（SDS）和20%甘油]，然后在10%上分离SDS-聚丙烯酰胺凝胶。凝胶中的蛋白质被转移在PVDF膜上。膜被1%脱脂牛奶堵塞（对于NF-κB）或TBS-T中5%的牛血清白蛋白（10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl和0.5%吐温-20）（对于IκB-α），并用抗NF-κB p65（1:1000）或抗IκB-α（1:1000随后与辣根过氧化物酶偶联的次级抗体。使用ChemiLumi-ONE（Nacalai Tesque，Inc.）和图像阅读器（ImageQuant Imager 350/350Lumi；GE Healthcare Life Sciences，瑞典乌普萨拉）。使用ImageJ软件，由美国国家研究院开发健康。结果表示为平均值的百分比受试化合物处理样品的蛋白质表达率与对照组相比（即培养的细胞在没有试验化合物的情况下）。

动物

6周龄雌性印迹控制区（ICR）小鼠（25–27克体重）来自日本SLC公司。（日本滨松），维持标准的中等脂肪（MF）饮食（日本大阪东方酵母有限公司），并提供水随意所有动物实验均获得神户批准Gakuin大学动物委员会（日本神户）根据大学实验室维护和使用指南动物。

抗过敏药物的测定影响

被动皮肤过敏反应是根据之前的研究测量(14)。小鼠被一种皮内注射0.1μg抗二硝基苯基（DNP）-IgE4小时后用0.2ml（1mg/ml）含2%的DNP标记人血清白蛋白溶液伊文思蓝染料。在一系列实验中，试验化合物（100mg/kg）。这个对照组动物接受生理盐水。老鼠是随后处死，取下耳朵，称重30分钟挑战之后。在200μl 1 N溶液中溶解耳朵后氢氧化钾（KOH），在37°C下培养过夜用于测量渗出物。为此，添加溶解的组织溶液丙酮和0.6 N磷酸（5/13，测量了620nm处的光密度。金额根据埃文斯蓝标准计算渗出液中的染料曲线和结果表示为平均渗出物的百分比受试小鼠耳部样品中染料含量的比较与控制装置的连接。

抗炎症的测量活动

小鼠炎症试验按照Gschwendt研究中描述的方法等(16)。简单地说，丙酮含有500μg/20μl试验化合物或载剂的溶液将20μl丙酮控制在30分钟后，用丙酮溶液12-O（运行）-十四烷基佛波醇-13-乙酸酯（TPA，一种化学性水肿诱导剂）以0.5μg/20μl的剂量作用于耳的同一部位；丙酮，然后使用TPA作为对照。之后7小时，从耳朵中取出直径为6毫米的圆盘并称重。通过比较耳朵来确定抗炎活性试验组和对照组动物的盘重。这个结果以百分比表示，并使用以下公式：活性百分比=[（仅TPA）−（测试化合物加TPA）]/[（仅TPA）−（载体）]×100。

统计分析

所有结果均表示为平均值±至少3次独立测定的标准偏差（SD）每个实验。每个之间的统计显著性实验组采用Student t检验进行分析概率值0.01和0.05被用作重要性。

结果

EO诱导的β-己糖胺酶抑制作用肥大细胞释放

首先，20种EOs的抑制作用对肥大细胞脱颗粒进行了研究。β-己糖胺酶释放被广泛用作评估肥大细胞脱颗粒及其释放组胺和其他化学介质引发立即型超敏反应的过程反应。EOs（100μg/ml）对化学介质（β-己糖胺酶）在用钙离子载体A23187处理RBL-2H3细胞。EO不影响RBL-2H3细胞的生长，也不抑制β-己糖胺酶活性（数据未显示）。The degree of通过评估β-己糖胺酶计算脱颗粒上清液和细胞裂解液中的活性。在20个EO中检查，用洋甘菊、柠檬草和檀香对肥大细胞脱颗粒的抑制作用大于40%，通过β-己糖胺酶释放进行评估。此外，EO中经检测，柠檬草EO表现出最强的抑制活性(图1A)。另一方面，EO桉树和石灰对β-己糖胺酶无影响释放。已知A23187会引起钙通量，这可能进一步诱导蛋白激酶C（PKC）活化，这是一个过程肥大细胞脱颗粒的必要条件(8)。因此，似乎EOs治疗诱导的β-己糖胺酶抑制可能影响PKC活性。EO抑制肥大的机制细胞脱颗粒需要进一步研究。

图1 体外抗过敏和分离的精油（EOs）的抗炎活性来源于20种植物。（A） β-己糖胺酶的抑制在用钙离子载体处理的RBL-2H3细胞中的释放，A23187.（B）抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）经脂多糖（LPS）处理的RAW264.7细胞产生。EOs，100μg/ml；数据显示为平均值±标准偏差（SD）共5个独立实验**P<0.01和*与对照组（未经处理的细胞）相比，P<0.05。

EO诱导的TNF-α生成抑制在巨噬细胞中

然后我们调查了工厂EOs是否为100μg/ml，抑制LPS刺激诱导的TNF-α生成在培养细胞中。炎症细胞因子TNF-α激活NF-κB信号通路通过与TNF-α受体结合，从而引发炎症反应炎症性疾病(17)。在培养的RAW264.7小鼠巨噬细胞，无任何化合物检测显示细胞毒性为100μg/ml（数据未显示）；EO对腹腔巨噬细胞增殖无影响。这个RAW264.7细胞刺激后产生693 pg/ml的TNF-α带有LPS。对照组的TNF-α产生率设定为0%. 在所检测的EOs中，来自柠檬草的EOs显示对TNF-α产生的影响最强（抑制率＞50%）来自洋甘菊、柠檬和檀香木的展示了第二个最强的效果（30-50%抑制）(图1B)。来自桉树的EO，石灰和肉豆蔻不能影响TNF-α的产生（0%抑制）。

EO诱导的肥大细胞和TNF-α对β-己糖胺酶释放的抑制作用巨噬细胞产生

观察到的肥大细胞中β-己糖胺酶的抑制和TNF-α的抑制通过比较20种EO的作用，证实了在巨噬细胞中这些生物活性。β-己糖胺酶的抑制作用释放与TNF-α抑制呈高度相关显著相关系数（R2=0.783). 这些结果使我们推测，抗过敏活性与抑制β-己糖胺酶的释放TNF-α抑制诱导的抗炎作用可能是共同生物途径中的EO相关事件。

在检查的20个EO中，柠檬草EO产生培养细胞中最强的抑制活性(图1); 此后，我们专注于柠檬草EO。

柠檬草EO的鉴定组件

生物活性之间的关联柠檬草EO和EO成分通过分析通过GC-MS分析了EO的主要成分。共有138种化合物在EO中检测到，其中40种成分已被识别15种主要化合物列于表一.两种主要化合物占总含量的30%以上是天竺葵和普通（分别为40.16%和34.24%）。这些立体异构体的混合物单萜烯醛被称为柠檬醛。已识别的成分，5种化合物，柠檬醛[1]，香叶醇[3]，乙酸香叶酯[4] 芳樟醇[5]和莰烯[6]已上市。用化学方法合成了香叶醛[2]。化合物的制备1–6含有低分子量的萜类化合物相应的化学结构如所示图2.

图2 主要组成部分的结构柠檬草精油（EO）：柠檬醛[（3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醛），立体异构体的混合物，天竺葵属（反义异构体）和普通（顺式异构体）][1]，香叶醇[2]、香叶醇[3]、乙酸香叶酯[4]、芳樟醇[5]和莰烯[6]。

表一 柠檬草的化学成分精油（EO）。

表一

柠檬草的化学成分精油（EO）。

组件	组成(%)
杰拉尼亚尔[1][2]	40.16
内拉尔[1]	34.24
香叶醇[3]	5.11
乙酸香叶酯[4]	2.89
芳樟醇[5]	1.45
甲基庚烯酮	1.44
莰烯[6]	1.39
4-壬酮	1.38
β-石竹烯	1.09
杜松烯	0.96
柠檬烯	0.33
α-蒎烯	0.28
三环烯	0.18
丙酮	0.13
4-庚酮	0.06
其他	8.91

柠檬草EO主要成分的影响培养基中β-己糖胺酶的释放和TNF-α的产生单元格

基于上述结果100μg/ml柠檬草EO及其主要成分、化合物1–6，肥大细胞释放β-己糖胺酶和TNF-α的产生用巨噬细胞检测。在RBL-2H3和RAW264.7中细胞，这些化合物在100μg/ml时没有表现出细胞毒性（数据未显示）。

柠檬醛[1]（茴香醛和香叶醛的混合物）和geranial[2]，这是一个反式-柠檬醛的异构体抑制钙诱导的β-己糖胺酶释放离子载体A23187，这种抑制作用与柠檬草EO诱导(图。3A级)。另一方面，还有4种其他成分，香叶醇[3]，乙酸香叶酯[4]、芳樟醇[5]和莰烯[6]作用较弱或中度影响，以及对释放化合物3–6诱导的β-己糖胺酶比由化合物1-2或柠檬草EO引发。

图3 体外抗过敏和柠檬草主要成分的抗炎活性精油（EO）（化合物1-6）。（A） 抑制钙处理RBL-2H3细胞释放β-己糖苷酶电离层，A23187。（B） 抑制肿瘤坏死因子-αRAW264.7细胞经脂多糖（LPS）。化合物，100μg/ml。数据如下所示5个独立实验的平均值±标准偏差（SD）。**与对照组相比，P<0.01和*P<0.05（未经处理的细胞）。

化合物1-6对TNF-α生成的影响与β-己糖胺酶释放相似，且化合物1–2和柠檬草EO的抑制作用强于化合物3–6(图3B)。这些结果表明柠檬醛[1]和/或香叶醛[2]是具有生物活性的生物活性成分柠檬草EO。因此，我们试图探索化合物1-2进一步。

柠檬醛的抑制活性[1]和香叶醇[2]对LPS诱导的炎症反应的抑制作用巨噬细胞

NF-κB活化被认为是一种速率控制炎症反应期间的因素。因此，抑制柠檬草EO及其主要成分柠檬醛[1]和香叶醇[2]对LPS诱导NF-κB核转位的影响在RAW264.7细胞中检测(图。4A级)。蛋白质印迹分析显示，10μg/ml的柠檬醛[1]香叶醇[2]抑制LPS诱导的NF-κB核易位，分别抑制40%和52%。柠檬草10μg/ml的EO也抑制NF-κB的核转位，这种抑制活性与化合物相似1–2.

图4 The inhibitory activities of柠檬草精油（EO）及其主要成分柠檬醛[1]和天竺葵[2]，对抗培养细胞中的炎症反应。用10μg/ml柠檬草EO、柠檬醛预处理RAW264.7细胞[1] 或香叶醇[2]，然后与脂多糖孵育（LPS）30分钟（A）细胞核移位因子κB（NF-κB）和（B）如前所述，NF-κB（IκB）-α通过western blot分析进行评估材料和方法。（A） NF-κB的蛋白表达在没有试验的情况下用LPS处理的RAW264.7细胞化合物取100%。（B） 细胞内IκB-α蛋白的含量RAW264.7细胞在未进行试验的情况下未受LPS刺激化合物取100%。数据显示为平均值±标准值3个独立实验的偏差（SD）**P<0.01与对照组（未经处理的细胞）相比，*P<0.05。

LPS刺激可激活Toll样受体4和下游IκB激酶（IKK），进而磷酸化IκB，导致IκB降解NF-κB向细胞核的移位(18)。IκB-α通过掩蔽κB蛋白的核定位信号（NLS）和在细胞质(19)。此外，IκB-α阻断NF-κB转录因子结合的能力DNA，这是NF-κB正常功能所必需的(20)。因此柠檬草EO和化合物1-2对LPS诱导的检测RAW264.7细胞中IκB-α的蛋白表达(图4B)。IκB-α蛋白LPS刺激后表达减少59%(图4B)。IκB-α蛋白的量用化合物1-2（每个10μg/ml）处理的细胞几乎是与LPS处理的细胞相同（IκB-α蛋白水平为与对照组未处理细胞相比约35%），表明化合物1-2不影响蛋白质IκB-α的表达。这些结果表明柠檬草EO其主要成分抑制NF-κB核转位通过IκB-α独立机制。这些影响NF-κB信号通路中其他点所需的化合物进一步调查。

体内抗过敏和柠檬醛[1]和香叶醛[2]的抗炎活性

IgE介导的PCA反应体内是一个用于研究立即数机制的方法过敏反应。如所示图5A，100 mg/kg曲尼司特，a针对肥大细胞的常用抗过敏药物脱粒并抑制PCA反应，用作阳性控件。柠檬草EO及其主要成分柠檬醛[1]和100mg/kg的香叶醛[2]也抑制了小鼠分别减少60.7%、57.7%和77.4%。抑制作用柠檬草EO和化合物1–2比曲尼司特的药物，表明其具有很大的潜在用途抗过敏化合物。

图5 体内抗过敏和柠檬草精油（EO）和其主要成分柠檬醛[1]和香叶醛[2]。（A）曲尼司特的抗过敏活性（阳性对照），柠檬草EO以及被动皮肤上的化合物1和2过敏反应（PCA）。每种化合物（每种100 mg/kg）小鼠口服，免疫球蛋白E研究了（IgE）依赖的PCA反应。（B）甘草次酸的抗炎活性（阳性对照）、柠檬草EO和化合物1和2对TPA诱导的小鼠耳水肿模型中的水肿。每种化合物（500μg）分别涂抹在小鼠的一只耳朵上，30分钟后，TPA被涂到了两只耳朵上。7小时后评估水肿抑制作用以水肿百分比表示。数据显示为6个独立变量的平均值±标准偏差（SD）实验**P<0.01和*P<0.05与。对照组（用生理盐水治疗的动物）。

我们检测了柠檬草EO、柠檬醛[1]和香叶醛[2]TPA对小鼠耳炎性水肿的影响在里面活泼地.TPA（0.5μg）对小鼠耳的应用水肿，导致耳盘重量增加241%7涂抹后h。预处理500μg/耳化合物显著抑制炎症抑制作用的排序如下：香叶[2]>柠檬草EO>柠檬醛[1](图。第5页)。因此体内抗炎作用这些化合物显示出与它们相同的顺序体内抗过敏作用(图5A).这些结果表明柠檬草EO组分与观察到抗炎活性。甘草次酸（500μg/耳），一种已知的抗炎药，占40.5%该检测系统中的抗炎作用，以及这些化合物被发现比这大约有效1.5倍代理。

化合物1-2引发的生物效应与几乎相同浓度的柠檬草EO(图3——5)表明抗过敏和柠檬草EO的抗炎作用主要是由于其2主要成分柠檬醛[1]和/或香叶醛[2]。

讨论

多年来，EO在科学研究并越来越多地用于制药，营养和化妆品工业应用(21,22)主要是因为它们的强大抗菌剂(23)，抗氧化剂(24)，抗癌(25)和抗炎活性(26)EO的数量。感染这个过程会引发炎症，在此过程中炎症介质，如细胞因子从吞噬细胞中释放(27)。由于各种皮肤疾病，包括特应性皮炎(28)和寻常痤疮(29)，是与感染引起的炎症相关抗炎药可以解释某些植物衍生EOs治疗这些综合征。在几个世界各地，芳香草本植物在初级卫生保健，特别是农村地区(30)。因此，了解草药生物活性可以提高它们的许多功能组件，特别是有益的医疗、营养和化妆品中的添加剂。

在本研究中，选择了20名EO草药植物和柑橘类水果衍生的EOs。在植物衍生产品中在世界范围内，所选化合物代表了最著名的以及香水制剂中最常用的材料。这些EO通过水蒸馏或冷加压分离确认无任何污染，如重金属和通过GC-MS分析农药（数据未显示）。在这20个EO中，柠檬草EO对肥大细胞的抑制活性最强细胞脱颗粒，通过量化评估β-己糖胺酶在RBL-2H3细胞中的释放钙离子载体，A23187(图。1安培)和TNF-α的产生，一种多效性炎症RAW264.7小鼠巨噬细胞经LPS处理后产生的细胞因子(图1B)。我们观察到那个人柠檬草EO的成分，包括柠檬醛[1]，它是一种立体异构体混合物，香叶醛(反式-异构体）[2]和一般的(顺式-异构体），包含74.40%柠檬草EO(表一)，抑制NF-κBLPS的核转位和抑制TNF-α的产生巨噬细胞培养实验在体外(图3——5)。这些化合物也表现出强大的抗过敏/抗炎活性体内.柠檬草EO及其主要成分，如柠檬醛[1]和香叶醛[2]在TPA诱导的小鼠模型中表现出抗炎活性耳部水肿，尽管潜在的分子机制仍然存在未澄清的(图5B)。自从在TPA诱导的耳朵模型中观察到NF-κB的激活水肿(31)，我们假设抗炎作用可能至少部分依赖于抑制NF-κB活化。目前，柠檬醛[1]和香叶醇[2]被认为是很有前途的抗炎药。我们的研究表明，这些化合物作为NF-κB是有用的抑制剂和可能是有效的化学预防剂炎症。柠檬草EO成分中，柠檬醛[1]和香叶醇[2]抑制β-己糖胺酶的释放和TNF-α的产生，而香叶醇[3]和乙酸香叶酯[4]的产生没有任何影响(图3),提示柠檬醛的酮基可能对这些观察到的抑制活性。

柠檬草原产于印度和热带亚洲。它在亚洲烹饪中被广泛用作草本植物。它有一种微妙的柑橘味味道好，可以晒干、磨成粉末，也可以新鲜使用。柠檬草是通常用于茶、汤和咖喱。它也适用于家禽、鱼、牛肉和海鲜。它经常在非洲国家，如多哥和民主共和国刚果以及墨西哥等拉丁美洲国家。在柠檬草的成分中，香叶草[2]含有一种强烈的柠檬气味。尼拉尔的柠檬味不太强烈，但更甜。柠檬醛[1] 另一方面，是一种用于香水的芳香化合物因为它的柑橘效果。柠檬醛[1]也被用作香料和强化柠檬油。这种含有柠檬醛[1]的植物用于民间医学作为一种抗痉挛、降压、抗惊厥、，止痛药、止吐药、镇咳药、抗风湿药、防腐剂、，抗菌、抗腹泻和抗氧化剂，以及神经和胃肠疾病及发热的治疗(32)。在本研究中，柠檬草EO被发现具有抗过敏和抗炎作用活动；然而，这些不同背后的机制生物活性没有详细检查。之间的关联上述生物活性和对NF-κB的核移位和TNF-α的产生需要进一步调查。

现代芳香疗法治疗过敏和炎症疾病的发展主要基于以下临床试验几位先驱者的意向书；然而，关于这些EO对过敏和炎症的生理作用反应仍处于初级阶段。对柠檬草EO的药理作用体内可以为本EO的临床应用提供理论依据抗过敏和抗炎物质。总之，我们的数据提供了强有力的科学证据，并突出了效益柠檬草EO及其成分柠檬醛[1]和香叶醛[2]，用于医疗和/或化妆品。

致谢

这项研究部分得到了教育、文化、体育、科学和技术（MEXT，日本）-战略研究基金会支持项目私立大学，2012-2016年。Y.M.获得的助学金MEXT和兵库的科学研究（C）（编号24580205）科学技术协会（日本）。I.K.收到了MEXT青年科学家补助金（B）（编号23710262）。

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