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.2003年2月；2(1):49-61.
doi:10.128/EC2.2.1.49-61.2003。

白色念珠菌交配的细胞生物学

肖恩·洛克哈特 1, 卡拉·丹尼尔斯, 赵瑞（Rui Zhao）, 黛博拉·韦塞尔斯, 大卫·R·索尔
附属公司

白色念珠菌交配的细胞生物学

肖恩·洛克哈特等。 真核细胞. 2003年2月.

摘要

最近的研究表明，白色念珠菌交配型基因座MTLa和MTLalpha的纯合菌株发生了白色-无色转换，并且乳白色表型的表达大大增强了菌株之间的交配。利用后者的特性获得高频交配，我们对白色念珠菌交配过程的细胞生物学进行了表征。利用连续视频显微镜、计算机辅助活细胞三维重建和荧光显微镜，我们监测了结合、管形成、融合、出芽、隔膜形成、，子细胞的发育以及核迁移和分裂的时空动力学。根据这些观察结果，建立了白色念珠菌交配阶段的模型。这些阶段包括shmoing、接合管的趋化性、管与核结合的融合、接合桥中的液泡膨胀和核分离、合子中的异步核分裂、芽生长、核迁移到子细胞、隔膜和子细胞出芽。由于没有核配的细胞学指示，因此进行了遗传实验以评估标记分离。未观察到重组，这表明交配发生在自然发生的纯合子a和α菌株之间没有核配的情况下。本研究首次描述了白色念珠菌交配过程的细胞生物学。

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数字

图1。
图1。
管的形成只发生在以下混合物中MTL公司一和MTL公司α细胞。细胞通过DIC光学成像。（A） 菌株L26的均匀培养(MTL公司一)暗相细胞；（B） WO-1同质培养(MTL公司α） 暗相细胞；（C） L26混合物(MTL公司一)和12C(MTL公司一)乳浊期细胞（50:50）；（D） WO-1混合物(MTL公司α） 和19F(MTL公司α） 乳浊期细胞（50:50）；（E） P37005混合物(MTL公司一)和WO-1(MTL公司α） 乳浊期细胞（50:50）；（F） L26混合物(MTL公司一)和P78048(MTL公司α） 暗相细胞；（G至J）混合物中初始管形成的高分辨率图像MTL公司一和MTL公司α乳浊期细胞；（K和L）管在以下混合物中形成MTL公司一和MTL公司α不透明相细胞。比例尺，5μm。
图2。
图2。
两个细胞在混合物中进行融合的视频图像序列MTL公司一（P37005）和MTL公司α（WO-1）乳白色细胞。细胞通过DIC光学成像。65分钟时发生融合。
图3。
图3。
用3D-DIAS重建由混合的MTL公司一（P37005）和MTL公司α（WO-1）细胞。红细胞（细胞1）位于细胞丛的高处，而绿细胞（细胞2）位于细胞丛的底部。未重建细胞团中的非融合细胞。融合发生后，合子呈橙色。从相对于基质（网格）5°（A）和35°（B）的角度观察重建细胞。度，度。
图4。
图4。
ConA染色证明MTL公司一和MTL公司α细胞融合。MTL公司一用FITC-ConA对细胞（P37005株）进行活性染色，MTL公司用罗丹明-ConA对α细胞进行活性染色，并将细胞混合。融合子随后用钙荧光染色。（A） 未熔合MTL公司一FITC-ConA染色细胞；（B） 未熔合MTL公司罗丹明-ConA染色的α细胞；（C） 钙氟染色的未融合细胞；合子的（D、G和J）相控图像；钙荧光染色合子的（E、H和K）荧光图像；罗丹明-ConA-FITC-ConA-标记合子的（F、I和L）荧光图像。在100个合子中，100%为绿色-红色组合，0%为绿色-绿色，0%为红色。比例尺，5μm。
图5：。
图5：。
子细胞发育和隔膜形成白色念珠菌合子。合子由MTL公司一和MTL公司α杂交用钙氟染色以显示隔膜。四个示例（A到D）中的每一个都包括相位控制图像和荧光图像。箭头指向间隔。DC，子单元。比例尺，5μm。
图6。
图6。
混合细胞形成的管中的核分布MTL公司一和MTL公司α培养物。细胞核用Hoechst 33342染色。原子核（蓝色）的荧光图像叠加在相控图像上。箭头指向原子核。B、 顶芽在管先端形成。比例尺，5μm。
图7。
图7。
交配不同阶段的核构型。细胞核用Hoechst 33342染色。细胞核（蓝色）的荧光图像叠加在DIC图像上。箭头指向原子核。B、 芽；DC，子细胞（分隔后）。比例尺，5μm。
图8。
图8。
合子和子细胞形成过程中的核动力学模型。通过回顾多种混合文化，对事件的一致顺序进行了解释MTL公司一和MTL公司α细胞。液泡为浅棕色，细胞核为深棕色。B、 芽；S、 隔膜；DC，子单元。
图9：。
图9：。
WO-1的Southern印迹模式示例(MTL公司α） 和P37005(MTL公司一)和一个与二者交叉探测的后代URA3公司和NIK1。（A） 南方斑点。附注二URA3公司乐队和一个NIK1系列WO-1和1的频带URA3公司乐队和二NIK1系列P37005的条带。（B） 从WO-1和P37005杂交中选取的子细胞4-5（表3）的12个子代克隆的交配型位点的带型和等位性模型。请注意，所有MTL公司α子代表现出URA3公司和NIK1系列的带状图案MTL公司α母株和所有这些MTL公司一后代表现出MTL公司一亲本菌株。印迹左边的数字是分子大小（以千碱为单位）。
图10。
图10。
L26菌株杂交产生的多核细胞(MTL公司一)和菌株WO-1(MTL公司α） 其中，混合物首先在改良的Lee培养基中培养，直到发生融合（但在融合中子细胞没有机会形成），然后在产孢培养基中培育过夜。在这些条件下，20%的子细胞是多核的。（A至C）具有两个细胞核的细胞的实例；（D） 有四个细胞核的细胞的例子。比例尺，5μm。
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