糖尿病与过度的心血管疾病发病率和死亡率相关。糖尿病是左心室功能障碍的独立危险因素(17). 尽管人们经常将糖尿病患者的心脏功能障碍与冠状动脉粥样硬化增强联系起来，但已有证据表明存在一种特定的“糖尿病”心肌病，甚至在糖尿病患者没有高血压和动脉粥样硬化的情况下也已显示出这种情况(47). 可能改变糖尿病患者心肌功能的多种因素的相对致病意义有待进一步阐明(22). 此外，这种描述将有助于发现糖尿病引起的心肌功能障碍的有效治疗方法。
流行病学研究(8,18)表明地中海饮食与降低心血管疾病风险相关。白藜芦醇是地中海饮食中的一种重要膳食成分(37). 先前的研究表明，白藜芦醇对喂食果糖的大鼠具有心脏保护作用(21)链脲佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠(41). 然而，白藜芦醇预防2型糖尿病患者心脏功能障碍的作用和机制尚待阐明。
MRI是一种无创技术，可以评估活体心脏的收缩和舒张功能。使用这种方法，我们旨在评估对照组的心脏功能m-Lepr公司数据库和糖尿病勒普数据库用白藜芦醇或载体治疗的小鼠。我们假设，白藜芦醇通过减轻氧化/硝化应激以及提高一氧化氮（NO）的可用性来挽救2型糖尿病患者的心脏功能障碍。为了验证这一点，我们研究了白藜芦醇对大鼠心脏组织中NO、ROS和活性氮（RNS）生成的影响勒普数据库老鼠。我们还研究了白藜芦醇对TNF-α介导的NF-κB活化和下游信号传导的影响，这些信号传导有助于氧化/硝化应激和NO可用性受损，以阐明白藜芦醇对2型糖尿病心脏保护作用的机制。
方法
动物和治疗
实验方案由密苏里-哥伦比亚大学动物护理与使用委员会批准，并符合美国国立卫生研究院和美国生理学会关于实验动物护理和使用的现行指南。杂合子控制(m-Lepr公司数据库)纯合2型糖尿病小鼠（背景株：C57BLKS/J）(勒普数据库)小鼠（背景菌株：C57BLKS/J），和勒普数据库TNF-α阴性小鼠(数据库TNF−/数据库肿瘤坏死因子-；背景菌株：C57BL/6J）购自Jackson Laboratory，维持正常的啮齿动物饮食。男性m-Lepr公司数据库小鼠（体重：20–35 g）以及勒普数据库（重量：40-60克）和数据库TNF−/数据库TNF−（重量：40–60 g）小鼠，雌雄不限。这些数据库TNF−/数据库TNF−小鼠表现出高血糖和肥胖的表型，糖尿病表型与瘦素受体（Lepr）突变的外显率一致。白藜芦醇（Cayman Chemical）分散于0.5%甲基纤维素（Sigma）中(9). 12周龄时，男性m-Lepr公司数据库和勒普数据库用白藜芦醇（20mg·kg）处理小鼠−1·天−1)或甲基纤维素载体灌胃4周(34,49).
体内电影MRI
对年龄匹配的患者进行无创MRI扫描m-Lepr公司数据库和勒普数据库使用配备38毫米和60毫米正交驱动鸟笼射频线圈的瓦里安7-T水平钻孔MRI（瓦里安，帕洛阿尔托，加利福尼亚州）仪器，对白藜芦醇进行或不进行4周治疗的小鼠进行治疗。使用小型动物监测系统（SA Instruments，Stony Brook，NY）进行心电图、呼吸监测和门控。热空气通过MRI孔循环，以保持动物的体温。使用4%异氟醚和1 l/min氧气完成麻醉诱导。监测呼吸频率，并用于手动校准异氟醚维持剂量（1.2–1.8%）。成像协议与之前发布的程序类似(42). 简单地说，ECG/呼吸门控梯度回波序列的层厚为1 mm，层厚为30×30 mm2长轴和短轴图像的视野。在R波后立即使用中室轴向图像上的图像J（NIH，Bethesda，MD）测量壁厚，平均每只小鼠3次测量。在长轴冠状图像上测定心室长度。左心室质量（LVM）由舒张末期心外膜和心内膜面积从心尖到基底的差值之和乘以切片厚度（1mm）和心肌密度（1.053 g/ml）得出(31). 左室舒张末期容积（LVEDV）和左室收缩末期容积（LVESV）分别计算为舒张末期和收缩末期从心尖到二尖瓣环平面的每层心内膜面积之和。左室射血分数（EF）计算如下：LV EF=（LVEDV−LVESV）/LVEDV。卒中体积（SV）计算如下：SV=LVEDV−LVESV，心输出量（CO）计算公式如下：CO=SV×HR，其中HR为心率(44,46). 左心室容积-时间曲线绘制为一个心动周期内左心室容积与时间的关系。收缩峰射血率（PER）和舒张峰充盈率（PFR）分别定义为左室容积-时间曲线最小和最大导数的最大绝对值。使用VNMRJ（Varian）和图像J进行图像分析(网址：http://rsb.info.nih.gov/ij/)、和段(http://segment.heiberg.se网站) (15)软件工具。
肿瘤坏死因子-α和NAD（P）H氧化酶亚单位gp91的mRNA表达凤凰（phox）通过实时PCR
我们使用实时定量RT-PCR技术来分析TNF-α和gp91的mRNA表达凤凰（phox）先前报道的小鼠左心室心肌组织(45,48). 使用2计算数据-ΔΔCT型方法（其中CT型是阈值周期），并表示为转录本的折叠变化勒普数据库正常化为内部对照（β-actin）的小鼠与m-Lepr公司数据库小鼠（定义为1.0倍）。
TNF-α、IκB-α、磷蛋白-IκB--α、NF-κB、gp91的蛋白表达凤凰（phox）Western Blot分析法测定内皮型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合成酶和硝基酪氨酸
使用TNF-α、IκB-α和磷酸化IκBα一级抗体（Santa Cruz Biotechnology）、NF-κB、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和硝基酪氨酸（N-Tyr）一级抗体凤凰（phox）初级抗体（BD-Science Pharmingen）。使用Fuji LAS3000对信号进行密度扫描，并使用Multigage软件（Fujifilm）进行量化。蛋白质表达的相对量被量化为相应的m-Lepr公司数据库控件的值设置为1.0。
NAD（P）H氧化酶活性
如前所述，使用由荧光素（Sigma）衍生的化学发光分析法测定均质心脏组织提取物中的NAD（P）H氧化酶活性(11,49). 样品由Fluoroscan Ascent FL（Thermal Scientific）读取，NAD（P）H氧化酶活性标准化为m-Lepr公司数据库控件。
免疫荧光染色
免疫组织化学用于鉴定和定位gp91凤凰（phox）血管或心肌组织切片中的蛋白质。福尔马林固定心脏在5μm处切片。gp91的一级抗体凤凰（phox）（BD Biosciences Pharmingen）、内皮细胞标记物von Willebrand因子（Abcam）、平滑肌标记物α-actin（Abcam）或巨噬细胞标记物F4/80（Serotec）用于连续双免疫荧光染色。二级荧光抗体为FITC或德克萨斯红结合。切片安装在防褪色剂中（含4′，6-二氨基-2-苯基吲哚和Invitrogen的慢速金）。使用带×40物镜的荧光显微镜（蔡司Axioplan显微镜）对载玻片进行观察和分析。
O的测量2·−使用电子顺磁共振光谱
O（运行）2·负极如前所述，在心脏组织匀浆中测定电子顺磁共振（EPR）光谱的定量(48). 简而言之，在含有0.01 mmol/l EDTA的50 mmmol/l磷酸盐缓冲液中制备10%的组织匀浆。将含有2 mmol/l 1-羟基-3-羧基吡咯烷的上清液在37°C下培养30分钟，并在液氮中快速冷冻。根据从过氧化氢标准溶液中产生的阴离子的辣根过氧化物酶生成的标准曲线，通过峰的双重积分确定EPR光谱中的超氧化物定量，使用对-乙酰氨基酚作为共基质，然后通过蛋白质浓度进行归一化。
亚硝酸盐/硝酸盐的测量
根据Zhang等人的报告，使用美洲计量传感器（世界精密仪器）评估心脏组织中的亚硝酸盐/硝酸盐水平(49). 简单地说，硝酸盐通过硝酸分析仪（世界精密仪器）转化为亚硝酸盐。2毫米传感器（ISO-NOP）检测到的电流（pA）代表左心室心肌组织溶解过程中亚硝酸盐的浓度。
数据分析
除特别说明外，结果以平均值±标准偏差报告。数据通过单因素方差分析进行分析，然后进行最小显著性差异事后检验。重要性在接受P（P）< 0.05.
结果
白藜芦醇对糖尿病所致心功能不全的影响
形态测量参数。
LVM在勒普数据库小鼠，虽然没有统计学差异。然而，LVM-体重比在勒普数据库老鼠。白藜芦醇对LVM和LVM-体重比无影响().
表1。
| m-Lepr公司数据库老鼠 | 勒普数据库老鼠 | 勒普数据库小鼠+RSV | m-Lepr公司数据库小鼠+RSV |
|---|
| LV质量，mg | 89.91 ± 16.76 | 77.49±9.25 | 88.92 ± 22.68 | 91.09 ± 15.85 |
| 体重，g | 28.94 ± 1.55 | 49.79 ± 4.39* | 48.74 ± 4.50* | 33.93 ± 2.37† |
| LV质量与体质量比，mg/g | 3.11±0.63 | 1.56 ± 0.11* | 1.81 ± 0.28* | 2.70 ± 0.52† |
| 呼吸频率，呼吸次数/分钟 | 31.50 ± 4.43 | 40.20 ± 8.49 | 38.75 ± 1.26 | 38.00 ± 4.97 |
| 心率，心跳/分钟 | 381.89 ± 47.31 | 315.66 ± 14.27* | 322.48 ± 26.30* | 370.37 ± 25.49† |
| 左室舒张末期容积，μl | 49.10 ± 7.78 | 42.68 ± 7.75 | 49.26 ± 12.02 | 51.15 ± 8.38 |
| 左室收缩末期容积，μl | 16.10 ± 5.15 | 11.90 ± 5.03 | 15.18 ± 7.68 | 15.28 ± 4.67 |
| 冲程体积，μl | 33.00 ± 2.98 | 30.77 ± 3.91 | 34.08 ± 5.23 | 35.88 ± 3.80 |
| 心输出量，ml/min | 12.69 ± 2.55 | 9.76 ± 1.59* | 11.01 ± 1.95 | 13.30 ± 1.77† |
| 喷射分数，% | 67.84 ± 5.60 | 72.90 ± 6.96 | 70.35 ± 8.37 | 70.60±3.95 |
| 峰值喷射速率，μl/ms | 0.71 ± 0.14 | 0.49 ± 0.10* | 0.56±0.09 | 0.67 ± 0.07† |
| 峰值填充率，μl/ms | 0.75 ± 0.06 | 0.50 ± 0.09* | 0.71 ± 0.18† | 0.77 ± 0.13† |
心率和呼吸频率。
勒普数据库与对照组相比，小鼠HR较低m-Lepr公司数据库尽管各组之间的呼吸频率相似。白藜芦醇对两种药物的心率或呼吸频率均无影响勒普数据库和m-Lepr公司数据库老鼠().
收缩功能参数。
LVEDV、LVESV和SV在勒普数据库老鼠。年一氧化碳显著减少勒普数据库与m-Lepr公司数据库老鼠。白藜芦醇略微增加LVEDV、LVESV、SV和CO，但没有统计学差异(). EF在所有组之间具有可比性().
左室容积-时间曲线和舒张松弛。
LV容积-时间曲线表明，PER和PFR在勒普数据库老鼠。白藜芦醇显著增加PFR，但不显著影响PER(和).
白藜芦醇（RSV）缓解了勒普数据库老鼠。A类和B类：心室中段短轴切片中舒张末期和收缩末期的典型MRI图像(A类)和心室长轴(B类)年收购m-Lepr公司数据库和勒普数据库用RSV治疗的小鼠（20 mg·kg−1·天−1，4周，口服灌胃）或载体。注意糖尿病小鼠的左心室腔面积较低，左心室长度较短。C类和D类：左心室容积-时间曲线的汇总数据，其中左心室容积是根据心脏周期内的时间绘制的。峰值射血率（PER）和峰值充盈率（PFR）定义为左心室容积-时间曲线最小和最大导数的最大绝对值。C类：PFR高于m-Lepr公司数据库与勒普数据库老鼠。D类：RSV增加PFR勒普数据库不影响PER的小鼠。
白藜芦醇抑制2型糖尿病患者TNF-α蛋白和mRNA表达及磷脂酶-IκB-α和NF-κB p65蛋白表达
TNF-α的蛋白和mRNA表达()英寸勒普数据库与m-Lepr公司数据库老鼠。白藜芦醇抑制肿瘤坏死因子-α的表达勒普数据库老鼠。IκB-α表达在勒普数据库小鼠，而IκB-α磷酸化和NF-κB p65表达在勒普数据库老鼠。白藜芦醇降低IκB-α磷酸化和NF-κB p65蛋白表达，但不影响总IκB-α表达().
RSV降低TNF-α蛋白和mRNA表达勒普数据库老鼠。A类和B类：蛋白质(A类)和mRNA(B类)TNF-α的表达在勒普数据库老鼠比在m-Lepr公司数据库老鼠。RSV的给药降低了TNF-α的表达（蛋白和mRNA）勒普数据库老鼠。数据为平均值±SD；n个=5个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。
RSV抑制磷酸化IκB-α和NF-κB p65蛋白的表达。A类和B类：总IκB-α表达在勒普数据库老鼠(A类)磷酸化（p-）IκB-α显著升高(B类). RSV抑制IκB-α磷酸化，而不影响总IκB-α的表达。C类：NF-κB p65蛋白表达勒普数据库小鼠数量显著增加。RSV降低NF-κB蛋白表达。数据为平均值±标准差；n个=4个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。
白藜芦醇增加2型糖尿病小鼠eNOS表达和亚硝酸盐/硝酸盐水平
糖尿病小鼠心脏亚硝酸盐/硝酸盐水平降低，白藜芦醇增加NO生成(). 糖尿病小鼠eNOS蛋白表达下调。白藜芦醇增加eNOS表达(). eNOS的蛋白表达在数据库TNF−/数据库肿瘤坏死因子-和勒普数据库用NF-κB抑制剂MG-132（10 MG·kg−1·天−1ip，5天）与勒普数据库小鼠，而m-Lepr公司数据库TNF-α治疗小鼠（10μg·kg−1·天−1ip，3天，R&D）显示eNOS表达降低().
RSV通过增加eNOS的表达促进一氧化氮（NO）的生成。A类：亚硝酸盐/硝酸盐水平在勒普数据库RSV治疗完全逆转小鼠。数据为平均值±SD；n个=5只小鼠*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。B类：内皮一氧化氮合酶（eNOS）表达在勒普数据库小鼠和RSV增强了eNOS的表达。此外，eNOS的蛋白表达在数据库TNF−/数据库肿瘤坏死因子-和勒普数据库用NF-κB抑制剂MG-132（10 MG·kg−1·天−1ip，5天）比in勒普数据库小鼠，而m-勒普数据库TNF-α治疗小鼠（10μg·kg−1·天−1ip，3天，R&D）显示eNOS表达下调。数据为平均值±SD；n个=4个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。
白藜芦醇抑制NAD（P）H氧化酶活性和随后的O2·−2型糖尿病的产生
显示O2·−年产量显著增加勒普数据库白藜芦醇降低O2·−生产勒普数据库老鼠，但不在m-Lepr公司数据库老鼠。NAD（P）H氧化酶抑制剂apocynin（20 mg·kg−1·天−1ip，3天）衰减O2·−生产勒普数据库小鼠的水平与正常对照小鼠没有显著差异。NAD（P）H氧化酶活性在勒普数据库老鼠比在m-Lepr公司数据库老鼠(). 白藜芦醇显著降低小鼠体内NAD（P）H氧化酶活性勒普数据库老鼠。此外，数据库TNF−/数据库TNF−和勒普数据库NF-κB抑制剂MG-132治疗的小鼠NAD（P）H氧化酶活性降低，而m-Lepr公司数据库用重组TNF-α治疗的小鼠表现出增强的NAD（P）H氧化酶活性。
RSV抑制NAD（P）H氧化酶衍生O2·负极生产。A类：O2·−年产量较高勒普数据库与m-勒普数据库老鼠。RSV和NAD（P）H氧化酶抑制剂apocynin（20 mg·kg−1·天−1ip，3天）反转O2·−生产恢复到m-Lepr公司数据库对照小鼠。数据为平均值±SD；n个=5只小鼠*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。B类：NAD（P）H氧化酶活性在勒普数据库老鼠比在m-Lepr公司数据库老鼠。RSV显著降低了勒普数据库在不影响m-Lepr公司数据库老鼠。此外，数据库TNF−/数据库TNF−和勒普数据库NF-κB抑制剂MG-132治疗的小鼠NAD（P）H氧化酶活性降低，而m-Lepr公司数据库用重组TNF-α治疗的小鼠表现出增强的NAD（P）H氧化酶活性。数据为平均值±SD；n个=6只小鼠*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。
白藜芦醇降低gp91蛋白和mRNA表达凤凰（phox）2型糖尿病与gp91的细胞来源凤凰（phox）
我们研究了NAD（P）H氧化酶亚基p22的表达凤凰（phox），gp91凤凰（phox），和p67凤凰（phox）.,A类和B类，显示gp91的蛋白质和mRNA表达凤凰（phox）显著高于勒普数据库老鼠。白藜芦醇降低gp91凤凰（phox）蛋白和mRNA的表达勒普数据库老鼠。相反，p22的蛋白表达凤凰（phox）和第67页凤凰（phox）各组间无显著差异（数据未显示）。内皮细胞（血管性血友病因子）、血管平滑肌细胞（α-actin）或巨噬细胞（F4/80）以及gp91的标记物凤凰（phox）建立表达gp91的细胞类型凤凰（phox）建议gp91凤凰（phox）定位于心脏组织的内皮细胞和巨噬细胞().
RSV降低NAD（P）H氧化酶亚基gp91的蛋白和mRNA表达凤凰（phox）.A类和B类：gp91凤凰（phox）蛋白和mRNA表达在勒普数据库老鼠。RSV降低gp91凤凰（phox）中的表达式勒普数据库老鼠。数据为平均值±SD；n个=4个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。C类：双荧光结合gp91凤凰（phox）使用内皮细胞[von Willebrand因子（vWF）]、血管平滑肌（α-肌动蛋白）和巨噬细胞（F4/80）的标记物，使用特异性抗体，然后使用荧光标记的二级抗体。a–c，gp91的双重标记凤凰（phox）（红色）和vWF（绿色）inm-Lepr公司数据库心脏组织。d日，放大倍率更高的视图c（c）.e（电子）,克、和我，gp91的双重标记凤凰（phox）（红色）和vWF（绿色）in勒普数据库心脏组织。（f）,小时、和j个，放大倍率更高的视图e（电子）,克、和我分别是。灰色箭头（f）显示gp91染色凤凰（phox）（红色），粉红色箭头在d日和j个显示gp91的同位化凤凰（phox）内皮细胞（黄色）。k–m（千米），gp91的双重标记凤凰（phox）（红色）和α-肌动蛋白（绿色）in勒普数据库心脏组织。白色箭头米显示特定的α-肌动蛋白染色，没有gp91荧光粉染色。n个，放大倍率更高的视图米.o–q号，gp91的双重标记凤凰（phox）（红色）和F4/80（绿色）英寸勒普数据库心脏组织。紫色箭头q个显示gp91的同位化荧光粉和F4/80（黄色）。第页，高量化视图q个.秒和t吨，阴性对照（Ctl）。蓝色箭头显示血管中没有第二抗体染色。u个，4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（蓝色）核染色勒普数据库心脏组织。放大倍数：×40。所示数据代表了4个单独的实验。
白藜芦醇下调2型糖尿病iNOS和N-酪氨酸蛋白表达
Western Blot分析()对于N-Tyr，在勒普数据库用白藜芦醇降低小鼠体重，并用iNOS抑制剂1400W（10 mg·kg−1·天−1ip，4天）。iNOS的蛋白表达在勒普数据库小鼠与m-Lepr公司数据库老鼠。白藜芦醇降低iNOS的表达勒普数据库老鼠。此外，数据库TNF−/数据库TNF−和勒普数据库NF-κB抑制剂MG-132治疗的小鼠iNOS蛋白表达降低，而m-Lepr公司数据库经重组TNF-α治疗的小鼠iNOS表达升高().
RSV降低了硝基酪氨酸（N-Tyr）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。A类：N-酪氨酸表达的50-kDa和30-kDa条带在勒普数据库老鼠比在m-勒普数据库老鼠。RSV和iNOS抑制剂治疗（10 mg·kg−1·天−1ip，4天），N-酪氨酸表达降低勒普数据库老鼠。数据为平均值±SD；n个=4个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。B类：呼吸道合胞病毒对iNOS蛋白表达的影响。iNOS的蛋白表达在勒普数据库与m-Lepr公司数据库老鼠。白藜芦醇降低iNOS的表达勒普数据库老鼠。数据库肿瘤坏死因子-/数据库TNF−和勒普数据库用NF-κB抑制剂MG-132治疗的小鼠表现出iNOS表达降低，而iNOS的表达在m-Lepr公司数据库用重组TNF-α治疗的小鼠。数据为平均值±SE；n个=4个单独的实验*P（P）<0.05与。m-Lepr公司数据库小鼠#P（P）<0.05与。勒普数据库老鼠。
讨论
本研究的主要发现是，白藜芦醇对糖尿病心肌病小鼠具有心脏保护作用。该模型中的心肌病表现为舒张舒张功能受损，表现为舒张早期充盈期的减少。此外，在收缩期间，我们测量了峰值射血减少。尽管PER降低，LV EF并未受损。我们发现，白藜芦醇治疗的糖尿病小鼠表现出较低的氧化/硝化应激水平，NO可用性得到改善。这表明白藜芦醇改善左室舒张松弛的机制是由于在该模型中抑制氧化/硝化应激和提高NO的可用性().
RSV通过抑制氧化/硝化应激和提高NO可用性来防止舒张功能障碍。这种改善是由于RSV在抑制TNF-α诱导的NF-κB活化中的作用，因此随后抑制了NAD（P）H氧化酶和iNOS的表达和活化，并增加了eNOS在2型糖尿病中的表达。
白藜芦醇对2型糖尿病的心脏保护作用
白藜芦醇的心脏保护作用已在各种疾病模型中进行了研究。超声心动图分析表明，白藜芦醇降低了老年人的等容舒张时间，这是舒张功能的一个参数(三)和压力超负荷诱导的心肌肥大（主动脉结扎大鼠模型）(16). 在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中，体内左心室导管插入术显示，白藜芦醇预处理可增加左心室最大收缩压和dP/dt吨最大心肌梗死面积减小(35). 使用体内MRI，我们证明白藜芦醇改善了2型糖尿病小鼠的心脏功能。结果表明，16周龄时，尽管男性的SV仅略有下降勒普数据库小鼠，一氧化碳显著减少(和). PER和PFR在勒普数据库小鼠，提示收缩和舒张功能早期受损。收缩功能障碍更可能取决于心肌细胞丢失和损伤的程度，这是收缩力降低、泵功能降低和EF的原因(10). 白藜芦醇在改善SV、CO或PER方面没有表现出显著的益处，但显著增加了PFR(和). 因此，我们认为白藜芦醇主要通过改善舒张功能在糖尿病心肌病中发挥有益作用。虽然白藜芦醇可以预防高脂饮食小鼠和链脲佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠的饮食诱导肥胖并减轻胰岛素抵抗勒普数据库白藜芦醇不能改变小鼠体重或降低高胰岛素性高血糖(49). 因此，白藜芦醇的治疗效果，尤其是对心脏功能障碍的治疗效果也可以独立于体重减轻和高血糖状态。
此外，勒普数据库与m-Lepr公司数据库老鼠(). 这些结果与Panagia等人之前使用MRI对2型糖尿病小鼠心脏进行的研究一致(28). 虽然白藜芦醇改善了舒张功能，但通过两种药物对心脏的形态学改变，其效果均不显著m-Lepr公司数据库和勒普数据库老鼠。因此，通过补充白藜芦醇进行早期干预可能是预防或延缓糖尿病心肌病发病的一种有希望的方法。
白藜芦醇降低心脏TNF-α表达和NF-κB活化
白藜芦醇抑制LPS激活的脑巨噬细胞小胶质细胞产生TNF-α(4). 它还消除了吸烟诱导的大鼠颈动脉TNF-α上调(7). 我们证明，2型糖尿病小鼠心脏组织中TNF-αmRNA和蛋白表达升高，白藜芦醇抑制2型糖尿病患者TNF-(). 白藜芦醇的TNF-α抑制作用可能有助于其心脏保护作用，因为TNF-β已被证明是心力衰竭患者的预后标志物。依那西普是一种可溶性TNF-α受体拮抗剂，在安静诱导的心力衰竭犬模型中，在进行性LV功能障碍中减弱LV扩张并恢复EF(23). TNF-α拮抗剂在心力衰竭临床治疗中的作用存在争议。临床研究(20)在一项多中心、随机、安慰剂对照临床试验中，显示抗肿瘤坏死因子-α治疗对慢性心力衰竭患者缺乏益处。尽管有这些发现，仍需进一步研究，以确定个体化剂量的抗肿瘤坏死因子-α治疗是否会通过治疗早期心脏功能障碍患者而产生有益效果，然后才能得出任何最终结论(24).
白藜芦醇不仅抑制TNF-α的表达，还抑制NF-κB的活化。我们的研究表明，IκB-α的总表达在勒普数据库小鼠，而IκB-α磷酸化和NF-κB p65表达升高(). 白藜芦醇抑制磷酸化IκB-α和NFκB p65的表达，但不影响细胞内总IκBα的表达勒普数据库老鼠(). 这些结果表明，白藜芦醇通过阻止IκB-α的磷酸化来抑制NF-κB的活化，从而消除NF-κ的活化所诱导的下游信号传导。
白藜芦醇对NO生成和eNOS表达的影响
激动剂刺激冠状动脉内皮内eNOS释放NO对心肌细胞产生旁分泌作用，主要影响舒张时间和心肌O2消费(32). eNOS在心肌细胞内的自分泌作用可能包括调节基础肌力和舒张、β-肾上腺素能反应性以及力-频率关系(32). 电子NOS−/−小鼠不仅患有高血压，而且具有收缩功能增强和舒张功能降低的特点，而没有左心室肥大(30). 此外，NOS抑制剂对基础NO生成的抑制N个G公司-一甲基-我-精氨酸显著损害左室舒张充盈(6). 这表明来自eNOS的NO有助于心肌舒张(29).
在压力过载诱导的心肌肥大大鼠模型中，eNOS和氧化还原因子-1的表达显著降低。白藜芦醇增加eNOS和氧化还原因子-1的表达，改善舒张松弛(16). 我们的结果表明，20 mg·kg剂量的白藜芦醇−1·天−1eNOS蛋白表达增加勒普数据库老鼠()，这与心肌亚硝酸盐/硝酸盐水平升高有关，这是NO产生的一个参数(). 此外，数据库TNF−/数据库TNF−和勒普数据库经MG-132治疗的小鼠表现出eNOS蛋白表达升高，而eNOS表达在m-勒普数据库重组TNF-α治疗小鼠()表明白藜芦醇可能通过抑制TNF-α-NF-κB信号传导影响eNOS的表达。因此，白藜芦醇在改善糖尿病小鼠心脏充盈方面的益处可能通过增强eNOS衍生NO的生成来改善心肌病。
白藜芦醇对NAD（P）H氧化酶亚单位表达、NAD（P）H氧化酶激活和随后O2·−生产
eNOS产生的NO不能准确反映NO的可用性，因为ROS对NO的灭活被认为是NO生物利用度降低的关键机制(5). 之前的研究(36)提示左室舒张功能与氧化应激有关。因此，我们评估了糖尿病小鼠心脏组织中的氧化应激。尽管存在多种活性氧来源(13,14)在过去的十年中，已经表明ROS的主要心血管来源，特别是在血管系统中，来自NADPH氧化酶家族。
我们以前的研究(11,12)已经表明数据库TNF−/数据库TNF−和MG-132处理勒普数据库小鼠冠状动脉NAD（P）H氧化酶活性降低。本研究表明，NAD（P）H氧化酶活性在心脏组织中升高勒普数据库小鼠，而数据库TNF−/数据库TNF−和MG132-处理勒普数据库小鼠NAD（P）H氧化酶活性改善(B） ●●●●。O（运行）2·−年产量提高勒普数据库小鼠和NAD（P）H氧化酶抑制剂apocynin降低O2·−生产恢复到m-Lepr公司数据库这表明NAD（P）H氧化酶可能是O的主要来源之一2·−糖尿病小鼠心脏组织的产生(). 白藜芦醇抑制NAD（P）H氧化酶活性和随后的O2·负极可能通过抑制TNF-α诱导的NF-κB活化而产生。
经典的NADPH氧化酶复合物包括膜结合的细胞色素b条558（由一个gp91组成荧光粉亚单位和一个p22凤凰（phox）亚单位），形成酶的催化核心，以及四个细胞溶质调节亚单位（p47凤凰（phox），第67页凤凰（phox），第40页凤凰（phox）和Rac）(19). 通用条款91凤凰（phox）是自gp91缺失以来NAD（P）H氧化酶介导的氧化应激中最重要的亚单位之一凤凰（phox）严重抑制激活的O2·−生产(1). 我们确定gp91凤凰（phox）糖尿病小鼠蛋白质和mRNA表达升高(,A类和B类)，而p22凤凰（phox）和第67页凤凰（phox）蛋白质表达在m-勒普数据库和勒普数据库小鼠（数据未显示）。白藜芦醇大大降低gp91凤凰（phox）mRNA和蛋白表达，表明白藜芦醇可能通过阻断NAD（P）H氧化酶亚基gp91而消除NAD（P）H氧化酶的激活凤凰（phox）表达式。免疫荧光染色显示gp91凤凰（phox）主要与心脏组织中的内皮细胞和巨噬细胞共存(). 因此，抗氧化作用可能有助于白藜芦醇通过舒张LV发挥心脏保护作用。
白藜芦醇对iNOS表达及后续硝化应激的影响
iNOS是由炎症细胞因子诱导的，与组成型NOS相比，iNOS产生的NO水平要高得多(43). 心肌细胞以及心肌内的许多其他实质细胞，包括冠状动脉微血管内皮、心内膜和浸润性炎症细胞，都能够表达iNOS以响应可溶性炎症介质(2). 最近的一项研究(43)表明iNOS产生的病理性NO浓度可能通过产生强大的硝化分子过氧亚硝酸盐（ONOO）而导致硝化应激和组织损伤−). 有条件靶向心肌表达人iNOS cDNA的转基因小鼠模型显示iNOS上调，导致ONOO的产生增加−这些小鼠很少出现明显的心力衰竭，但由于缓慢心律失常导致的心源性猝死发生率很高(25). 心肌再灌注损伤增加了iNOS的表达和随后产生的RNS（N-Tyr），这可以通过使用1400W（选择性iNOS抑制剂）或M-40401（ONOO）进行预处理来预防−清道夫(39). 因此，硝化应激和过氧亚硝酸盐在糖尿病心肌病的发病机制中起着至关重要的作用(26,27). 我们的研究表明iNOS在心脏组织中的表达增强勒普数据库小鼠，同时存在过量O的N-酪氨酸表达升高2·−iNOS抑制剂1400W逆转了增加的N-酪氨酸表达，表明iNOS在糖尿病心肌细胞中增加RNS生成中的作用(). 因此，我们推测，白藜芦醇降低心脏N-酪氨酸表达的作用可能部分解释为其抑制iNOS表达的作用(). 尽管与对照组相比，糖尿病小鼠心脏组织中iNOS的表达增加，但对照组和糖尿病小鼠主动脉中iNOS蛋白的表达没有差异（数据未显示）。此外，50-kDa N-酪氨酸蛋白在糖尿病小鼠心脏中的表达比对照小鼠高10倍以上，而在糖尿病小鼠主动脉中的表达仅是对照小鼠的3倍(49)支持2型糖尿病小鼠心脏组织中更显著的硝化应激的观点。
人肝（AKN-1）和人肺（A549）上皮细胞系中TNF-α诱导的iNOS基因表达都需要NF-κB的激活(40). 我们发现了数据库TNF−/数据库TNF−和勒普数据库MG-132治疗的小鼠表现出iNOS表达降低，而iNOS的表达在m-Lepr公司数据库抗肿瘤坏死因子-α治疗小鼠与对照组m-Lepr公司数据库老鼠(). 这些结果表明，TNF-α诱导的NF-κB活化可能上调糖尿病小鼠心脏组织iNOS的表达。
白藜芦醇调节NO和O的失衡2·−2型糖尿病
心脏内皮细胞和心肌细胞之间存在复杂的旁分泌相互作用。心脏内皮细胞释放（或代谢）几种扩散因子，这些扩散因子对心肌细胞功能产生直接影响，与冠脉流量的变化无关(33). 由于心脏微血管内皮细胞和心室肌细胞之间的扩散距离较短（<1μm），NO在旁分泌/自分泌途径中的作用是活跃的(38). 在病理情况下，由eNOS衍生的NO产生的NO的有益作用会因ROS的生成减少或失活增强而减弱。iNOS产生过量NO也会产生NO的有害影响，通常伴随着ROS和ONOO的同时产生−形成(33). 因此，NO和ROS生成之间的平衡是心血管系统病理生理状态的主要因素。
白藜芦醇抑制NAD（P）H氧化酶衍生的O2·−以及iNOS衍生NO，但刺激eNOS衍生的NO生成。这可以防止心脏氧化/硝化应激，并提高NO的可用性。因此，通过调节NO和ROS之间的失衡，白藜芦醇被认为在改善糖尿病心脏的氧化/硝化应激和随后的组织损伤方面是有效的。
结论
总之，糖尿病小鼠心脏功能的MRI评估支持了2型糖尿病动物模型中糖尿病心肌病的存在。16周龄糖尿病小鼠的收缩功能明显降低，舒张功能异常。重要的是，糖尿病心脏的收缩和舒张功能障碍与心肌肥厚无关，因为测量的壁厚（数据未显示）和计算的LVM没有增加(). 这种改变与TNF-α表达增强、NF-κB活化和NF-κ子B下游信号传导同时存在，这有助于氧化/硝化应激的持续存在以及NO可用性的降低。白藜芦醇治疗的结果勒普数据库小鼠表现出正常的舒张功能，这表明通过药物干预来提高NO的利用率和抑制氧化/硝化应激可能会减少糖尿病引起的心脏功能障碍。我们认为白藜芦醇在糖尿病心肌病早期恢复心脏功能方面具有潜在的药理作用。
