国际分子科学杂志。2016年4月；17(4): 437.
的过度表达TRPV3型非小细胞肺癌与肿瘤进展的关系
,1,2,† ,三，† ,4 ,5 ,6 ,三 ,三 ,三，*和三，*
William Chi-shing Cho，学术编辑
2贵州医科大学第三附属医院科研部，都匀558000
†这些作者为这项工作做出了同等贡献。
接收日期：2016年2月14日；2016年3月11日接受。
版权©2016作者版权所有；持牌人MDPI，瑞士巴塞尔。 摘要
（1） 背景：瞬时受体电位香草醛3(TRPV3型)是Ca的TRP通道家族成员2个+-渗透通道。某些TRP通道的蛋白在癌细胞中高度表达。本研究旨在评估TRPV3在非小细胞肺癌（NSCLC）中的临床意义和生物学功能；（2） 方法：采用免疫组织化学方法检测TRPV3型在非小细胞肺癌组织和邻近的非癌肺组织中。Western blot用于检测TRPV3型,CaMKII公司,p-CaMKII型,周期A,周期D,周期N1,CDK2型,川东北4、和第27页.使用小干扰RNA耗尽TRPV3型表达式。使用激光扫描共聚焦显微镜测量细胞内钙浓度（[Ca2个+]我)。流式细胞术分析细胞周期；（3） 结果：TRPV3型在96例肺癌中有65例（67.7%）过度表达，并与分化相关(第页=0.001）和TNM阶段(第页= 0.004). 重要的是，TRPV3型表达与总生存期短有关。此外，阻止或击倒TRPV3型能抑制肺癌细胞增殖。此外，TRPV3型抑制作用可降低[Ca2个+]我并在G1/S边界处阻滞细胞周期。进一步的结果表明TRPV3型抑制减少了对CaMKII,周期A,周期D1,CyclinE公司、和增加了第27页水平；（4） 结论：我们的发现表明TRPV3型在非小细胞肺癌中过度表达，并与肺癌进展相关。TRPV3型激活能促进肺癌细胞的增殖。TRPV3型可能是非小细胞肺癌潜在的伴发药物靶点。
关键词：非小细胞肺癌，TRPV3，增殖，[Ca2个+]我，细胞周期
1.简介
肺癌是世界上导致癌症死亡的主要原因[1]. 肺癌有两种主要类型：非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌。大多数确诊的肺癌病例为非小细胞肺癌（80%至85%）[2]. 虽然已经建立了手术切除、化疗和放射治疗，但肺癌患者的五年生存率仍然普遍较低[三,4,5]. 最近的研究表明，常规治疗可能已达到治疗平台，因此迫切需要阐明肺癌生物学的发病机制并探索新的治疗靶点。
瞬时受体电位（TRP）通道属于一大类非选择性阳离子通道[6,7]. TRP通道作为感觉信号的重要介质，对细胞功能和信号通路具有重要影响[8]. 最近，将TRP渠道药物发现工作扩展到新的疾病领域的工作量激增，如焦虑、哮喘、心肌肥厚、肥胖以及癌症和代谢紊乱[9]. 瞬时受体电位香草醛3(TRPV3型)是Ca的TRP通道家族的成员2个+-渗透通道，位于染色体17p13上，在皮肤、舌头、背根神经节、三叉神经节、脊髓和大脑中表达[6].TRPV3型在皮肤屏障形成、毛发生长、伤口愈合、角质形成细胞成熟、皮肤疼痛、瘙痒和温度感觉方面也有功能[10]. 以前的报告表明TRPV3型基因敲除小鼠少于野生型小鼠[11]、和TRPV3型上调也被证明与结直肠癌发生的高风险相关[12].
蛋白质的表达TRPV3型非小细胞肺癌及其与临床病理因素的关系尚未研究。此外TRPV3型肺癌中的细胞尚不清楚。为了解决上述问题，采用免疫组化染色检测TRPV3型在非小细胞肺癌组织中。此外TRPV3型对肺癌细胞的增殖能力也进行了研究。
2.结果
2.1、。TRPV3在人非小细胞肺癌中的表达及其与临床因素的关系
我们进行了调查TRPV3型免疫组化检测96例非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中的表达。如上所述，TRPV3型免疫反应分为阴性和阳性。积极的TRPV3型67.7%（65/96）的患者出现染色；消极的TRPV3型32.3%（31/96）的患者出现染色。这个TRPV3型蛋白质主要在细胞膜和细胞质中表达(A–F）。正常肺组织中，只有40%（8/20）的病例有膜和细胞质表达。我们分析了TRPV3型表达水平和临床病理因素。如中所述,TRPV3型表达与分化显著相关(第页=0.001）和TNM阶段(第页= 0.004). 在TRPV3型根据年龄、性别、吸烟、组织学和血管淋巴管侵犯情况观察病情。Western blot分析结果与免疫组化结果相一致。蛋白质的表达TRPV3型在非小细胞肺癌组织中显著高于癌旁组织(G） ●●●●。我们分析了TRPV3型表达为总生存率，并发现TRPV3型非小细胞肺癌阳性患者TRPV3型阴性非小细胞肺癌(第页= 0.020).
的表达式TRPV3型在人类NSCLCS中。免疫组织化学染色TRPV3型在癌组织及其相应的癌旁组织中进行了检测。棕色颗粒代表积极信号。的阳性表达位点TRPV3型主要定位于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。TRPV3型癌旁组织（Para）呈阴性表达(A类,B类)、和TRPV3型肺鳞状细胞癌（Sq）阳性表达(C类,D类)和肺腺癌(E类,F类)。(A类,C类,E类) 200×; 和(B类,D类,F类)400×。的表达式TRPV3型肺内Ad、肺内Sq和Para(G公司)Western blot检测。每个条形代表三个独立实验的平均值±SD。**
第页与癌旁组织相比P<0.01。
卡普兰-迈耶生存曲线。根据Kaplan–Meier曲线计算cum存活率TRPV3型表达式状态(第页=0.020）。通过log-rank比较计算统计差异。
表1
协会TRPV3型非小细胞肺癌的表达与临床和病理因素。
| 特征 | 患者 | TRPV3型阳性（%） | TRPV3型负（%） | 第页 |
|---|
| 年龄（岁） | | | | |
| <60 | 48 | 30（62.5%） | 18 (37.5%) | 0.275 |
| ≥60 | 48 | 35 (72.9%) | 13 (27.1%) | |
| 性别 | | | | |
| 男性 | 55 | 38 (69.1%) | 17 (30.9%) | 0.737 |
| 女性 | 41 | 27 (65.9%) | 14 (34.1%) | |
| 烟雾 | | | | |
| 是的 | 49 | 33 (67.3%) | 16 (32.7%) | 0.938 |
| 不 | 47 | 32 (68.1%) | 15 (31.9%) | |
| 组织学 | | | | |
| 腺癌 | 56 | 35 (62.5%) | 21 (37.5%) | 0.197 |
| 鳞状细胞 | 40 | 30 (75.0%) | 10 (25.0%) | |
| 癌分化 | |
| 嗯 | 45 | 23人（51.1%） | 22 (48.9%) | 0.001 * |
| 中等-较差 | 51 | 42人（82.4%） | 9 (17.6%) | |
| TNM阶段 | | | | |
| 一/二 | 61 | 35 (57.4%) | 26 (42.6%) | 0.004 * |
| 三/四 | 35 | 30 (85.7%) | 5 (14.3%) | |
| 血管增生侵袭 | | | | |
| 不 | 54 | 34 (63.0%) | 20（37.0%） | 0.260 |
| 是的 | 42 | 31 (73.8%) | 11 (26.2%) | |
2.2。激活TRPV3促进肺癌细胞增殖
为了探索TRPV3型在肺癌中，我们使用钌红（RuR，一种广谱钙通道阻滞剂）和siRNA技术来阻断和敲除TRPV3型在A549和H1299细胞系中表达。采用MTT法检测RuR对A549和H1299细胞的作用(A） ●●●●。RuR（1–40μM）剂量依赖性降低A549和H1299细胞活力。TRPV3型-特异性siRNA显著降低了TRPV3型通过Western blot分析在siRNA处理24小时后(B） ●●●●。我们的细胞增殖分析表明TRPV3型A549和H1299细胞的增殖率显著降低(第页< 0.05) (C） ●●●●。我们使用了一种独立的方法，即集落形成分析，来验证TRPV3型对肺癌细胞的抑制作用。结果表明TRPV3型与对照细胞相比，A549和H1299细胞的集落形成能力明显降低(D） ●●●●。这些研究表明TRPV3型调节肺癌细胞的增殖。
影响TRPV3型对肺癌细胞增殖的影响。通过MTT分析24小时后RuR（1–40µM）对A549和H1299细胞的影响(A类); 数据表示为三倍的平均值±SD。*
第页与对照组相比<0.05；**
第页与对照组相比<0.01。A549和H1299细胞用TRPV3型-24小时特异性siRNATRPV3型A549和H1299细胞的耗尽效率(B类); 用20µM RuR或TRPV3型-MTT检测特异性siRNA(C类)和菌落形成分析(D类)。数据表示为三份数据的平均值±SD。##
第页与对照组相比<0.01；**
第页与NC组相比<0.01。
2.3. 抑制TRPV3诱导[Ca的变化2个+]我在肺癌细胞中
从激光扫描共聚焦显微镜拍摄的荧光强度来看，我们发现TRPV3型显著降低[Ca2个+]我肺癌细胞(A） ●●●●。钙/钙调素依赖性激酶II(CaMKII公司)已知被细胞内钙激活2个+浓度[13]. 磷酸钙MKII(p-CaMKII型)蛋白质水平用Western blot检测。我们发现阻断或敲低TRPV3会降低p-CaMKII型(B） 。
[Ca的测量2个+]我在A549和H1299细胞中。荧光强度（单位：[Ca）2个+]我用激光扫描共聚焦显微镜记录不同处理（400×）(A类); 蛋白质印迹分析p-CaMKII型A549和H1299细胞中的表达(B类)。所有数据均表示为三倍的平均值±SD。#
第页与对照组相比<0.05；##
第页与对照组相比，P<0.01；*
第页与NC组相比<0.05；**
第页与NC组相比<0.01。
2.4. 抑制TRPV3诱导肺癌细胞G1/S边界细胞周期阻滞
进一步探讨TRPV3型激活促进NSCLC细胞增殖，在A549和H1299细胞中进行细胞周期分析。细胞周期分析表明，在阻断或在TRPV3型敲除细胞后，S期细胞的百分率明显低于对照细胞，G1期细胞的百分比增加(A） ●●●●。这些结果表明TRPV3型耗尽诱导细胞周期阻滞在G1/S边界，并进一步抑制细胞周期进展。为了研究细胞周期阻滞的机制，我们测试了TRPV3型阻塞或击倒周期A,周期D1,CyclinE公司,CDK2型,川东北4、和第27页水平。如所示B、 蛋白质印迹分析显示TRPV3型降低了周期A,周期D1,CyclinE公司、和增加了第27页表达式。总之，这些结果表明抑制TRPV3型表达诱导G1-S过渡期细胞周期阻滞并抑制A549和H1299肺癌细胞生长。
影响TRPV3型A549和H1299细胞周期动力学。细胞周期相由碘化丙啶（PI）掺入测定。细胞在电镀后24小时通过流式细胞仪进行分析(A类); 对一系列细胞周期相关因子的Western blot分析表明，蛋白质水平发生了变化(B类)。所有数据均表示为三倍的平均值±SD。#
第页与对照组相比<0.05；*
第页与NC组相比<0.05。
3.讨论
在本研究中TRPV3型在人非小细胞肺癌中检测到该蛋白。实验结果表明TRPV3型非小细胞肺癌组织中的蛋白质含量显著高于邻近正常肺组织。两者之间存在密切的相关性TRPV3型上调和TNM分期和分化。此外，我们证明了TRPV3型上调也与非小细胞肺癌患者的生存率较低相关。
研究表明，其他一些TRP通道在癌细胞中高度表达，蛋白表达量随着正常细胞、致瘤细胞和转移细胞的进展而变化，例如TRPM1型,TRPM8号机组、和TRPV6型[14,15,16,17].TRPV1型,TRPC1号机组,TRPC6公司、和TRPM5号机组在癌症组织中也增加，但还需要进一步的实验来研究其潜在机制[18,19,20]. 验证的潜在作用TRPV3型在肺癌发展过程中，我们使用TRPV通道阻滞剂RuR和siRNA来抑制或击倒TRPV3型在A549和H1299细胞系中表达。我们发现A549和H1299细胞的增殖能力和集落形成能力在TRPV3型阻挡或击倒。这些结果表明TRPV3型表达与肺癌细胞增殖显著相关。高TRPV3型蛋白表达可促进肺癌细胞的增殖。
TRP通道在癌症进展中的作用可能涉及细胞内Ca的变化2个+.TRPV3型是TRP家族的成员，我们发现TRPV3型显著降低[Ca2个+]我激光扫描共聚焦显微镜检测A549和H1299肺癌细胞。CaMKII公司，作为钙的一般积分器2个+信号，在钙结合时激活2个+/钙调素(CaM公司)经历了自磷酸化[21]. 如前所述，CaMKII公司激活在肿瘤中经常发生，包括卵巢癌、结肠腺癌和许多肿瘤细胞系，许多是调节细胞内钙的因素2个+浓度[22,23]. 我们的结果表明TRPV3型激活增加细胞内钙2个+它还促进了CaMKII公司.
钙信号的一个功能是促进G1/S转变时DNA合成的启动[24]. 最近的研究表明CaMKII公司在控制细胞周期进展和细胞增殖中发挥重要作用[25,26]. 研究表明CaMKII公司减少周期D1并增强了第27页具有CDK2型导致成纤维细胞G1期阻滞[27]. 因此，我们利用细胞周期分析发现TRPV3型与对照细胞相比，阻断或敲除细胞的G1期水平较高，S期水平较低。TRPV3型阻断或敲低抑制了细胞周期进程中G1至S的转变，这可能解释了TRPV3型对肺癌细胞增殖的影响。找出TRPV3型在细胞周期调控方面，我们研究了TRPV3型阻断或敲低许多G1至S过渡相关分子。我们分析了周期A,周期D1,CyclinE公司,CDK2型,川东北4、和第27页。我们发现周期A,周期D1、和CyclinE公司之后减少TRPV3型阻挡或击倒，而第27页表达增强。周期A细胞需要通过S期[28].周期D1在多种癌症中过度表达，并与癌细胞增殖相关。它通过G1/S限制点调节细胞周期进程影响细胞增殖[29,30,31].第27页被称为肿瘤抑制蛋白，有助于抑制激酶活性并阻止细胞周期从G1期向S期的进展[32,33]. 这些数据表明TRPV3型在A549和H1299肺癌细胞的细胞周期控制中发挥了重要作用。
越来越多的证据表明，一些癌症的发展涉及离子通道异常，尤其是前列腺，其中TRP家族的几个非电压依赖性阳离子通道被证明是钙稳态的关键因素[34]. 例如，TRPV2型,TRPV6型、和TRPM8号机组在正常前列腺和前列腺癌中有差异表达[35,36,37]. 一些作者认为，TRP通道参与了癌细胞的增殖以及对化疗药物的耐药性[38,39,40]. 我们的数据表明TRPV3型蛋白表达可促进A549和H1299肺癌细胞的增殖。然而TRPV3型对肺癌细胞增殖的研究应在未来的研究中进行。
总之，数据表明TRPV3型表达与非小细胞肺癌进展相关。高TRPV3型蛋白表达可促进肺癌细胞的增殖。TRPV3型抑制作用减弱[Ca2个+]我肺癌细胞和细胞周期阻滞在G1/S边界。据报道，TRPV3型表达是一种预后标志物，作为一种非选择性阳离子通道，是治疗晚期非小细胞肺癌的新治疗策略的一个有希望的靶点。
4.材料和方法
4.1. 患者群体和临床标本
哈尔滨医科大学伦理委员会批准了这项研究。2005-2008年在大庆总医院集团油田总医院采集了96例非小细胞肺癌标本及相应的正常肺组织。术前患者未接受化疗或放疗。组织用福尔马林固定，石蜡包埋。参照2004年WHO分类标准对组织学类型和分化水平进行分类，并根据2009年UICC TNM分类对TNM（T，肿瘤大小；N，区域淋巴结；M，转移）进行分类。相关临床和病理特征()从患者档案和/或通过与患者或其家人的电话调查收集。
4.2. 免疫组织化学（IHC）和评分
将石蜡包埋的组织切成5μm的切片，放在载玻片上，并在70°C下烘烤2 h。用二甲苯将切片脱蜡并重新水化。他们在微波炉中使用柠檬酸盐缓冲液（10 mM，pH 6.0）进行热诱导抗原回收8分钟，然后冷却至室温。将切片与3%过氧化氢在甲醇中孵育以去除内源性过氧化物酶活性，然后用正常血清处理以阻断非特异性结合。然后将载玻片与抗-TRPV3型抗体（1:100 Abcam，Cambridge，MA，USA）在4°C下过夜。作为染色过程的阴性对照，用PBS替换一级抗体。第二级抗体来自SP试剂盒（中国北京中山生物技术公司）。清洗后，用生物素化抗兔第二抗体处理组织切片15分钟，然后用链霉亲和素-辣根过氧化物酶复合物进一步孵育15分钟。切片用二氨基联苯胺染色，然后用苏木精复染。两位病理学家对染色切片进行了独立审查和评分。将比例（0：无；1：<25%；2：25%–50%；3：51%–75%；和4：>75%）和强度（0：没有；1：较弱；2：中等；和3：较强）得分相加，得出总分，范围为0至7。根据总得分将标本分为两组：（1）阴性表达，<4分；（2） 阳性表达，4-7分。
4.3. 细胞培养
人类肺癌细胞系A549和H1299来自美国类型培养物收集中心（美国弗吉尼亚州马纳萨斯）。细胞在含有10%胎牛血清（Invitrogen）、100 IU/mL青霉素（Sigma，St.Louis，MO，USA）和100μg/mL链霉素（Sigram）的DMEM培养基（Invit罗gen，Carlsbad，CA，USA。
4.4. 蛋白质印迹分析
在裂解缓冲液中提取组织和细胞系的总蛋白（Thermo Fisher Scientific，Rockford，IL，USA），并使用Bradford方法进行定量。使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离等量提取的蛋白质（60μg），然后转移到聚偏氟乙烯膜上。将膜与以下抗体在4°C下孵育过夜-TRPV3型（1:100，美国马萨诸塞州剑桥市Abcam），CaMK-II公司(1:1000),p-CaMK-II(1:1000),周期A(1:1000),周期D1(1:1000),细胞周期蛋白E(1:1000),CDK2型(1:1000),川东北4(1:1000),第27页（1:1000）（细胞信号技术，波士顿，马萨诸塞州，美国），β-肌动蛋白（1:2000，美国加利福尼亚州圣克鲁斯圣克鲁斯生物技术公司）。在37°C下与过氧化物酶偶联抗鼠/兔IgG孵育2 h后，使用ECL（Thermo Fisher Scientific）观察蛋白质条带，并使用生物成像系统（UVP Inc.，加利福尼亚州高地）检测蛋白质条带。参照β-肌动蛋白的量计算蛋白质的相对量。
4.5. 小干扰RNA对TRPV3表达的抑制作用
电池（1×104)使用X-tremeGENE siRNA转染试剂（德国彭茨堡罗氏）转染，应用两种序列验证和敲除排列的siRNA：TRPV3型-siRNA（20 nM，每个，5′-ACUGCCUGAGAAAGCU UTT-3′和5′-AAGCUUUCAUAGGCAGGUTT-3’）符合制造商的说明（中国上海基因制药有限公司）。治疗96小时后，将细胞分裂并再次感染siRNA，以确保有效TRPV3型击倒。商业GAPDH-siRNA作为阳性对照（中国上海基因制药有限公司）。使用绿色荧光蛋白标记的阴性对照siRNA（NCsiRNA）（GenePharma Co.，Ltd.，Shanghai，China）作为转染效率对照和实验的阴性对照。24小时后从细胞中提取蛋白质并通过Western blot进行评估。
4.6. 细胞活性测定
细胞在含有10%FBS的培养基中以每孔约2000个细胞的速度放置在96个平板中，并通过MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化铵）测定测定细胞活力。简单地说，将20μL 5 mg/mL MTT（Sigma）溶液添加到每个孔中，并在37°C下培养4小时，然后从每个孔中取出培养基，并将所得的MTT-formazan溶解在150 mL DMSO中。使用490 nm的测试波长分光光度法对结果进行量化。
4.7. 菌落形成分析
电池（0.3×10三)将种子接种到6cm的培养皿中，并保存在生长培养基中。两周后，用80%甲醇固定细胞，Giemsa染色15分钟。记录50个以上细胞的菌落数。对殖民地进行拍照和计数。
4.8. 细胞周期分析
将细胞（500000）接种到6 cm的组织培养板中并孵育24 h。在用指示量的siRNA或RuR处理后，收集细胞并在75%乙醇中固定24 h，用PBS洗涤，并用添加RNase A的PBS中的5 mg/mL碘化丙啶（PI）染色（美国印第安纳波利斯州罗氏）在室温下保持30分钟。通过流式细胞术分析DNA含量（美国新泽西州富兰克林湖市BD生物科学公司FACSAriaI）。
4.9. [Ca的测量2个+]我
将细胞与含有0.03%Pluronic F-127的10μM Fluo-3/AM（中国北京，Molecular Probes，acetoxymethyl ester form）工作液在37°C下孵育40分钟。随后，用工作液清洗细胞两次，以消除细胞外的Fluo-3/4AM2个+]我通过荧光强度（FI）进行鉴定。用激光扫描共聚焦显微镜（日本东京奥林巴斯）检测这些细胞的FI，488 nm激发，530 nm发射5分钟。在10个随机选择的细胞中收集FI，以计算平均FI。
4.10. 统计分析
所有分析均使用适用于Windows的SPSS 16.0版。学生的t吨-测试用于比较其他数据。在这些亚组之间，用卡方法比较染色阳性率。生存率分析采用Kaplan–Meier曲线，差异通过log-rank检验揭示。第页<0.05被认为具有统计学意义，并且第页更强烈地认为<0.01。
致谢
本研究得到了黑龙江省自然科学基金（批准号：H201413）和哈尔滨医科大学大庆分校种子基金（批准号：DQ201302）的资助。
作者贡献
李晓雷、曹永刚和孙红丽设计了这项研究并撰写了论文。李白燕和李慧峰进行了病例收集。李晓蕾、张千慧、范凯和齐汉平进行了研究。李晓雷和曹永刚分析了数据。孙红丽和张倩慧编辑了这篇论文。所有作者阅读并批准了最终手稿。
工具书类
1Ferlay J.、Shin H.R.、Bray F.、Forman D.、Mathers C.、Parkin D.M.2008年全球癌症负担评估：GLOBOCAN 2008。国际癌症杂志。2010;127:2893–2917. doi:10.1002/ijc.25516。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 2Jemal A.、Bray F.、Center M.M.、Ferlay J.、Ward E.、Forman D.全球癌症统计。加州癌症杂志临床。2011;61:69–90. doi:10.3322/caac.20107。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 三。Schiller J.H.、Harrington D.、Belani C.P.、Langer C.、Sandler A.、Krook J.、Zhu J.和Johnson D.H.晚期非小细胞肺癌四种化疗方案的比较。北英格兰。医学杂志。2002;346:92–98. doi:10.1056/NEJMoa011954。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 4Cufer T.、Ovcaricek T.、O'Brien M.E.晚期非小细胞肺癌的系统治疗：过去5年的主要进展。《欧洲癌症杂志》。2013;49:1216–1225. doi:10.1016/j.ejca.2012.11.021。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 5Sgambato A.、Casaluce F.、Maione P.、Rossi A.、Sacco P.C.、Panzone F.，Ciardiello F.、Gridelli C.小细胞肺癌的医疗：最新进展。专家操作。药物治疗。2013;14:2019–2031. doi:10.1517/14656566.2013.823401。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 6Xu H.、Ramse I.S.、Kotecha S.A.、Moran M.M.、Chong J.A.、Lawson D.、Ge P.、Lilly J.、Silos-Santiago I.、Xie Y.等人。TRPV3是一种钙渗透温度敏感阳离子通道。自然。2002;418:181–186. doi:10.1038/nature00882。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 7Venkatachalam K.、Montell C.TRP频道。每年。生物化学评论。2007;76:387–417. doi:10.1146/annurev.biochem.75.103004.142819。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 8Kaneko Y.，Szallasi A.瞬态受体电位（TRP）通道：临床观点。英国药理学杂志。2014;10:2474–2507. doi:10.1111/bph.12414。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 9Adrian T.、Billeter M.D.、Jason L.、Hellmann A.B.、Hiram C.、Polk J.瞬态受体电位离子通道。Ann.外科。2014;259:229–235.[公共医学][谷歌学者] 10Borbiro I.、Lisztes E.、Toth B.I.、Czifra G.、Olah A.、Szolosi A.G.、Szentandrassy N.、Nanasi P.P.、Peter Z.、Paus R.等。瞬时受体电位香草醛-3的激活抑制人发生长。J.投资。皮肤病。2011;8:1605–1614. doi:10.1038/jid.201.122。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 11Reona A.、Bing W.、Tomoka T.、Hiroshi M.、Makiko K.、Yasuyoshi O.、Jingqi Z.、Atsuko M.，Makoto S.、Yoshio Y.等。热敏TRPV3通道有助于口腔上皮的快速伤口愈合。美国财务会计准则委员会J。2015;29:182–192.[公共医学][谷歌学者] 12Hoeft B.、Linseisen J.、Beckmann L.、Muller Decker K.、Canzian F.、Husing A.、Kaaks R.、Vogel U.脂肪酸代谢相关基因的多态性与结直肠癌风险相关。致癌作用。2010;31:466–472. doi:10.1093/carcin/bgp325。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 13Pitt G.S.Calmodulin和CaMKII作为心脏离子通道的分子开关。心血管疾病。物件。2007;4：641–647。doi:10.1016/j.ccardires.2006.10.019。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 14Prevarskaya N.、Skryma R.、Bidaux G.、Shuba Y.前列腺癌细胞死亡和分化中的离子通道。细胞死亡不同。2007;14:1295–1304. doi:10.1038/sj.cdd.4402162。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 15博丁M.TRP蛋白与癌症。单元格。信号。2007;19:617–624. doi:10.1016/j.cellsig.2006.08.012。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 16Vanden-Abeele F.、Shuba Y.、Roudbaraki M.、Lemonnier L.、Vanoverberghe K.、Mariot P.、Skryma R.、Prevarskaya N.门店经营的Ca2个+前列腺癌上皮细胞中的通道：功能、调节和致癌作用。细胞钙。2003;33:357–373. doi:10.1016/S0143-4160（03）00049-6。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 17Bodding M.、Fecher-Tost C.、Flockerzi V.Store-operated Ca公司2个+淋巴结前列腺癌细胞中的电流和TRPV6通道。生物学杂志。化学。2003;278:50872–50879. doi:10.1074/jbc。M308800200。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 18Domotor A.、Peidl Z.、Vincze A.、Hunyady B.、Szolcsanyi J.、Kereskay L.、Szekeres G.、Mozsik G.香草醛受体、降钙素基因相关肽和P物质在不同胃肠道疾病患者胃肠粘膜中的免疫组化分布。炎症药理学。2005;13:161–177. doi:10.1163/156856005774423737。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 19Thebault S.、Flourakis M.、Vanoverberghe K.、Vandermoere F.、Roudbaraki M.、Lehen’kyi V.、Slomianny C.、Beck B.、Mariot P.、Bonnal L.瞬时受体电位通道在钙离子通道中的差异作用2个+前列腺癌上皮细胞的进入和增殖。癌症研究。2006;66:2038–2047. doi:10.1158/0008-5472.CAN-05-0376。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 20Prawitt D.、Enklaar T.、Klemm G.、Gartner B.、Spangenberg C.、Winterpacht A.、Higgins M.、Pelletier J.、Zabel B.mTR1的鉴定和特性，mTR1是一个与melastatic（MLSN1）同源的新基因，TRP基因家族位于染色体11p15.5上的BWS-WT2关键区域，显示等位基因特异性表达。嗯，分子遗传学。2000;9:203–216. doi:10.1093/hmg/9.2.203。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 21Schworer C.M.、Colbran R.J.、Soderling T.R.钙的可逆生成2个+-钙的独立形式2个+（钙调素）依赖性蛋白激酶II通过自磷酸化机制。生物学杂志。化学。1986;261:8581–8584.[公共医学][谷歌学者] 22Ruciano M.R.、Salzano M.、Monaco S.、Sapio M.R.和Illario M.、de Falco V.、Santoro M.和Campiglia P.、Pastore L.、Fenzi G.等2个+/钙调蛋白依赖性激酶II在乳头状甲状腺癌（PTC）中被激活，并介导RET/PTC刺激的细胞增殖。恩多克。相关。癌症。2010;1:113–123. doi:10.177/ERC-09-0214。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 23Monaco S.、Illario M.、Rusciano M.R.、Gragnaniello G.、di Spigna G.、Leggiero E.、Pastore L.、Fenzi G.、Rossi G.、Vitale M.胰岛素通过钙-钙调蛋白依赖性激酶II刺激成纤维细胞增殖。细胞周期。2009;13:2024–2030. doi:10.4161/cc.8.13.8813。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 24Berridge M.J.钙信号传导与细胞增殖。生物论文。1995;17:491–500. doi:10.1002/bies.950170605。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 25Zayzafoon M.钙/钙调蛋白信号控制成骨细胞的生长和分化。J.细胞。生物化学。2006;97:56–70. doi:10.1002/jcb.20675。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 26Colomer J.，意味着A.R.钙的生理作用2个+/CaM依赖性蛋白激酶在健康和疾病中的级联反应。子单元。生物化学。2007;45:169–214.[公共医学][谷歌学者] 27Morris T.A.、de Lorenzo R.J.、Tombes R.M.CaMK II抑制降低了cyclinD1水平，并增强了p27kip1与Cdk2的结合，从而导致NIH 3T3细胞中G1期阻滞。实验细胞研究。1998;240:218–227. doi:10.1006/excr.1997.3925。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 28Yam C.H.、Fung T.K.、Poon R.Y.Cyclin A在细胞周期控制和癌症中的作用。单元格。分子生命科学。2002;59:1317–1326. doi:10.1007/s00018-002-8510-y。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 29Roy P.G.、Thompson A.M.Cyclin D1与乳腺癌。乳房。2006;15:718–727. doi:10.1016/j.breast.2006.02.005。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 30Ratschiller D.、Heighway J.、Gugger M.、Kappeler A.、Pirnia F.、Schmid R.A.、Borner M.M.、Betticher D.C.CyclinD1在肺癌患者支气管上皮的过度表达与吸烟有关，并预测生存率。临床杂志。昂科尔。2003;21:2085–2093. doi:10.1200/JCO.2003.03.103。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 31Keum J.S.、Kong G.、Yang S.C.、Shin D.H.、Park S.S.Cyclin D1过度表达是可切除非小细胞肺癌预后不良的指标。英国癌症杂志。1999;81:127–132. doi:10.1038/sj.bjc.6690661。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 32Chu I.M.，Hengst L.，Slingerland J.M.人类癌症中的Cdk抑制剂p27：预后潜力和与抗癌治疗的相关性。Nat.Rev.癌症。2008;8:253–267. doi:10.1038/nrc2347。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 33Lee J.，Kim S.S.p27 KIP1在肿瘤发展中的作用。实验摩尔浓度。2009;41:765–771. doi:10.3858/emm.2009.41.11.102。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 34Prevarskaya N.，Zhang L.，Barritt G.癌症中的TRP通道。生物化学。生物物理学。《学报》。2007;8:937–946. doi:10.1016/j.bbadis.2007.05.006。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 35Monet M.，Lehen’kyi V.，Gackiere F.，Firlej V.，Vandenberghe M.，Roud-baraki M.，阳离子通道TRPV2在促进前列腺癌转移和进展为雄激素抵抗中的作用。癌症研究。2010;三：1225-1235。doi:10.1158/0008-5472.CAN-09-2205。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 36Sung-Young K.、Chansik H.、Jinhong W.、Euiyong K.，Byung J.K.、Kotdaji H.、Nam-Hyuk C.、In-Gyu K.、Ju-Hong J.、Insuk S.PTEN缺乏前列腺癌细胞中TRPV6和NUMB之间的相互正调控。生物化学。生物物理学。Res.Commun公司。2014;447:192–196.[公共医学][谷歌学者] 37Bidaux G.、Flourakis M.、Thebault S.、Zholos A.、Beck B.、Gkika D.、Roudbaraki M.、Bonnal J.L.、Mauroy B.、Shuba Y.等。前列腺细胞分化状态决定了瞬时受体电位美拉司他丁成员8通道亚细胞定位和功能。临床杂志。投资。2007;117:1647–1657. doi:10.1172/JCI30168。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 38Liberati S.、Morelli M.B.、Nabissi M.、Santoni M.和Santoni G.瞬时受体电位通道的致癌和抗癌作用。货币。顶部。医药化学。2013;13:344–366. doi:10.2174/1568026611313030011。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 39Lehen'kyi V.，Prevarskaya N.致癌TRP通道。高级实验医学生物学。2011;704:929–945.[公共医学][谷歌学者] 40Monteith G.R.、Davis F.M.、Roberts-Tomson S.J.《癌症中的钙通道和钙泵：变化和后果》。生物学杂志。化学。2012;287:31666–31673. doi:10.1074/jbc。R112.343061。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者] 
