公共科学图书馆一号。 2012; 7（7）：e40301。
Ac-SDKP抗纤维化的新靶点：抑制矽肺大鼠肺肌成纤维细胞分化 , 1 , 1 , 2 , * , 2 , 2 , 2 , 2 , 2 , 1 , 三 和 2
方阳
1 河北医科大学病理学系，石家庄，中国
2 河北联合大学医学研究中心，唐山，中国
孙莹（音）
2 河北联合大学医学研究中心，唐山，中国
达雷尔·布兰
三 美国乔治亚州奥古斯塔乔治亚健康科学大学分子医学和遗传学研究所
奥利弗·艾克伯格， 编辑器
1 河北医科大学病理学系，石家庄，中国
2 河北联合大学医学研究中心，唐山，中国
三 美国乔治亚州奥古斯塔乔治亚健康科学大学分子医学和遗传学研究所
德国慕尼黑大学Helmholtz Zentrum München/路德维希·马克西米利安分校
构思和设计实验：FY。执行实验：HX YY HC ZW SL。分析数据：HX YS。 贡献的试剂/材料/分析工具：TC RW。撰写论文：DB。
2011年12月8日收到； 2012年6月4日验收。
这是一篇根据知识共享署名许可证条款分发的开放存取文章，该许可证允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是原始作者和来源得到了适当的信任。
摘要 背景 以α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达为特征的肌成纤维细胞分化是器官纤维化的关键过程，由TGF-β诱导。 在这里，我们检测了抗纤维化药物N-乙酰-芳基-天冬氨酰-赖氨酰脯氨酸（Ac-SDKP）是否可以调节TGF-β信号的诱导和肌成纤维细胞分化，这是其体内外抗纤维化机制的潜在关键成分。
方法/主要发现 体外培养大鼠肺成纤维细胞，分为4组：1）对照组； 2） 转化生长因子-β1； 3） 转化生长因子-β1+ {“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY364947”，“term_id”：“1257906561”，“term_text”：“RY364949”}} LY364947年 ; 4） 转化生长因子-β1+Ac-SDKP。 在体内研究中，使用了六组动物：1）对照组4w； 2） 矽肺4w； 3） 对照组8w； 4） 矽肺8w； 5） Ac-SDKP后处理； 6） Ac-SDKP预处理。 二氧化硅 2 将粉末浸入大鼠气管制作矽肺模型。 通过检测α-SMA的表达以及血清反应因子（SRF）的表达（SRF是肌成纤维细胞分化的关键调节因子）来检测肌成纤维母细胞的分化。 同时检测胶原、TGF-β1和RAS信号的表达。 结果表明，TGF-β1在体外可强烈诱导肌成纤维细胞分化和胶原合成，而Ac-SDKP预处理可显著减弱肌成纤维组织的活化，以及TGF-α1及其受体的诱导。 在病理相关的矽肺大鼠模型中也观察到类似的结果。 Ac-SDKP体内治疗强烈减弱了1）矽肺诱导的TGF-β1和RAS信号表达增加，2）肌肉成纤维细胞分化，如肺硅结节中SRF和α-SMA阳性肌成纤维细胞定位的显著降低，3）胶原沉积。
结论/意义 本研究结果提示了Ac-SDKP对矽肺有益作用的新作用机制，包括TGF-β1及其受体、SRF和Ang II型1受体（AT 1 )表达、胶原沉积和肌成纤维细胞分化。 研究结果进一步表明，靶向肌成纤维细胞分化的疗法可能对治疗肺矽肺具有疗效。
介绍 矽肺是一种常见的职业性呼吸系统疾病，是由于吸入含有结晶二氧化硅的颗粒物而引起的肺部病理状态。 虽然职业安全和健康的进步使这种疾病可以高度预防，但矽肺仍然是世界上最流行的职业病。 在中国，由于工业的快速发展和缺乏有效的防尘方法，病例数量迅速增加 [1] , [2] 截至2010年底，中国共记录到676541例肺尘肺病例（每年约10000例新发病例），其中一半为矽肺 [3] 此外，矽肺疾病一般没有治疗方法，主要是因为纤维化的基础尚不清楚。
尽管许多不同的细胞类型和细胞因子与纤维化疾病有关，但越来越多的证据表明，表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞是肺纤维化的主要效应细胞 [4] 此外，我们组和其他支持性转化生长因子-β（TGF-β）作为肺纤维化的关键调节剂有重要证据 [5] , [6] TGF-β诱导的反应依赖于靶细胞谱系并具有特异性，通常由受体介导的涉及Smad蛋白的细胞内信号通路介导。 从机制上讲，TGF-β-Smad 2/3信号传导已被证明可诱导一种遗传程序，导致胶原蛋白和纤维连接蛋白表达的不成比例增加，并通过减少蛋白酶的分泌和增加蛋白酶抑制剂的分泌来促进细胞外基质（ECM） [7] TGF-β信号转导通过促进成纤维细胞分化为形态不同的病理性肌成纤维细胞（以α-SMA的表达为特征）来改变成纤维细胞表型 [8] , [9] , [10] 从而促进胶原蛋白合成和增强ECM沉积。 肌成纤维细胞分化和成纤维细胞获得平滑肌样表型特征在伤口愈合和纤维化中的作用最近得到了广泛的综述 [11] , [12] , [13] 在血管平滑肌细胞中，SMA-gene转录主要通过血清反应因子（SRF）与其靶顺式元件CArG盒（CC（AT）的结合来控制 6 GG）在大多数SMA基因的启动子区域，包括α-SMA [14] 此外，有报道称TGF-β1诱导血清反应因子（SRF）的表达和激活，这是肌成纤维细胞分化所必需的 [15] .
就抗纤维化因子而言，N-乙酰-芳基-天冬氨酰-赖氨酰脯氨酸（Ac-SDKP）是一种天然的抗炎和抗纤维化肽 [16] 以前，我们和其他人发现Ac-SDKP抑制器官纤维化，如心脏、肾和肺纤维化 [6] , [17] , [18] 它只被血管紧张素转换酶（ACE）水解，其血浆浓度被ACE抑制剂显著增加。 此外，局部肾素-血管紧张素系统（RAS）被描述为组织损伤的纤维化反应以及TGF-β的重要调节器。 RAS的激活和血管紧张素II（Ang II）的产生与组织纤维化相关 [19] , [20] 最近的研究表明，Ang II和TGF-β1是促进心脏重塑和可能的纤维化的综合信号网络的一部分 [21] , [22] , [23] , [24] .
我们小组的研究表明，Ac-SDKP可以抑制SiO大鼠的肺纤维化 2 -通过抑制慢性炎症、TGF-β1/Smad信号和TGF- [6] , [25] , [26] 然而，Ac-SDKP是否可以通过调节体内外SRF的表达来调节肌成纤维细胞的分化，以及在大鼠矽肺模型中是否可以调节TGF-β和RAS信号传导尚不清楚。 因此，本研究的目的是解决这些关键的未回答问题。
材料和方法 体内实验方案和疾病模型 雄性Wistar大鼠，体重180±10g，购自Vital River实验动物技术有限公司（中国北京）。 该动物实验由河北联合大学动物护理和使用机构委员会审查和批准。 动物根据国家卫生研究所（NIH）制定的指南获得食物和水。 用异氟醚麻醉大鼠，并通过气管滴注接受二氧化硅溶液（50 mg/大鼠，1 ml）或0.9%生理盐水（载体）。 在滴注之前，将5µm二氧化硅颗粒（Sigma，St.Louis，MO，USA）在180°C下烘焙6小时。 Ac-SDKP[800µg/（kg d），美国Bachem AG公司]或对照组（0.9%生理盐水）通过微型渗透泵（型号2 ml4，美国DURECT有限公司）注入腹腔。 将大鼠分为6组：1）对照4w（滴注0.9%生理盐水，然后用0.9%生理盐水处理4w）； 2） 矽肺模型4w（注入SiO 2 然后用0.9%生理盐水处理4w）； 3） 对照组8w（0.9%盐水滴注前48h用0.9%盐水处理，然后继续治疗8w）； 4） 矽肺模型8w（SiO前48小时用0.9%生理盐水处理 2 滴注后继续治疗8w）； 5） Ac-SDKP后处理（注入SiO 2 0.9%生理盐水处理4w，Ac-SDKP处理4w）； 6） Ac-SDKP预处理（在滴注SiO前48小时用Ac-SDKP处理 2 ，然后继续8周）。 每个实验组包括10只动物。 组织病理学（H.E.染色）和羟脯氨酸测定如前所述 [6] .
α-SMA和SRF的免疫细胞化学和免疫组织化学 玻片上生长的细胞 [27] 和石蜡包埋切片用0.2%Triton渗透，并用5%牛血浆白蛋白（BSA）在0.1M磷酸盐缓冲液（PBS）中封闭30分钟，以减少非特异性结合，然后用抗α-SMA（1184-s，EPIT MICs Biotechnology，USA）和SRF（sc-335，Santa Cruz Biotechnology，US）的一级抗体孵育 其次是生物素化二级抗体，最后是ABC试剂（中国武汉博希德生物工程有限公司）。 DAB显示免疫反应性。 棕色染色被认为是阳性结果。
ELISA公司 TGF-β1和Ang II的血浆浓度根据建议的制造商协议（新生物科技和CusaBio Biotech，CSB-E04494r）通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定。 采用ELISA试剂盒（CSB-E009265r，CusaBio-Biotech）检测肺组织中Ac-SDKP的药物水平。 简单地说，用0.01 M PBS冲洗100 mg肺组织，在1 ml PBS中均质，并在−20°C下储存过夜。进行两次冻融循环以打破细胞膜后，在5000 g下离心匀浆5分钟。TGF-β1、Ang II和Ac-SDKP的最低检测浓度为31.25 pg/ml， 分别为1.17 pg/ml和0.078 ng/ml。
Western Blot分析 细胞和肺组织用RIPA（ZO2338A，Aidlab；中国）进行裂解，总蛋白含量用蛋白质测定法（PC0020，Solarbio；中国）定量。 通过SDS-PAGE将蛋白质（70µg/泳道）在10%凝胶中分离，并电转移到硝酸纤维素膜上（Amervehicle Biosciences）。 用5%的非脂肪乳封闭膜，并在4°C下用一级抗体[抗胶原蛋白I型（C2456）和III型（C7805），Sigma；抗TGF-β1和受体，（中国武汉博世生物工程有限公司）；抗ACE（2504-1）和抗Ang II型1受体（at 1 ; 5172-1），EPIT MICS，美国； 抗Ang II（bs-0578R），北京博伊斯合成生物技术有限公司，中国； 抗α-SMA和抗SRF； 抗β-肌动蛋白（sc-47778）、抗GAPDH（sc-25778）、圣克鲁斯生物技术]，然后是碱性磷酸酶结合二级抗体（E030220、E020210，EarchOx，美国）。 通过添加BCIP/NET（E116，Amresco，USA）可视化靶带。 结果用GAPDH或β-肌动蛋白标准化，并表示为对照4w组特异条带的倍数。
定量实时聚合酶链反应（PCR） 本研究使用了以下对大鼠基因特异的寡核苷酸引物：I型胶原 5′-CAGATTGGGATGGAGTTTTA-3′ 和反义 5′-CTACAGCACGCTTGTGGA TGGCT-3′ ; III型胶原，感觉 5′-ATAGCTGAACTGAAAGCCACCAT-3′ 和反义 5′-CCTGAACTCAAGAGCGAATA-3′ ; α-SMA，感测 5′-TCCAGAGTCCAGCACAATACCAG-3′ 和反义 5′-AATGACCAGATTATGTTGACC-3′ ; SRF，感应 5′-CTTAACATGGCATC TTCGACACT-3′ 和反义 5′-CTTAACCTCTAATCCCCATTGCT-3′ ; GAPDH，感官 5′-GTCACCTTCACCGTTTT-3′ 和反义 5′-CTTAGTTGCGTTACACCTTTCTT-3′ 使用Trizol试剂（Invitrogen）从成纤维细胞中提取总RNA，并使用随机六聚体和M-MLV first strend试剂盒（c28025–032，Invitrogen）从1µg RNA中生成cDNA。 按照SBYR绿（c11733–038，Invitrogen）PCR核心试剂盒中的描述进行实时PCR。 使用ΔΔCt方法分析数据，并将其表示为任意单位。
统计分析 数值表示为平均值±SEM。 多个独立组之间的比较采用单向方差分析，然后采用Bonferroni检验进行事后分析。 导致p值小于0.05的组间差异被认为具有统计学意义。
结果 Ac-SDKP对大鼠矽肺模型肌成纤维细胞分化的影响 接下来，我们试图确定Ac-SDKP是否可以在病理相关的细胞中调节肌成纤维细胞分化 体内 矽肺模型。 具体而言，我们检测了Ac-SDKP是否能够抑制我们小组和其他人之前描述的体内矽肺模型中TGF-β1及其受体、SRF、α-SMA和ECM的表达 [6] , [25] 通过羟脯氨酸测定和蛋白质印迹分析评估，矽肺模型（4w和8w）中胶原水平的表达高于对照组（4w和8w）( ). 有趣的是，Ac-SDKP在8周龄动物中的治疗后显著减少了矽肺结节的数量，以及总胶原蛋白、I型胶原蛋白和III型胶原蛋白的数量（例如，分别减少到84.08%、59.79%和65.15%）。 此外，Ac-SDKP预处理能够显著减轻矽肺诱导的ECM沉积增加，总胶原蛋白、I型胶原蛋白和III型胶原蛋白分别减少至81.85%、55.67%和47.72%。
Ac-SDKP对大鼠矽肺模型肺胶原表达的影响。 与对照组相比，大鼠矽肺模型肺胶原含量显著增加，而Ac-SDKP治疗导致胶原表达显著降低。 A） 羟脯氨酸法测定总胶原蛋白含量； C4：对照4w组； S4：矽肺模型4w组； C8：对照组8w； S8：矽肺模型8w组； Ac-post:Ac-SDKP治疗后组； Ac-pre：Ac-SDKP预处理组； B） 用抗I型和III型胶原抗体对组织提取物进行Western blot分析； C） 通过蛋白质印迹测定I型胶原蛋白的表达； D） Western blot检测III型胶原蛋白表达。
接下来，我们研究了Ac-SDKP对矽肺模型中TGF-β1及其受体（I型和II型）的调节作用。 矽肺模型（4w和8w）血浆TGF-β1水平显著升高，Ac-SDKP治疗前后TGF-( ). 如所示 与对照组相比，矽肺模型4w组TGF-β1、TGF-α1受体Ⅰ型和Ⅱ型的表达分别增加了2.09倍、3.46倍和2.97倍； 矽肺8w组较对照8w组增加2.62倍、2.07倍和2.73倍。 在矽肺模型8w中观察到的TGF-β1及其受体的上调被Ac-SDKP治疗后显著逆转，分别为矽肺模型8 w的62.26%、58.09%和62.62%。 Ac-SDKP预处理使矽肺模型8w TGF-β1、TGF-α1RI和TGF-γ1RII的表达分别降低38.68%、61.83%和53.85%。
Ac-SDKP对大鼠矽肺模型血浆和肺TGF-β1及其受体表达的影响。 与对照组相比，矽肺模型中TGF-β1及其受体的表达显著增加。 Ac-SDKP干预后，这些蛋白的表达显著下降。 A） ELISA法测定血浆TGF-β1水平； C4：对照4w组； S4：矽肺模型4w组； C8：对照组8w； S8：矽肺模型8w组； Ac-post:Ac-SDKP治疗后组； Ac-pre：Ac-SDKP预处理组； B） 组织提取物用抗TGF-β1及其受体抗体进行Western blot分析； C） Western blot检测TGF-β1表达蛋白的表达。 D） 通过蛋白质印迹测定TGF-β受体I型蛋白的表达； C） Western blot检测TGF-β受体II型蛋白表达。
接下来通过免疫组织化学检测矽肺模型中的α-SMA和SRF来评估间质肌成纤维细胞的诱导。 如所示 , α-SMA和SRF在血管和气管平滑肌细胞中呈阳性染色，而在对照组间质中未见阳性染色。 在矽肺模型的矽肺结节和间质纤维化区域也观察到α-SMA和SRF的表达。 值得注意的是，Ac-SDKP治疗前后显著减少了矽肺结节和间质纤维化区α-SMA和SRF的出现。 免疫组化结果经Western blot分析进一步证实( )表明二氧化硅（4w和8w）使α-SMA的表达比对照组（4w、8w）增加3.11倍和3.13倍，Ac-SDKP治疗后和治疗前显著降低了矽肺大鼠肺α-SMA表达，分别为66.96%和63.69%。 与α-SMA的表达类似，与矽肺8w组相比，在矽肺模型8w组中，Ac-SDKP治疗前后组的SRF上调分别减弱至54.02%和53.63%。
通过免疫组织化学方法分析Ac-SDKP对大鼠矽肺模型中α-SMA表达的影响。 α-SMA阳性免疫染色仅见于对照组血管和气管平滑肌细胞。 值得注意的是，在矽肺模型（4w和8w）中，α-SMA在矽肺结节和间质纤维化区域中表达更为阳性。 α-SMA在Ac-SDKP治疗前后的阳性表达低于矽肺模型。
通过免疫组织化学分析大鼠矽肺模型中Ac-SDKP对SRF表达的影响。 SRF阳性免疫染色仅见于对照组血管和气管的平滑肌细胞。 值得注意的是，在矽肺模型（4w和8w）中，SRF在矽肺结节和间质纤维化区域中的阳性表达更高。 SRF在Ac-SDKP治疗前后的阳性表达低于矽肺模型。
Ac-SDKP对大鼠矽肺模型α-SMA和SRF表达的影响。 与对照组相比，矽肺模型（4w和8w）中α-SMA和SRF的表达显著增加。 Ac-SDKP干预后，这些蛋白的表达显著下降。 A） 组织提取物用抗α-SMA和SRF抗体进行Western blot分析； B） Western blot检测α-SMA表达蛋白的表达。 C4：对照4w组； S4：矽肺模型4w组； C8：对照组8w； S8：矽肺模型8w组； Ac-post:Ac-SDKP治疗后组； Ac-pre：Ac-SDKP预处理组； C） Western blot检测SRF蛋白表达。
Ac-SDKP对矽肺大鼠RAS信号转导的影响 由于Ac-SDKP在ACE存在下水解，我们试图测定ACE、Ang II和AT的表达 1 在大鼠血浆或肺组织中。 结果表明，矽肺模型（4w和8w）的血浆Ang II浓度比对照组（4w、8w）分别增加4.94倍和3.71倍。 在Ac-SDKP治疗后和治疗前组中，血浆中Ang II的表达呈下降趋势，但无统计学意义( ). 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Ac-SDKP的肺组织水平表明，Ac-SDKP治疗前后组的Ac-SDKP-水平较高，但与矽肺8w组相比，其水平无统计学意义( ). Ac-SDKP预处理组的Ac-SDKP水平与对照组（4w和8w）显著不同。 Western blot分析进一步证实了ELISA结果，表明二氧化硅增加ACE、Ang II、AT的表达 1 矽肺模型4w组（例如，与对照4w组相比，分别增加2.10倍、2.86倍和2.20倍）。 ACE、Ang II、AT的表达 1 与对照组8w相比，矽肺模型组8w分别增加了2.34倍、2.44倍和2.62倍。 Ac-SDKP治疗前和治疗后组显示出显著抑制硅诱导的AT升高 1 表达式。 ACE和AngII的平均水平在Ac-SDKP治疗前和治疗后组中普遍较低，但这种影响在统计学上并不显著。
大鼠矽肺模型血浆和肺中RAS信号和Ac-SDKP的变化。 血管紧张素转换酶、血管紧张素II和AT的表达 1 与对照组（4w和8w）相比，矽肺模型（4w与8w）显著增加。 Ac-SDKP治疗后或治疗前表现出降低矽肺诱导的ACE、Ang II和AT表达的模式 1 ，但仅抑制AT 1 表达具有统计学意义。 A） ELISA法测定血浆血管紧张素Ⅱ水平； C4：对照4w组； S4：矽肺模型4w组； C8：对照组8w； S8：矽肺模型8w组； Ac-post:Ac-SDKP治疗后组； Ac-pre：Ac-SDKP预处理组； B） ELISA法测定肺组织Ac-SDKP水平； C） 用抗ACE、Ang II和AT抗体对组织提取物进行Western blot分析 1 ; D） Western blot检测ACE蛋白表达。 E） Western blot检测Ang II蛋白表达。 F） AT公司 1 Western blot检测蛋白表达。
讨论 目前的研究通过证明Ac-SDKP在体内和体外对矽肺具有抗纤维化作用，该作用包括抑制TGF-β诱导的肌成纤维细胞分化，导致SRF、α-SMA和ECM沉积减少，从而推动了该领域的发展。 先前的研究表明，肺成纤维细胞是肺纤维化发生、预防和治疗的关键细胞，因为间质成纤维细胞增殖和胶原合成在肺矽肺的发生和发展中起着至关重要的作用。 有趣的是，在纤维化的发展过程中，存在肌成纤维细胞的分化，其形状和特征介于纤维化区域的成纤维细胞和平滑肌细胞之间，并以表达α-SMA为特征。 肌成纤维细胞的来源尚不清楚，但纤维细胞，包括局部成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、周细胞、肝周细胞、间充质干细胞和骨髓源细胞，被认为是肌成纤维纤维细胞的可能来源 [8] , [28] 尤其是肺和肾纤维化 [29] , [30] 以前已经证明，与成纤维细胞相比，肌成纤维细胞具有较强的胶原合成能力、较弱的拉伸强度以及收缩、迁移和细胞外基质合成能力，是造成纤维化组织挛缩的原因 [8] 因此，肌成纤维细胞被认为是在纤维化过程中产生过多细胞外基质的最重要细胞 [31] , [32] 在目前的研究中，我们观察到体外成纤维细胞经TGF-β1处理后已分化为肌成纤维细胞，肌成纤维细胞看起来更大，呈纺锤形排列在平行的薄片中，α-SMA细胞骨架表达显著增加。 同样，我们观察到α-SMA阳性肌成纤维细胞在矽肺结节和矽肺纤维化区域显著增加。 体内和体外SMA阳性肌成纤维细胞的增加与I型和III型胶原的增强表达相关，这一发现与其在肺纤维化发展中的卓越作用相一致。 重要的是，Ac-SDKP治疗显著减弱了SMA阳性肌成纤维细胞的分化，以及TGF-β1和体内大鼠矽肺模型诱导的肌成纤维纤维细胞中胶原的沉积/表达。
SRF已被证明可以调节许多参与细胞增殖、迁移、分化、血管生成和凋亡的基因。 众所周知，它位于α-SMA的上游，与α-SMA启动子中的SRE（血浆反应元件）结合可激活α-SMA mRNA的启动子 [33] 体外研究证实，TGF-β可以诱导SRF的核移位，TGF--β上调成纤维细胞中α-SMA的表达，促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化 [9] 在当前研究中，我们还观察到TGF-β1诱导导致TGF-α1受体（I型和II型）和SRF上调。 预处理方式 {“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“LY364947”，“term_id”：“1257906561”，“term_text”：“RY364949”}} LY364947年 是一种特异性TGF-β1受体抑制剂，能够阻断肌成纤维细胞的分化，下调TGF-α1受体和SRF的表达。 体内，SRF在矽肺结节和间质纤维化组织中的表达显著且特异性增加，类似于α-SMA。 Ac-SDKP还下调矽肺肺中TGF-β及其受体的蛋白水平。 因此，通过下调TGF-β的配体和受体，Ac-SDKP能够在多个水平上减弱TGF-α信号，以防止大鼠矽肺模型和培养的成纤维细胞中肌成纤维细胞的分化。 已知TGF-β受体的激活会导致受体激活的Smad2/3磷酸化，从而与Smad4形成复合物。 激活的Smad2/3-Smad4复合物转位到细胞核并激活靶基因 [34] , [35] Smad 7是一种抑制性Smad，与TGF-β受体复合物稳定结合，并能抑制Smad2/3的TGF-α依赖性磷酸化。 在之前的工作中，我们发现Ac-SDKP增加Smad7水平并阻止Smad2/3表达 体内 ，这表明Ac-SDKP的抗TGF-β作用可能涉及Smad7介导的抑制 [26] .
众所周知，ACE除了通过其C末端结构域将AngI代谢为AngII外，还可以通过其N末端催化结构域水解Ac-SDKP [36] 导致Ac-SDKP失活。 此外，AngII的激活和产生与肺纤维化有关，而肺纤维化可被AT减弱 1 阻滞剂或ACE抑制剂 [37] , [38] , [39] 在本研究中，我们观察到矽肺患者血浆和肺组织中AngII水平上调，ACE和AT也同样上调 1 肺部也有升高。 Ac-SDKP对ACE或AngII水平无显著影响，但能减弱硅酸诱导的AT升高 1 Ac-SDKP对AT的抑制作用 1 可能有助于Ac-SDKP的抗硅作用，因为众所周知RAS系统在肺纤维化中起作用。
最后，我们研究的一个重要警告是，Ac-SDKP可以有效减弱肌成纤维细胞分化、胶原沉积以及TGF-β、SRF和AT 1 作为治疗后或治疗前给药时，矽肺中的表达。 治疗前的方法包括在矽肺诱导前两个月服用Ac-SDKP，而治疗后的方法是在矽肺诱发后一个月服用Ac-SDKP。 虽然这两种治疗方法都有效，但预防治疗方法是最有效的。 然而，Ac-SDKP后处理有效的事实令人感兴趣，并对潜在的治疗应用具有重要意义。
虽然本研究对Ac-SDKP在矽肺中抗纤维化作用的机制产生了重要见解，但仍存在一些局限性。 例如，由于ACE可以水解和灭活Ac-SDKP，因此通过使用抗ACE代谢的Ac-SDKP类似物可以获得更好的抗纤维化效果。 此外，需要对Ac-SDKP的作用机制进行更多研究，包括评估其对上皮和/或巨噬细胞的影响，以便更好地了解其在矽肺中的抗纤维化作用。 此外，还需要研究评估Ac-SDKP对肺功能的影响。 最后，一个尚未解决的重大问题是，迄今为止尚未发现Ac-SDKP的受体，因此有关特定受体介导和相关信号机制的详细信息仍不清楚。 因此，迫切需要进行研究来解决这一重要问题。
结论 总之，本研究结果提示了Ac-SDKP对矽肺有益作用的新作用机制，包括TGF-β1及其受体、SRF和AT的减弱 1 表达、胶原沉积和肌成纤维细胞分化。 由于肌成纤维细胞分化在矽肺肺纤维化的发展中起着关键作用，Ac-SDKP对肌成纤维细胞分化的这种新的调节作用被认为对其抗纤维化作用和减少矽肺肺胶原沉积的能力有重要贡献。 研究结果进一步表明，靶向肌成纤维细胞分化的疗法可能对治疗肺矽肺具有疗效。
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