一种新型双过氧化物酶体——单胞菌素的长期疗效增殖激活受体γ/核因子-红细胞生成素2相关因子-2实验性脑出血中的激动剂

动物

本研究中的所有程序均经动物利用和管理部门批准山西医科大学委员会，并遵守国家研究院《实验动物护理和使用卫生指南》。雄性SD大鼠(12 周岁，体重275 克 ± 25 g、 山西医学院动物实验中心大学）免费获得食物和水。

非物质文化遗产模型

立体定向注射细菌胶原酶诱导脑出血的方法(0.5 U型IV溶于2 μl生理盐水，Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA）注入基底神经节按我们之前的出版物所述进行。²假手术大鼠只接受针刺。生命体征在整个手术和恢复期进行监测。神经功能测试在ICH诱导后的预选时间点进行（7、14和28 天）。神经功能测试后，动物被安乐死，大脑收集组织以测量血肿体积、血红蛋白水平、，铁染色、铁含量、左右半球重量，以及脑萎缩。

实验设计

共使用72只雄性SD大鼠进行实验。添加动物的条件是他们在研究结束前去世。在以下方面没有显著差异不同实验组之间的死亡率。72只大鼠平均分为三组：假手术组、ICH+溶媒（无菌生理盐水）组、，和ICH+单胞菌素（10 毫克/千克）。每组大鼠进一步分组根据评估的不同时间点平均分为三个亚组然后安乐死（7、14或28 天）。Monascin每天服用两次6点胃灌流 ICH后小时14 天。长期神经功能试验（改良Garcia量表、T迷宫和转子杆试验）在14 天和28 ICH后天数；莫里斯水迷宫测试在23和28 ICH诱导后天。血红蛋白水平、铁含量和体重在第7、14和28天测量左右大脑半球的 天后脑出血。

神经行为测试

使用改良的Garcia对动物进行神经功能评估天平、T迷宫测试和转子杆测试。神经行为测试由以下人员进行评估：一名独立研究人员对治疗分配一无所知。改良加西亚鳞片和莫里斯水迷宫已在前面描述过。^2,17重复每个测试三次，平均得分。

T迷宫试验

将大鼠放置在T迷宫的启动盒中，如图所示图 1和允许消耗2.5 最后从一个小盘中取出25毫升w/v蔗糖溶液选择的小巷。每次试验开始时，将大鼠置于头部首先通过启动箱的入口门，以便它可以自由进入要么选择小巷。选择的准确性和持续时间由老鼠进入了一个选择舱。无论选择是正确的还是错误的，然后把老鼠移走放在家里适当延迟间隔的cage。¹⁸每只大鼠重复试验六次。

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图1。

T型迷宫由两侧的灰色木制启动盒组成在一个木制的选择室旁边。左边的隔间漆成了白色右边是黑色的。透明塑料制成的单向门允许进入选择室并阻止回溯。所有房间的盖子都是由透明塑料和地板制成的五金布。

水迷宫试验

进行Morris水迷宫试验以评估治疗效果ICH后的空间记忆和学习能力。本试验是作为如前所述。¹⁷在连续两天适应后，大鼠从25到28 ICH后天。

血红蛋白测定

按照上述步骤执行。¹⁷Drabkin试剂添加到0.1 ml上清液等分，并允许休息15分钟 室温下最小，避光。这种反应将血红蛋白转化为氰甲基血红蛋白，其吸收峰位于540 nm，然后可以通过测量光学≈550时溶液的密度（OD） nm波长。测量并记录外径在540 nm，使用分光光度计。这些程序产生了线性灌注脑中血红蛋白浓度测量值之间的关系标准吸光度曲线上的组织和加血体积。为了更好显示与假手术相比的血红蛋白水平（血肿为零），数据显示为比率（假手术的预设值为1）。¹⁷

铁染色和铁含量

如前所述，对铁染色和铁含量进行评估。^2,17大脑切片用蒸馏水冲洗并浸入Perls的溶液中20 min.用蒸馏水冲洗所有载玻片，然后用核固红染料5 最小铁含量如前所述进行分析根据铁含量测定方案的说明执行。¹⁷使用Bio-Rad iMarkTM微孔板吸光度计算铁值读者。样品的总铁含量是从标准中获得的曲线。

大脑重量分析

脑切片用苏木精-伊红染色试剂盒染色。这些老鼠安乐死后，大脑被切除。小脑切除后脑干，大脑沿着中线被分成两半记录左右半球。The difference in weight between the计算左右半球。

PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin改善长期神经功能缺损遵循ICH

ICH+载体动物在在每个时间点进行神经功能测试，T迷宫测试除外持续时间(第页 < 0.05,补充图A–G)。与车辆相比，PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin显著改善了神经功能缺损14岁时采用改良Garcia量表、T迷宫测试和转子杆测试进行评估和28 ICH后天数(第页 < 0.05,补充图A–G).

Morris水迷宫测试结果表明，单胞菌素改善了空间ICH后记忆(第页 < 0.05,图2a——天)。Monascin治疗的ICH大鼠显示与机动动物相比，行程更短(图2a)。在的第一天测试表明，所有大鼠到达平台的潜伏期相似。在随后的测试表明，单胞菌素治疗的ICH动物逃逸的潜伏期较短平台第三天和第四天的水迷宫实验比较带载具动物(图2亿)。Monascin处理的大鼠游泳距离更短在测试的第二天和第四天逃到隐藏的平台上之前(图2c)。在在试验的第六天，单核甘酸处理的大鼠进行了探针试验与载具动物相比，在目标象限内的数量明显更多(图 二维)。此外，假手术组与假手术组的神经测试得分无显著差异和单胞菌素治疗的ICH大鼠（28岁时改良Garcia评分除外） 天后外科手术(补充图A-G和图2).

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图2。

从25到28岁的所有组均进行了Morris水迷宫测试 天后非物质文化遗产(n个 = 6/组）。（a） 游泳的可视化轨迹和热图。（b） 逃逸到平台的平均延迟。（c）逃上平台前的平均游泳距离。和（d）平均值目标象限内的平台搜索时间。*第页 < 0.05与伪装，#第页 < 0.05与ICH+车辆，双向方差分析，平均值 ± SD，重复测量方差分析。

方差分析；颅内出血；SD、，标准偏差。

PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin降低ICH后血肿体积

Monascin-处理的ICH大鼠的血红蛋白水平下降同侧大脑半球与载具组在7岁时的比较 天后外科手术(第页 < 0.05,图 三)。与假手术组相比，血红蛋白水平在7岁时显著升高 第天和第14天 中的天ICH+车辆组，而7 单胞菌素治疗的ICH大鼠术后天数(第页 < 0.05,图3a,​，b）中，b条)，没有显著差异14岁时接受假手术和莫纳西林治疗的ICH 天和28 术后天数；28岁时，三个研究组之间没有发现差异 手术后天(图 三).

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图3。

出血切片（a）和血红蛋白水平（b）分别为7、14和28 天ICH之后。为了更好地说明与假手术（血肿为零），数据显示为比率（预设值假手术值为1）。单向方差分析和Tukey检验已使用*第页 < 0.05与伪装，#第页 < 0.05与ICH+车辆。

方差分析；颅内出血。

脑出血后PPAR-γ/Nrf2激动剂monascin减少铁沉积

Monascin治疗的ICH大鼠同侧大脑铁含量较低7岁时大脑半球与车辆组比较 天和14 手术后天(第页 < 0.05,图 4)。车辆组展示了第7天与假手术组相比，铁含量显著增加 天和14 手术后天(第页 < 0.05,图 4)。没有显著的假手术组和单胞菌素治疗组ICH之间的差异，无差异28岁时在所有小组中发现 手术后天(第页 > 0.05,图4)。结果表明，铁积累已被清除4 ICH后数周。

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图4。

（a） 铁染色和（b）第7、14和28天的铁含量测定 天ICH诱导后*第页 < 0.05与沙姆#第页 < 0.05与ICH+车辆，n个 = 6/组，单向方差分析，Tukey多重比较测试，平均值 ± 标准偏差。

方差分析；颅内出血；SD、，标准偏差。