细胞分子医学杂志。2014年2月;18(2): 197–207.
微小RNA在酒精性肝损伤中的功能作用
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凯利·麦克丹尼尔
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
c(c)美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医院学术运营部
莱昂纳多·埃雷拉
d日德克萨斯州生物科学研究所,美国德克萨斯州坦普尔
周天豪
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
c(c)美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医院学术运营部
希瑟·弗朗西斯
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
c(c)美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医院学术运营部
韩玉燕
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
菲利普·莱文
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
林华湘
d日德克萨斯州生物科学研究所,美国德克萨斯州坦普尔
香农·格拉泽
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
詹弗兰科·阿尔皮尼
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
《梵音梦》
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
c(c)美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医院学术运营部
一研究,德克萨斯州中部退伍军人医疗系统,美国德克萨斯州坦普尔
b条德克萨斯州农工大学健康科学中心斯科特与怀特消化病研究中心医学部和美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医疗保健公司
c(c)美国德克萨斯州坦普尔斯科特与怀特医院学术运营部
d日德克萨斯州生物科学研究所,美国德克萨斯州坦普尔
*通信地址:Fanyin MENG博士或Gianfranco ALPINI博士,美国德克萨斯州A&M健康科学中心医学院Scott&White Healthcare消化疾病研究中心,1901 S 1st Street,Building 205,Room 1R60,Temple,TX 76504,USA,电话:254-743-0383或254-743-20274,传真:254-443-0555或254-773-0378,电子邮箱:ude.umat@gnemf或ude.umat@iniplag #这些作者对这篇文章的贡献是一样的。
2013年8月18日收到;2013年11月28日接受。
版权©2014作者。《细胞和分子医学杂志》由John Wiley&Sons Ltd和细胞和分子医药基金会出版。 这是一篇根据知识共享署名许可证条款开放存取的文章,该许可证允许在任何媒体上使用、分发和复制原始作品,前提是正确引用了原始作品。
摘要
近年来,酒精性肝病(ALD)期间microRNAs(miRNAs)的功能已成为生物学研究的热点。研究表明,ALD相关的miRNAs在调节肝脏炎症因子(如肿瘤坏死因子α(TNF-α))中起着关键作用,肿瘤坏死因子-α是导致肝纤维化(肝瘢痕)的关键炎症因子之一,也是酒精性肝病的关键促因。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的一种成分,负责库普弗细胞释放TNF-α。miRNAs是Kupffer细胞、肝细胞和肝星状细胞中LPS信号传导的关键介质。某些miRNAs,尤其是miR-155和miR-21,在暴露于乙醇时,在LPS信号上调方面表现出正相关。ALD与肠道通透性增强有关,这使得LPS水平增加,导致Kupffer细胞分泌TNF-α增加,随后通过特异性miRNAs促进酒精性肝损伤。同时,脂肪性肝炎中最常见的两种失调miRNAs,miR-122和miR-34a是ALD期间乙醇/LPS激活生存信号的关键介导物。在这篇综述中,我们总结了有关特定microRNA功能的实验和临床方面的最新研究结果,主要关注乙醇/LPS治疗后的炎症和细胞存活,以及循环microRNA在人类酒精性疾病中的作用的进展。
关键词:酒精性肝病、microRNAs、Kupffer细胞、TLR4、TNF-α、LPS、凋亡
介绍
液化石油气
TLR4级
肿瘤坏死因子α
枯否细胞和TNFα分泌增加
微小RNA
miRNA与表观遗传学
miR-155和乙醇暴露
miR-155和TNFα
miR-155和NF-κB
miRNA和内毒素改变通透性
微RNA与肝细胞存活
循环miRNAs作为ALD的稳定血基标记物
结论
介绍
酒精性肝病引起全球健康关注1这种疾病包括酒精性脂肪肝、脂肪性肝炎和酒精性肝硬化,还包括肝细胞癌2,三根据美国国家酒精滥用和酒精中毒研究所的数据,这是美国第12大死亡原因,2007年共有14364人死亡。将近14岁 数百万美国人酗酒或酗酒。还有数百万成年人可能会出现酒精问题。更值得注意的是,酒精与200多种疾病有关,是60种疾病和伤害的直接原因4肝脏是酒精代谢的主要场所,也是酒精诱导损伤的主要靶器官1酒精性肝病一直是全球肝脏相关疾病的主要原因5–7酒精性肝病是指肝脏中Kupffer细胞分泌的炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肝脏造成瘢痕8TNF-α的释放是由库普弗细胞上toll样受体4(TLR4)与脂多糖(LPS)的结合触发的9正是这些细菌产物在肠腔中的移位导致了肝脏内的稳态失衡。由于肝脏对体内平衡的重要性以及酒精性肝病在世界范围内的流行,肝脏功能在生物医学研究中得到了额外的重视。
调节ALD炎症反应和细胞凋亡的一个控制点涉及关键炎症/凋亡信号蛋白的microRNA靶向。微RNA是短功能RNA,通过转录后机制导致其靶基因表达减少。一般来说,这种靶向性涉及到microRNA和同源mRNA靶之间不完美的碱基连接,导致蛋白质产生的改变10,11在人类ALD中,微RNA密切参与肝损伤的发展和进展,并改变疾病相关靶点的表达12,13近年来,人们对microRNA的功能给予了很大的关注,部分是因为microRNA生物学仍在被阐明,部分是由于microRNA在疾病诊断和治疗方面的前景。调节microRNA功能是ALD治疗的一种新兴方法,研究了解microRNA表达和功能改变的潜在机制是实施这种治疗策略的必要条件。
液化石油气
暴露于革兰氏阴性细菌细胞壁后,肝脏的解毒过程启动了脂多糖暴露14–16当革兰氏阴性细菌细胞死亡或溶解时,脂多糖被释放到血流中,然后被输送到肝脏进行解毒17研究发现,当肠道通透性严重受损时,仅脂多糖(LPS)随着酒精性肝消耗量的增加而增加。对酒精喂养小鼠的实验表明,与正常小鼠相比,酒精喂养小鼠内毒素水平升高14–16根据该实验得出的结论,这些结果是乙醇削弱肠道紧密连接的直接结果18过量的内毒素被肠腔吸收,然后通过肝脏,在那里单核细胞和巨噬细胞(如库普弗细胞)暴露于毒素中19,20除了乙醇暴露导致肠腔通透性增加外,乙醇暴露似乎还与酗酒者肠腔中革兰氏阴性细菌数量增加有关。虽然细菌生长的增加还不确定,但有证据表明,这一问题需要进一步研究21由于酒精可以显著增加肠道LPS的易位。对这些相互作用的研究可能为治疗干预提供潜在的新靶点。
TLR4级
Toll样受体最初在果蝇中发现,后来作为相应的人类同源物9一种特定的toll样受体TLR4通过其共受体CD14或MD-2识别并结合LPS22,23MD-2是一种可溶性蛋白质,与TLR4非共价结合,在没有TLR的情况下直接与LPS结合形成复合物24.MD-2在酒精喂养小鼠中的浓度增加25众所周知,它以可溶性形式存在,在高浓度下,它被证明是内毒素激活的TNF-α分泌的抑制剂9然而,CD14存在于单核细胞、巨噬细胞、实质细胞和成纤维细胞中26,27在小鼠CD14抑制期间,证实了其在LPS诱导的TNF-α途径中的用途。CD14抑制小鼠对内毒素休克产生耐药性28与TLR4受体和共受体接触后,LPS诱导枯否细胞释放TNF-α6因此,TLR4和LPS的关系在肝脏炎症介质的介导中起着关键作用。
有充分证据表明ALD中炎症级联激活增加。Toll样受体4在所有类型的肝脏细胞中表达;因此,肠源性内毒素可以调节ALD中所有肝细胞的功能9,29,30多年来,有力的证据表明TLR4-LPS信号通路在酒精诱导的肝损伤中起着关键作用31慢性和急性(或狂饮)饮酒都会影响TLR4信号的各种成分。小鼠ALD中TLR4及其共受体以及其他TLR的表达增加9对TLR4突变小鼠的研究证明了对早期ALD的保护作用,最近使用TLR4缺陷小鼠的报告证实了TLR4在ALD发病机制中的重要作用25.
存在一些反馈机制来限制LPS介导的毒性作用。一些可溶性诱饵受体,如可溶性TLR4和信号转导蛋白的剪接变异体,包括MyD88-s、IRAK-M和TAG,是关键的调节因子32Toll样受体4在其共受体CD14或MD-2的协助下介导LPS信号22,23.脂多糖/TLR4参与适配器分子MyD88和TRIF,随后分别激活下游信号通路。TLR4-MyD88复合物激活NF-kB可增强促炎细胞因子的产生,如TNF-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1b23Tank Binding Kinase-1/IkB Kinase-e/IKKi(TBK/IKKe)磷酸化和通过TRIF信号激活干扰素调节因子-3导致产生干扰素-γ-干扰素33.4以内 乙醇暴露天,在肝甘油三酯积累或血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性升高之前,以及在细胞色素P450 2E1或氧化应激诱导之前,IFN-γ、TNF-α和IL-6的表达显著增加34因此,促炎症和IFN-γ途径的激活可能是LPS/TLR4依赖性或独立性的,对这些特定途径的评估可能会对ALD产生翻译影响9,34也引入了microRNA,如miR-146a和miR-21,它们由LPS诱导,在转录后水平上以IRAK1、TRAF6和PDCD4等信号蛋白为负靶标32,35,36.
肿瘤坏死因子-α
肿瘤坏死因子-α是肝脏中的一种炎症因子,已被发现是酒精性肝病的关键因素5引入LPS后,肝脏中的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α,LPS与TLR4结合。TNF-α的释放导致炎症,从而导致肝纤维化37最近的一项研究确定,通过分别引入乙醇和LPS,Kupffer细胞在肝脏中的TNF-α生成增加。在本研究中,在保持乙醇水平不变的情况下,当向肝巨噬细胞注入一定剂量的LPS时,TNF-α水平升高。进行反向实验,增加乙醇,不向系统中引入额外的LPS。在这两个实验中,TNF-α的产量都增加了。由于脂多糖是激活TLR4通路的已知成分,该实验证实,不是乙醇直接参与该通路的激活,而是乙醇介导脂多糖和其他因素导致肝瘢痕形成31TLR4通路在TNF-α的激活中起关键作用,但它是调节炎症的TNF-β蛋白。
Kupffer细胞和TNF-α分泌增加
枯否细胞是肝脏中的常驻巨噬细胞,在识别到LPS信号后激活体内和在体外
9,31通过对枯否细胞活化和失活的研究,枯否细胞被确定为酒精性肝病的关键成分。库普弗细胞的灭活含钆氯化物或氯膦酸盐注射可以改善酒精-诱导性肝病38,39此后得出结论,库普弗细胞在一定程度上对酒精性肝病负责38,39LPS向TLR4及其共受体发出信号刺激Kupffer细胞释放TNF-α,从而导致肝组织瘢痕形成,最终导致酒精性肝病31在酒精性肝病中,肝脏Kupffer细胞TNF-α引起的损伤包括脂肪变性和炎症,以及肝细胞损伤40,41存在三种特殊的miRNAs调节Kupffer细胞中TNF-α的生成:miR-155和miR-146a36,42,尽管只有一个显示TNF-α:miR-155阳性上调43作为与血液直接接触的机体主要巨噬细胞群,库普弗细胞在最近的研究中备受关注。
微小RNA
microRNA是RNA的片段,作为表观遗传调节器。miRNA功能的首次发现和观察发生在1993年,在随后的10年中 多年来,已经发现了300+个miRNA序列。如今,已经在142个物种中描述了约17000个miRNA。其中,约1000个存在于人类基因组中44,45MicroRNAs(miRNAs)属于一组非蛋白编码RNA(ncRNAs,non-protein-coding-RNA),约20–22个核苷酸长46–48被发现是基因表达的关键调节器5,6它们是从RNA聚合酶II或Poly II转录而来。它们开始在细胞核中存在,然后到达成熟的细胞质(). 它们通过与mRNA的非翻译区结合,负责数百个基因的交替49miRNAs也被发现对甲基化的调节有影响50,51某些miRNA与特定疾病有关,如肝细胞癌和各种类型的肝炎。当细胞发出损伤或致病性感染信号时,这些miRNAs是第一反应者。它们在身体的免疫反应中很重要。6由于miRNAs对人体的巨大影响,其研究在最近的研究中获得了很大的兴趣。
酒精性肝损伤期间特异性miRNAs的异常表达和功能变化。在酒精性肝病期间,乙醇通过改变包括脂多糖、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α在内的转录因子的激活和/或甲基转移酶等表观遗传修饰酶,如DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A和DNMT3B,影响miRNA的表达。miRNA前体被核糖核酸酶Drosha和Dicer切割,同时从细胞核转运到细胞质。成熟miRNA与精氨酸蛋白(Ago)的结合将复合物导向特定信使RNA中的互补靶序列。如果靶点与miRNA完全互补,与miRNA相关的核糖核蛋白Argonaute 2可以介导其裂解。然而,miRNA和靶基因之间的不完全匹配可能只会导致翻译抑制而不改变mRNA104–106.
miRNA与表观遗传学
表观遗传学本质上定义了在不破坏DNA序列的情况下基因表达的改变。表观遗传调控被多种因素改变和操纵,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非蛋白编码RNA(ncRNAs)沉默RNA46,47DNA甲基化是一种表观遗传修饰,可以调节基因表达,并受到至少三种DNA甲基转移酶(DNMT-1、DNMT-3A和DNMT-3B)的严格调控。异常DNA甲基化与包括酒精性肝病在内的许多人类疾病有关52–54饮酒会导致细胞损伤。最近的研究表明,乙醇诱导表观遗传改变,特别是乙酰化、组蛋白甲基化以及DNA的低甲基化和高甲基化55–57这为乙醇研究开辟了一个新的领域,并为乙醇在核小体水平上与基因表达和病理生理后果相关的作用提供了新的见解。尽管DNA甲基化与许多肝脏疾病(包括人类ALD)中的肝损伤和不良疾病结局密切相关,但其在乙醇依赖型ncRNA表达中的应用是新的。更好地了解乙醇如何与特定的DNA甲基转移酶相互作用,并有助于异常的ncRNA表达,这将明显促进该领域的发展,并增加我们对ALD发病机制的了解。
在酗酒初期饮酒后,DNA甲基化发生改变。据报道,长期乙醇暴露后肝脏中DNA的整体低甲基化58长期饮酒后,肝脏中出现c-myc基因的区域低甲基化。据报道,妊娠大鼠乙醇暴露后,胎儿组织中DNA甲基化降低,DNMT活性随之降低59在ALD患者的外周血细胞中也发现DNMT活性降低。此外,乙醇摄入也与精子中DNMT转录水平降低和印迹DNA区域甲基化改变有关60–62此外,长期饮用乙醇会损害1-碳代谢,从而降低S-腺苷甲硫氨酸的可用性。这种甲基供体对DNA和组蛋白甲基化都是必需的63,64乙醇介导的DNA甲基化降低可能会增加受影响基因的表达,包括ncRNAs。因此,值得研究的有趣可能性是,乙醇引起的表观遗传学变化可能是一些miRNA表达改变的原因。
miRNA也是肝脏转录后表观遗传学的调节剂。它负责基因表达调控。它们负责阻碍几个翻译元件,包括:靶mRNA的起始、延伸、降解和降解65–67miRNA表观发生的作用不仅涉及LPS信号或TNF-α生成的调节,miRNA也是调节肠道通透性的主要成分67乙醇对miRNA的调节具有长期作用(). 几项研究表明,乙醇可以改变酒精喂养小鼠的miRNA浓度。在乙醇暴露下,发现几种不同的miRNAs异常表达。虽然ALD的诱发风险因素和病因各不相同,但在已发表的研究中,一些特定miRNAs的放松调控通常被发现,这表明它们在酒精性肝损伤中的重要性。其中,miR-21、miR-34a、miR-155、miR-320的过表达和miR-122、miR-181a、miR-199a、miM-200a的欠表达被多篇文献报道。这些miRNAs在其中三个更显著的是miR-122、miR-34a和miR-21。它占肝脏总miRNA含量的70%以上。另一个值得注意的是miR-155,它调节肝脏中的炎症因子分泌68miRNA中负责维持肠道通透性的一种是miR-122,如前所述,它受到乙醇暴露的负面影响。乙醇还上调miR-155的表达,miR-155s负责调节LPS诱导的TNF-α分泌69.
表1
年份 | 分析方法 | 研究的主要结论 | 工具书类 |
---|
2008 | 微阵列/Northern印迹 | 与饮酒相关的肝癌患者miR-126表达降低 | 98 |
2009 | 定量聚合酶链式反应 | 乙醇诱导的miR-199下调可能有助于增加HIF-1α和ET-1的表达 | 99 |
2009 | 微阵列 | 喂食含乙醇饮食(Lieber–DeCarli)小鼠的肝脏样本显示酒精性脂肪性肝炎的特征,miR-320、miR-486、miR-705和miR-1224的表达增加,miR-27b、miR-214、miR-199a-3p、miR-182、miR-183、miR 200a和miR-322的表达减少 | 100 |
2009 | 定量聚合酶链式反应 | miR-375的表达被证明是高表达的,并且随着饮酒量的增加而增加,这表明这种miRNA可以代表饮酒的分子指纹 | 101 |
2011 | 定量聚合酶链式反应 | 慢性饮酒增加巨噬细胞miR-155通过NF-κB和miR-155的增加有助于酒精诱导TNF-α生成的增加通过增加mRNA稳定性 | 31 |
2012 | 微阵列/Northern杂交/qPCR | 甲基化相关miRNA(miR-34a)在喂食乙醇的小鼠肝脏中增加 | 52 |
2012 | 定量聚合酶链式反应 | miR-217在乙醇处理后增加,是乙醇在肝脏中作用的特异性靶点 | 91 |
2012 | 定量聚合酶链式反应 | 乙醇喂养大鼠肝再生过程中miR-21表达的增加更为强劲 | 102 |
2013 | 微阵列/qPCR | 据报道,一些被慢性EtOH喂养显著改变的miRNAs,包括miR-34a、miR-103、miR-107和miR-122,在调节肝脏代谢中发挥作用,这些miRNA的改变是在EtOH-喂养的过程中逐渐发生的 | 103 |
表2
微小RNA | 染色体定位 | 调节障碍 | 工具书类 |
---|
miR-122基因 | 18季度21.3 | 减少/增加 | 52,103 |
miR-125b型 | 第11季度24.1 | 降低 | 103 |
miR-126型 | 9季度34.3 | 降低 | 98 |
miR-155型 | 21季度21.3 | 增加 | 31,99 |
miR-181a型 | 第1季度32.1 | 降低 | 52,100 |
miR-199a型 | 第1季度24.3 | 降低 | 99,100 |
miR-200a型 | 1第36.33页 | 降低 | 100,103 |
miR-21型 | 第17季度23.2 | 增加 | 52,102 |
miR-217型 | 第26.1页 | 增加 | 91 |
miR-320型 | 8月21.3日 | 增加 | 100,103 |
miR-34a型 | 第16.22页 | 增加 | 52,103 |
miR-375型 | 第2季度35 | 增加 | 101 |
miR-486型 | 第8页11.21 | 增加 | 100 |
let-7b | 2013年第22季度 | 降低 | 52 |
miR-155和乙醇暴露
miRNA是库普弗细胞对脂多糖反应的已知调节因子。三种miRNAs,特别是miR-155、miR-125b和miR-146a,在研究中引起了兴趣,并被证明是LPS调节的关键贡献者69然而,似乎只有miR-155和miR-146a在巨噬细胞(如库普弗细胞)中表达上调。尽管miR-146a和miR-155均未被调节,但只有miR-155s通过增强其翻译对炎症因子TNF-α的分泌具有正向调节作用(). 由于这些发现,miR-155在研究miRNA对酒精性肝病的影响方面受到了特别的关注42,70最近的研究表明,酒精在RAW264.7巨噬细胞和库普弗细胞中靶向miR-155并诱导miR-155。本研究得出结论,miR-155与TNF-α水平直接相关。饮酒小鼠TNF-α和miR-155水平升高31同一研究测试了其他miRNA,如miR-125b和miR146a,但只有miR-155在RAW 264.7巨噬细胞的炎症反应中表现出显著影响31类似的研究也表明,酒精治疗可增加相同RAW 264.7巨噬细胞的miR-155在体外由于miR-155在刺激LPS诱导的TNF-α产生中起着至关重要的作用,本研究表明,miR-155的抑制可以防止酒精诱导的LPS致敏。相反,发现miR-155的上调增加了Kupffer细胞对LPS信号的敏感性。对酗酒小鼠的实验表明,酒精暴露上调miR-15543通过miRNA介导导致枯否巨噬细胞活化,导致细胞释放更多TNF-α31早期使用NF-κB药物抑制剂的报告31已证明醇诱导miR-155上调是通过NF-κB与miR-155连接。
在酒精性肝损伤期间,微小RNA介导库普弗细胞中的脂多糖(LPS)/toll样受体4信号传导。饮酒可能会增加肠道通透性,随后细菌或微生物移位到肠腔,并导致门脉循环中LPS增加。肝脏中过量的LPS通过miR-155/miR-21影响Kupffer细胞,作为反应,NF-κB信号的激活及其下游效应的改变。
miR-155和TNF-α
在两个单独的实验中测定了LPS和酒精对Kupffer细胞TNF-α生成的上调作用:一个实验中仅增加LPS,另一个实验是仅增加乙醇暴露。在这两个实验中,常驻巨噬细胞产生的TNF-α增加。三级实验也证明miR-155是乙醇和LPS上调之间的桥梁步骤。在这个实验中,miR-155诱导的细胞比没有过度暴露miR-155的对照细胞产生更多的TNF-α。尽管未引入脂多糖,但脂多糖水平也较高。由此得出结论,miR-155直接参与LPS诱导的TNF-α生成,而非乙醇31然而,LPS对Kupffer细胞的作用达到饱和点后,酒精诱导的miR-155对LPS刺激后TNF-α的生成不再有任何显著影响31.
miR-155和NF-κB
研究表明,miR-155的抑制作用与NF-κB抑制剂有关。NF-κB抑制剂已被证明能介导Kupffer细胞miR-155的上调31此外,NF-κB被慢性乙醇暴露和LPS刺激激活42,71这导致研究证明miR-155受NF-κB调节72NF-κB是一种异二聚体转录因子,通常由p50和p65亚单位组成,是酒精性肝损伤期间各种炎症和免疫反应的多效性调节因子。在未激活的条件下,p50/p65二聚体被隔离在细胞质中,与抑制剂IκB结合,阻止转运到细胞核。在各种刺激下,IκB迅速降解,激活NF-κB。NF-κB的活性形式迅速转位到细胞核,与各种基因启动子/增强子区域的一致序列结合,促进其转录73在长期酒精治疗中,p65/p50和p50/p50的NF-κB核结合活性增加,与LPS诱导的NF-кB活化增加相同。在MG-132或Bay11-1782抑制NF-κB的实验中,证实了NFκB和LPS的激活关系。NF-κB的抑制降低了乙醇、LPS和乙醇+LPS处理的巨噬细胞中的miR-155。这就得出结论,NF-κB确实是miR-155在酒精诱导中表达的介质31.
miRNA和内毒素改变通透性
除乙醇外,肠内毒素通透性的另一个调节因子是miRNA。研究发现,miRNA以与乙醇类似的方式增加肠腔的通透性。然而,miRNA通过对闭塞带1(ZO-1)蛋白产生负面影响来诱导肠腔通透性。ZO-1蛋白是确保肠腔对内毒素的渗透性反应的关键成分。就像酒精一样,肠腔的通透性导致对内毒素的更高吸收,这些内毒素随后被输送到肝脏进行解毒。在这个过程中,这些内毒素的解毒会导致LPS-TNF-α链式反应,从而导致酒精性肝病。除了对肠道通透性的影响外,乙醇还上调了导致内腔通透性降低的miRNA74一种特殊的miRNA,miR-212,已被确定为通过ZO-1蛋白导致肠腔紧密连接丢失的促因。另一个miRNA链被确定为内毒素通透性的关键促因是miR-122a,它也与ZO-1蛋白相互作用以调节内腔通透性6这些发现表明,miRNA在酒精性肝病的发展中有不止一个作用,首先是作为激活炎症性瘢痕剂的内毒素的介体,然后是作为肝巨噬细胞中这种特定信号的介体。
微RNA与肝细胞存活
一些研究已经证明了肝损伤后成人细胞(包括肝细胞和胆管细胞)的再生和重塑潜力,新的研究表明肝星状细胞(HSC)和其他细胞类型的可塑性75–78ALD期间内毒素的持续存在不仅激活肝脏的肝脏免疫细胞,而且影响其他肝细胞(肝细胞、胆管细胞和HSC)的功能24,78习惯性饮酒会促进肝细胞死亡,并抑制存活的成熟肝细胞的增殖,导致慢性肝损伤。酒精性肝损伤通常伴有导管反应,其特征是门周非典型胆管细胞积聚。与许多其他类型的慢性肝病一样79在酒精性肝病中,这种导管反应的强度与肝损伤的严重程度密切相关80胆管细胞和HSC被定义为ALD中具有启动再生过程和肝纤维化能力的独特亚群78虽然已有证据支持肝实质和HSC在ALD中的作用,但胆管细胞的身份和功能仍然是一个谜。存活和重塑活动的变化可用于表征某些肝脏再生和纤维化过程。这项新的创新技术可以从功能上表征特定肝细胞的重塑特性,最终可能为ALD患者开发新的诊断和治疗策略。
ALD的主要病理生理特征是脂质代谢改变和肝细胞凋亡。最近的研究结果表明miR-122(一种肝脏特异性miRNA)显著下调81,82miR-34a是细胞凋亡的关键调节因子83,在喂食乙醇的小鼠肝脏中(). 最近的几份报告表明,miRNAs miR-122和miR-34a是脂肪性肝炎中最常见的两种失调miRNAs84,85血清/血浆miR-122与酒精引起的肝损伤中丙氨酸氨基转移酶升高相关,并且主要与胞外体富集分数相关86miR-122和miR-34a在酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝中均异常表达52,84,87Sirtuin(无声交配型信息调节2同源物)1(SIRT1)是miR-34a的一个经证实的靶蛋白88SIRT1在保护细胞免受细胞氧化应激和DNA损伤方面发挥着重要作用89,90特异性miRNA通过下调SIRT1促进乙醇诱导的肝细胞脂肪堆积91一旦SIRT1被激活,SIRT1将去乙酰化组蛋白和组蛋白甲基转移酶。SIRT1还可脱乙酰化多种非组蛋白靶蛋白,如p53、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、FoxO转录因子、Ku70、NF-kB和PGC-1α。SIRT1介导的Lys382去乙酰化降低p53介导的转录激活,并降低下游蛋白如p21和PUMA水平92因此,SIRT1通过抑制凋亡来调节细胞在严重应激期间的存活。miR-34a的过度表达降低了SIRT1的表达,导致乙酰化p53水平和p53靶点(如p21和PUMA)增加93在表达p53的癌细胞中,miR-34a过表达也会诱导凋亡,但不表达p53。这些结果表明,miR-34a诱导细胞凋亡的部分途径包括:miR-34a-SIRT1-p53乙酰化93然而,miR-34a的其他相关靶点仍有待确定。基于荧光素酶的分析表明E2F3、Foxp1、Notch1受体及其配体Delta1是潜在的miR-34a靶点94.
酒精性肝损伤中microRNA介导的生存机制。miR-34a是抗凋亡的,而miR-122,即肝脏特异性miRNA,是细胞周期的关键调节因子。在正常肝脏中,miR-34a和miR-122协同抑制基因表达,以平衡细胞生存和增殖。乙醇增加肝脏中的miR-34a并降低miR-122,导致靶基因表达改变,从而增加细胞增殖,同时保持整体凋亡抵抗。
循环miRNAs作为ALD的稳定血基标记物
开发用于检测和监测ALD的微创检测可以大大降低酒精性肝损伤的全球健康负担。miRNA图谱可以揭示暴露于乙醇的小鼠肝脏中与吸烟相关的影响,这一证明为使用miRNA评估ALD过程的早期步骤提供了一个基本依据,也可以推广到其他风险因素。然而,最有用的方法是在酒精性肝损伤临床表现出来之前,区分血液中循环的特定生物标记物。为此,miRNAs可能成为人类ALD的有用生物标记物。事实上,在ALD患者的肝脏和血液中都发现了被解除管制的miRNAs。由于miRNA的先天稳定性,可以通过血液检测ALD。miRNAs以稳定的形式存在于血浆中,使其成为检测ALD和其他肝脏疾病的可行生物标记物95,96最近的初步研究证明,血清或血浆中miRNA表达的分析可能是一种很有希望的血源性诊断人类ALD和其他肝病的方法86,97这些研究表明,通过量化血清/血浆中循环的miRNAs,可以揭示乙醇摄入的影响。进一步的研究将探索循环miRNAs作为稳定的基于血液的诊断标记和预测人类ALD进展的可能性。
结论
miRNA在酒精性肝病中的作用无疑是至关重要的。在过去十年和近年来,它在酒精性肝病中的作用引起了人们的极大兴趣。miRNA与酒精的相互作用在酒精诱导的肝瘢痕形成和纤维化中起着关键作用。当然,导致酒精性肝病的过程始于饮酒和接触酒精。乙醇暴露小鼠的肠腔通透性丧失。这种通透性改变以两种方式发生:第一,乙醇直接影响肠腔的通透性,使内毒素进入肝脏。其次,乙醇在肠腔中诱导miRNA(一种已知的肠道通透性介质)发挥同样的作用。一旦进入肝脏,这些由革兰氏阴性细菌和病原体分解产生的内毒素就会沿着一条导致肝脏炎症的途径。肠腔吸入的内毒素进入肝脏,在那里解毒。革兰氏阴性菌内毒素的解毒释放出一种称为LPS的内毒素,这种内毒素一旦进入肝脏,就会附着在TLR4上,并启动导致酒精性肝病的途径。Toll样受体4不由MD-2和CD14这两个共受体组成,但这两个蛋白可能是细胞对LPS刺激反应所必需的通过TLR4。这两种受体都被确定为酒精性肝病的关键成分,因为它们的失活都有助于减少疾病的进展。TLR4激活后,肝脏中的巨噬细胞释放炎症因子,导致肝纤维化。一种特别有趣的巨噬细胞是Kupffer细胞,它释放TNF-α。miRNA参与这一过程的作用包括调节LPS向TLR4受体的信号传导。是miRNA调节库普弗细胞中LPS的接收。众所周知,乙醇调节肝脏中的miRNA(miR-122和miR-34a),这有助于肝细胞/HSC存活。因此,随着饮酒量的增加,肝脏中的miRNA也会增加,因此LPS和TNF-α的释放也会增加。尽管仍在研究中,但微小RNA已被证明在酒精性肝病的发展、病因和调节中发挥着关键作用。
致谢
这项工作得到了美国退伍军人事务部(Department of Veteran’s Affairs)荣誉评审奖(Merit Review Award)和斯科特·怀特(Scott&White)研究导师奖(F.Meng)、弗吉尼亚州(VA)荣誉评审奖项(G.Alpini)和弗吉尼亚州CD-2奖(H.Francis and s.Glaser)的支持。