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癌症生物治疗。作者手稿；PMC 2009年11月3日提供。
以最终编辑形式发布为：
癌症生物治疗。2005年5月；4(5): 548–554.
2005年5月12日在线发布。 数字对象标识：10.4161/cbt.4.5.1663
预防性维修识别码：PMC2771924型
尼姆斯：NIHMS147166标准
PMID：15846069

不朽癌症转移的复杂性快速尸检获得的致死性转移性胰腺癌的遗传特征

埃尔琳达·E·恩布斯卡多，1 丹尼尔·拉赫鲁，2 弗朗西斯卡·里奇，4 Ki Jung Yun（基正云），1 斯特恩·德·布姆·威策尔，1 艾利森·塞格尔，1 凯蒂·弗利金格，1 曼努埃尔·伊达尔戈，2 G.史蒂文·波娃，1,三和克里斯汀·亚科布齐奥·多纳休1,2,*
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

事实上缺乏特征明确的胰腺癌转移组织供研究，这限制了对这种致命疾病转移过程的系统研究。为了解决这一重要问题，我们制定了一项快速尸检方案，用于收集转移性胰腺癌患者的高质量组织，称为胃肠道肿瘤快速医疗捐赠计划（GICRMDP）。在编写这份手稿时，20名转移性胰腺癌患者和1名转移性结肠癌患者已经接受了与GICRMDP相关的快速尸检。这21名患者获得的平均时间间隔为8.0小时，迄今为止获得了500多个匹配的高质量原发性和转移性胰腺癌组织、腹膜/胸膜液和血液样本。对于头四名尸检时间不到6小时的患者，我们成功地将原发肿瘤和/或两到四个来自不同靶器官部位的独立匹配转移瘤异种移植，前26例异种移植瘤的移植率几乎为60%。在初步调查中卡拉斯2，TP53型和DPC4（DPC4）致命转移性胰腺癌的基因状态，激活卡拉斯282%的病例检测到突变，并且失活TP53型55%的病例发生突变，与早期胰腺癌中这些基因的遗传改变率一致。然而，DPC4（DPC4）75%的患者被检测到失活，这表明DPC4型肿瘤抑制基因继续被选择用于在原发部位生长和转移到其他器官。GICRMDP的成功所产生的宝贵组织资源将为研究转移性胰腺癌和一般转移过程提供无与伦比的资源。

关键词：转移、胰腺癌、尸检、异种移植、，DPC4（DPC4），TP53型

介绍

胰腺癌几乎是一种致命的疾病。2003年，在美国，估计有31000名患者被诊断患有胰腺癌，估计有3.1万名患者死于胰腺癌。1与胰腺癌相关的惨淡预后很大程度上是由于大多数患者被诊断为疾病晚期。80%的胰腺癌患者不适合手术切除，因为他们在诊断时患有转移性疾病，70%接受手术切除的患者在切除标本中发现有转移。2几乎所有胰腺癌患者都会死于转移性疾病，这并不奇怪。三

化疗和放疗对转移性胰腺癌患者的益处有限。吉西他滨是目前治疗晚期疾病患者的标准药物，但在少数患者中表现出临床疗效。三-5确定在该治疗方案中添加第二种细胞毒性药物或放射治疗的效用的临床试验表明，无病生存率略有改善，报告的一年生存率达到20-40%。三，6显然，如果我们要影响患者的生存，迫切需要更好地了解转移性胰腺癌。

在过去十年中，我们对胰腺癌发生的分子生物学的理解取得了巨大进展。早期胰腺癌研究发现，染色体臂9p、18q、17p、1p和6q在一系列异种移植的原发浸润性胰腺癌中具有较高的等位基因丢失率。7部分基于这些发现，肿瘤抑制基因第16页(CDKN2A型)在染色体9p上，DPC4型(SMAD4、MADH4)在染色体18q上，MKK4型在染色体17p上，STK11/LKB1在染色体19p上，和巴西航空公司2在原发性胰腺癌中，13q号染色体被鉴定为失活。8最近，在原发性浸润性胰腺癌中发现范科尼贫血基因家族成员的基因失活，这对一部分有这些突变的患者对丝裂霉素C的化疗反应具有重要意义。9，10

虽然上述关于原发性胰腺癌的研究结果明显代表了我们对该疾病认识的重大进步，但这些研究都是针对可手术切除的原发性胰脏癌进行的，因此代表了诊断为胰腺癌的少数患者。此外，实际上缺乏特征明确的胰腺癌转移组织供研究，这限制了对转移过程的系统研究。为了解决这些重要问题，我们制定了一项快速尸检方案，用于收集转移性胰腺癌和结直肠癌患者的高质量组织，称为胃肠道肿瘤快速医疗捐赠计划（GICRMDP）。该程序与其他用于研究转移性前列腺癌的快速尸检程序类似。11本文介绍了关于患者招募、转移性疾病的临床病理特征、异种移植物形成率的初步研究结果，以及关于转移性疾病发生率的初步数据卡拉斯2激活和TP53型和DPC4（DPC4）致命转移性胰腺癌的基因失活。

材料和方法

招募患者志愿者

胃肠道癌症快速医疗捐赠计划（GICRMDP）于2003年2月在约翰霍普金斯医院成立。该计划由约翰·霍普金斯机构审查委员会（The Johns Hopkins Institutional Review Board）批准，并被视为符合《健康保险便携性和责任法案》（Health Insurance Portability and Accountability Act，HIPAA）。任何有转移性胰腺癌活检或放射学证据的患者都有资格参加。患者直接从约翰霍普金斯医院（D.L.，M.H.）的医学和放射肿瘤学诊所招募，或通过约翰霍普金森胰腺癌网页自行咨询(http://pathology2.jhu.edu/pancreas/endoflife（http://pathology2.jhu.edu/pancreas/endoflife）). 对于通过肿瘤诊所确定的患者，讨论参与研究的决定是基于牢固的医患关系和临床医生对患者情绪状态的评估。一旦患者被转诊至GICRMDP，将提供有关该研究的适当口头和书面信息，并获得知情同意，以便进行快速尸检，并获得所有过去的医疗记录和以前切除的手术组织的副本。在可能的情况下，在患者配偶和/或近亲在场的情况下讨论研究和知情同意。尸检的最终许可权仍在患者死亡时的近亲手中。当患者死亡时，患者的近亲立即通知GICRMDP团队。在即将进行尸检时，该小组的所有成员每天24小时/每周7天随时待命。

快速尸检的表现

约翰霍普金斯医院的快速尸检程序遵循有组织的团队方法。该团队包括一名获得董事会认证的病理学家（C.I.D.或G.S.B.）和医生助理（K.F.），负责采集所有正常和癌症组织，以及另外四名团队成员（E.E.E.、S.dB.W.、F.R.、K.J.Y.），负责组织处理、标记和异种移植选定的肿瘤组织。

组织采集协议包括以下内容：；使用标准技术打开体腔后，使用无菌刀片和镊子（每个肿瘤一套）对大约50%的原发肿瘤和每个大体确定的转移瘤进行取样，小心避免出现明显的坏死或出血区域。将肿瘤组织切成1.0×1.0×0.2 cm的切片，在10%缓冲福尔马林或75%3:1乙醇：甲醇中过夜固定，用于石蜡包埋，在液氮中的OCT培养基中冷冻并在-80°C下保存，或在1.5 ml冷冻瓶中的液氮中冷冻snap并在-8°C下存储。对于存在腹膜腹水和/或胸腔积液的患者，在无菌条件下收集50 ml，并储存在-80°C下。在所有情况下，还采集正常肝、肺和脾的样本进行上述处理，并从右心房采集10毫升全血。

如果一名自救患者死于不适合送往the Johns Hopkins Hospkins医院的地理位置，则组织采集和尸检程序由一名认证病理学家在当地医院进行，该医生与GICRMDP合作提前安排。在这些情况下，进行有限的采集，将正常、原发和/或转移性肿瘤组织的每个样本一分为二，在干冰上进行snap冷冻，并在10%缓冲福尔马林中固定。

在所有情况下，组织采集后都要进行标准的完整诊断尸检，不受同意书中规定的任何限制。尸检时分配的每个样本的唯一标识符被输入Access关系数据库，其中包括与患者医疗和手术史相关的所有临床病理信息，药物、影像学研究、病理学和尸检结果。

胰腺癌异种移植物的建立

对于在约翰霍普金斯医院进行快速尸检的患者，缺血间隔<6小时，2至3毫米三将每个原发浸润癌和4-8个不同转移瘤的样本放入无菌RPMI培养基（Invitrogen，Carlsbad，CA）中，运输至动物设施，以异种移植到CD1 nu/nu小鼠中。在所有情况下，都要小心获取完全可行的组织。异种移植按照Hahn等人的描述进行。7用无菌刀片将肿瘤组织切成1毫米三Matrigel（Becton Dickinson，Bedford，MA）中的个数，以及一到两毫米三当小鼠处于异氟醚吸入麻醉下时，将组织植入双侧肩部皮肤皱褶下。植入部位用一条6.0铬缝线封闭。每周跟踪动物进行异种移植生长，当异种移植达到1.0–1.5厘米时收获。将采集的肿瘤存放在-80°C的温度下，并将一小块异种移植瘤（1–3 mm2)将其植入一只新的小鼠体内，使异种移植永久化。

组织显微解剖

对于无法获得异种移植富集肿瘤的胰腺癌，如前所述，对原发癌或转移癌组织进行显微切割以富集肿瘤细胞。12，13只有能够获得至少50%肿瘤细胞的样本才能用于遗传研究。

PCR和测序卡拉斯2，第53页和DPC4（DPC4）

使用DNeasy试剂盒（加利福尼亚州巴伦西亚Qiagen）从异种移植富集或显微切割胰腺癌中提取基因组DNA。第1外显子的PCR扩增KRAS公司，外显子5-9TP53型和第1-11外显子DPC4（DPC4）根据所述从基因组DNA中提取。12，14，15使用QIAquick柱（Qiagen）纯化PCR-扩增产物，并使用嵌套引物和ABI Prism模型3700（加利福尼亚州福斯特市应用生物系统公司）进行自动测序。序列分析采用Sequencer™4.0.5版软件（基因编码，密歇根州安阿伯）。通过对独立于原始模板的第二个PCR产物进行测序来验证突变。

Dpc4蛋白的免疫组织化学

参与GICRMDP的每位患者的福尔马林固定组织按照标准技术进行石蜡包埋。如前所述，还从约翰霍普金斯医院尸检病理档案中获取了19名患者的转移性胰腺癌档案样本。16在所有情况下，未染色5-M（M）从石蜡块上切下m个切片，采用常规技术脱蜡，然后在80°C、pH值为6.0的柠檬酸钠缓冲液中蒸20分钟。将载玻片冷却15分钟，并使用DAKO自动染色器（DAKO，Carpintia，CA）与1:100稀释的Madh4蛋白单克隆抗体（克隆B8，Santa Cruz Biotechnology）孵育。用二级抗体检测一级抗体，然后检测亲和素-生物素复合物和3，3′-二氨基联苯胺色氨酸。切片用苏木精复染，并由两位作者（E.E.E.和C.I.D）进行评估。

统计

除非另有说明，否则汇总数据表示为平均值±S.D。采用卡方检验分析局部原发癌和晚期不可切除癌中Dpc4免疫标记的频率。概率值0.05被认为是显著的。

结果

患者的临床病理特征

作为GICRMDP的一部分，首批21名接受尸检的患者总结如下表1平均年龄为65.4±8.1岁，其中男性16例，女性5例。所有21名患者均为白人。17名患者在诊断时有临床明显的转移性疾病（临床阶段IV），4名患者在确诊时接受了胰十二指肠切除术（临床阶段III，患者A16、A19、A20、A21），但后来出现局部复发和转移性疾病。从诊断到死亡的平均时间为16.0个月（范围为0.5-45个月）。

表1

患者的临床病理特征
案例年龄/性别原发性肿瘤病理诊断存活率缺血时间死亡原因治疗转移总数b条
A1类84华氏度胰腺腺癌6个月6小时肝脓肿、败血症不适用一∼10
A2类6200万胰腺腺癌6个月5小时肝衰竭TP（转移定价）>1000
A3号68英尺胰腺具有粘液特征的腺癌11个月20小时支气管肺炎G、 加州、DO、H、CY∼100
A4（A4）7000万科隆粘液腺癌38个月4小时肝脏和肾脏5-FU、L、CA、O故障∼10
第5页48华氏度胰腺腺癌9个月2小时脓毒症G、 P、CA、XRT0
A6级5800万胰腺腺癌10个月2小时肝衰竭G、 信托收据>1000
答77000万胰腺腺癌45个月1小时局部晚期疾病的并发症5-FU，XRT，加利福尼亚州∼10
A860华氏度胰腺腺癌4个月1小时支气管肺炎G公司∼10
答960华氏度胰腺腺癌8个月3小时支气管肺炎CA、G∼10
A10号机组6000万胰腺腺癌2个月2小时多器官衰竭无需治疗>100
答116300万胰腺腺癌21个月18小时局部晚期疾病的并发症G、 TX、XRT∼10
第12页5700万胰腺腺癌不适用17小时局部晚期疾病的并发症加利福尼亚州三
答136000万胰腺腺癌8个月3小时支气管肺炎无需治疗∼100
答146000万胰腺腺癌12个月24小时头部创伤不适用∼100
答156500万胰腺腺癌0.5个月24小时转移性胰腺癌无需治疗∼50
答166600万胰腺具有粘液特征的腺癌36个月2小时不适用5-FU、G、DO、CA、I∼10
答1751楼胰腺腺癌5个月3小时转移性胰腺癌无需治疗∼100
答187100万胰腺腺癌42个月12小时转移性胰腺癌5-FU、G∼50
第19页5200万胰腺腺癌12个月4小时脓毒症5-FU、XRT0
A20型5500万胰腺腺癌22个月2小时转移性胰腺癌/败血症G、 CI公司∼25
答216800万胰腺腺癌23个月5小时转移性胰腺癌G、 CI、O∼100
一NA，不可用；CA，卡培他滨/希罗达；CI，顺铂；CY，环磷酰胺/环磷酰胺；DO、多西他赛/紫杉醇；5-氟尿嘧啶；G、 吉西他滨；H、 赫赛汀；一、 艾瑞莎/杰芬蒂布/ZD1839；五十、 白血病病毒素；O、 奥沙利铂；TP、Taxoprexin；TR，屈沙坦/屈沙坦；TX，紫杉醇/紫杉醇；XRT，放射治疗。
b条基于射线照相数据和尸检时的大体印象的近似值。

所有病例从死亡到尸检的平均时间间隔为8.0小时（中位数为3小时，范围为1-24小时）。在所有情况下，尸检延迟（>6小时）都是由于无法避免的运输限制，无法运送到进行手术的设施。在所有病例中，尸检组织的大体和组织学检查证实了原发性浸润性胰腺癌或结肠腺癌的诊断。在20例胰腺癌患者中，16例原发癌位于胰头，3例位于胰尾，1例弥漫性累及整个腺体。18例癌分化不良，1例癌分化较差，有粘液分化灶，1例中分化至高分化，有粘质特征。

晚期胰腺癌患者的晚期疾病模式

胰腺癌转移扩散的模式在一些大型回顾性研究中已有报道。17，18我们对这20名患者转移性胰腺癌疾病负担的研究结果与这些报告一致。20名患者中有17人出现转移性疾病的大体证据，平均涉及2.9±2.8个靶器官。正如预期的那样，转移性疾病最常见的器官是肝脏（17例患者中16例，94%），其次是肺部（17例中8例，47%）、腹部淋巴结（17例病人中7例，41%）和腹膜/网膜（17例病例中7例（41%）。部分患者累及胸淋巴结（17例患者中5例，占29%）和肾上腺（17例中4例，占21%），而心血管、生殖和泌尿生殖系统是这组患者中最不常见的累及部位。在一名患者（A8）中，肺部和主动脉旁淋巴结链是主要的转移部位，肝脏中没有发现明显的疾病证据。

从尸检组织中制造异种移植瘤

除了我们的目标是为了研究目的从转移性胰腺癌患者身上获得特征良好的高质量组织外，我们还成功地创建了异种移植瘤组织，用于与胰腺癌转移相关的分子遗传学的深入研究(表2和图1). 对于5名在6小时内开始快速尸检的患者（A2、A5、A6、A10和A13），将原发性和/或转移性肿瘤组织的样本异种移植到裸鼠体内。从这些患者身上共移植了30个个体肿瘤组织，代表了5种原发癌和24种不同的转移瘤。异种移植术后不久，两只小鼠死亡，剩下28只小鼠用于研究。使用每个肿瘤一只小鼠和每个小鼠两个插入位点，这28个肿瘤中的16个（57%）在裸鼠体内成功生长为异种移植瘤，代表三种不同的原发肿瘤和十二种不同的转移瘤。这16个异种移植瘤从植入到收获的平均时间为4.4±1.2个月。

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快速尸检获得的转移性胰腺癌组织异种移植瘤的建立。（A） 从A2患者的快速尸检中获得的低分化胰腺癌转移到肺（直径1.0 cm）。（B） 异种移植瘤组织A2.4由（A）所示的相同转移性胰腺癌创建。

表2

快速尸检材料异种移植瘤的生长特性
案例病理位置异种移植的状态一收获的时间到了
答2.1转移肝脏成年的3个月
答2.2转移肝脏成年的3个月
答2.3转移肝脏成年的2.5个月
答2.4转移肺成年的4个月
答2.5主要胰腺老鼠死了
答2.6主要胰腺成年的7.5个月
第5.13页主要胰腺没有增长
第5.14页主要胰腺没有增长
A6.答转移肝脏没有增长
A6.C类转移Omentum公司老鼠死了
A6.E转移肝脏成年的4个月
A6.G类主要胰腺成年的4个月
A6.一转移淋巴结没有增长
A6.升转移肝脏成年的4个月
A10.1标准转移肝脏成年的3.5个月
A10.2标准转移肝脏没有增长
A10.3标准转移肝脏没有增长
A10.4标准转移肝脏成年的5个月
A10.5标准转移肝脏成年的5个月
0.6澳元转移肝脏没有增长
A10.7标准转移肝脏成年的3.5个月
A10.8页主要胰腺没有增长
答13.A主要胰腺成年的5个月
A13.B类主要胰腺成年的5个月
A13.C类转移淋巴结没有增长
A13.D（A13.D）转移肺成年的5个月
A13.E公司转移肝脏没有增长
A13.F（A13.F）转移肝脏没有增长
A13.G（A13.G）转移淋巴结没有增长
A13.小时转移淋巴结成年的5个月
一命名为生长，异种移植瘤达到至少1.0 cm的大小限制并被收获；12个月时无生长。

的突变卡拉斯2，TP53型和DPC4（DPC4）转移性胰腺癌

GICRMDP的最终目标是确定与致命癌症转移相关的分子或遗传事件。为此，我们对卡拉斯2，TP53型和DPC4（DPC4）在我们的病例子集中，可以获得高质量基因组DNA（肿瘤细胞数至少为50%）的遗传改变(表3). 对来自11名患者的22个样本进行了分析，这些患者分别代表6种原发癌和20种不同的胰腺癌转移。对这11名患者中的7名患者进行了2到4种不同的转移分析。

表3

致死性转移性胰腺癌的遗传特征
TP53型DPC4（DPC4）
样品病理卡拉斯2外显子效应预测突变类型遗传学IHC影响预测
A1.L2级肝转移G12D系列5175H兰特错义无突变消极的高密度聚乙烯b条
A1.L3级肝转移第一5175H兰特错义无突变消极的高密度聚乙烯
答2.1肝转移G12D系列5T155P型错义高清消极的高清
答2.2肝转移G12D系列5T155P型错义高清消极的高清
答2.3肝转移第12天5T155P型错义高清消极的高清
答2.4肺转移G12D系列5T155P型错义高清消极的高清
答2.6原发性癌症G12D系列5T155P型错义高清消极的高清
A3.5型肝转移第5176立方英尺错义无突变消极的高密度聚乙烯
A3.8页肝转移G12伏6176立方英尺错义无突变消极的高密度聚乙烯
答6.E肝转移重量7L257P型错义高清消极的高清
A6.G类原发性癌重量7L257P型错义高清消极的高清
A6.升肝转移重量7L257P型错义高清消极的高清
A10.1标准肝转移G12D系列重量高清消极的高清
A10.4标准肝转移G12D系列重量高清消极的高清
A10.5标准肝转移G12D系列重量高清消极的高清
107澳元肝转移G12D系列重量高清消极的高清
A11.14号机组肝转移G12D系列重量无突变消极的酸碱度
答12.46肝转移G12D系列7R249I型串联无突变消极的高密度聚乙烯
A12.72号机组淋巴结转移G12D系列7R249I型串联无突变消极的高密度聚乙烯
答13.A原发性癌G12伏重量重量积极的重量
A13.B类原发性癌G12伏重量重量积极的重量
A13.D（A13.D）肺转移G12伏重量重量积极的重量
A13.高淋巴结转移G12伏重量重量积极的重量
答14.41原发性癌重量重量无突变消极的高密度聚乙烯
答15.63肝转移重量重量无突变消极的高密度聚乙烯
2017年7月14日原发性癌G12D系列7R249I型串联无突变消极的高密度聚乙烯
一nd，未确定。
b条pHD，假定纯合子缺失。

激活的突变卡拉斯2和灭活TP53型是胰腺癌发生中最常见的遗传事件。14，19，20激活的突变卡拉斯2在11例患者的肿瘤中有9例（82%）被发现，所有病例的密码子为12，而TP53型11例患者中有6例（55%）发现了进化保守域内的癌症。14在所有七个分析了一名以上患者样本的病例中卡拉斯2或TP53型原发癌和/或所有匹配转移瘤的突变都是一致的(表3). 所有最初在异种移植瘤（患者A2、A6、A10和A13）中发现的突变均在来源于异种移植的原始癌组织的显微解剖获得的基因组DNA中得到证实。在两个病例（A14和A15）中，未发现卡拉斯2或TP53型尽管PCR扩增了从两个或多个独立的高质量组织显微解剖中获得的基因组DNA。

DPC4型是一种肿瘤抑制基因，在所分析的手术切除胰腺癌中约55%失活。15作为DPC4（DPC4）失活是通过纯合子缺失，21由于样本中的正常细胞DNA可能会放大和掩盖发现，因此使用显微解剖组织不可能通过扩增失败来筛查基因缺失。为了解释这种可能性，我们对DPC4（DPC4）并对同一组织中的Dpc4蛋白进行免疫组织化学标记。石蜡包埋组织中Dpc4蛋白的免疫标记已被描述为一种可靠的标记DPC4（DPC4）基因。22

在四种异种移植物富集癌中DPC4（DPC4）在四个病例中有三个病例被发现。这三种癌症的Dpc4标记也为阴性（病例A2、A6和A10），而一个没有缺失或基因内突变的病例显示Dpc4蛋白的强阳性标记（病例A13）(图2). 在仅有显微解剖材料的七名患者中，在整个编码区内未发现基因内突变。然而，所有7例癌均显示Dpc4蛋白的免疫组化标记完全丢失，与DPC4（DPC4）当与四种异种移植物富集癌结合时，在11例患者的原发癌和/或转移癌中有10例（91%）发现Dpc4失活。

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转移性胰腺癌的Dpc4免疫标记。（A和B）Dpc4免疫标记阳性在原发癌（A）和患者A13的匹配肝转移（B）中均可见。（C和D）相反，在原发癌（C）和匹配的患者A6（D）肝转移中观察到Dpc4免疫标记阴性。

为了排除DPC4（DPC4）失活与分析的患者数量无关，我们在GICRMDP的另外6名患者中测定了Dpc4免疫标记模式，这些患者有高质量的组织，以及来自约翰·霍普金斯医院尸检档案的另外19名广泛转移性胰腺癌患者的档案材料。当与最初的11名患者合并时，在17名患者中有13名（76%）从GICRMDP获得的转移性胰腺癌组织中发现Dpc4免疫标记缺失，在19名患者中14名（71%）从档案材料获得的转移疾病中发现Dpc4免疫标记丢失。Wilentz等人报告的手术可切除胰腺癌中Dpc4缺失频率的比较。23与我们观察到的晚期不可切除疾病（36例转移癌中27例免疫标记阴性，75%）的比率相比（41例肿瘤中22例免疫标记为阴性，54%），表明晚期疾病中发现的Dpc4失活率增加具有统计学意义（p<0.05）。

讨论

为了评估胰腺癌中已经描述的细胞变化的重要性，并为未来转移性胰腺癌的研究提供坚实的基础，研究已经导致显著发病率和死亡率的胰腺癌是绝对重要的。这些材料的主要来源是对死于转移性胰腺癌的男性和女性进行尸检。通过成功建立GICRMDP获得的高质量组织，以及制造异种移植瘤的能力，将允许对转移性胰腺癌进行与手术切除疾病类似的质量分析，包括与胰腺癌转移相关的基因改变或辅助治疗失败的分子生物学相关性等。

虽然这项研究代表了对转移性疾病传播的初步调查，但我们注意到疾病负担的差异部分与死亡原因有关，类似于Nakahashi等人。24具体而言，有四名患者（A2、A6、A17和A21）表现出肝脏广泛转移，因此死亡直接由肝衰竭引起。相比之下，尽管有广泛的转移扩散到其他部位，但8名患者的死亡原因与原发肿瘤明显扩展到邻近重要结构（如A1、A3、A5、A7、A8、A11、A12、A15）有关。最后，对于6名患者，没有发现疾病负担与死亡原因之间的明显关系。在这些病例中，发病率和死亡率似乎与全身多器官衰竭和恶病质有关（例如A9、A10、A13、A18、A19、A20）。两名患者的最终死因未知或与其疾病无关（A14和A16）。研究中每个患者的完整治疗史的可用性为将这些观察结果与化疗史联系起来提供了宝贵的机会。关于这些生长模式的转移过程的其他研究将确定这些观察的意义（如果有的话）。

异种移植瘤在原发性胰腺癌研究中的应用是前所未有的。7，9，21，25-27我们创造异种移植富集转移瘤的能力将允许对与晚期疾病相关的遗传事件进行类似的研究。我们建立的来自转移瘤的异种移植瘤的生长速度比来自同一患者的匹配原发癌的肿瘤更快（平均4.0个月vs 5.4个月），这表明肿瘤细胞克隆的选择在生长特征上比原发肿瘤克隆更自主。然而，由于异种移植瘤已从一大批局部可手术切除的胰腺癌中成功生长出来，7这些转移瘤的生长速度加快可能部分反映了它们在体内的生长特征。至少，有必要进一步研究这些差异。

虽然许多研究都集中于原发性浸润性胰腺癌的基因改变，但很少有研究涉及晚期疾病的特征性事件。我们的调查结果卡拉斯282%的人激活突变TP53型55%晚期癌症的基因失活率与之前报道的比率一致，14，19，20并支持这两个基因在胰腺癌发生早期的遗传改变。相反，我们的数据表明DPC4（DPC4）晚期转移性疾病的发病率高于手术切除的原发浸润性胰腺癌，在75%的转移性肿瘤中失活（p<0.05）。The increased rate ofDPC4型晚期疾病中的失活进一步支持了该抑癌基因在胰腺癌生物学和侵袭性中的突出作用。此外，数据表明DPC4（DPC4）随着肿瘤进展，灭活继续被选择，这一发现对旨在恢复该肿瘤类型中TGF-β信号转导通路的抗癌治疗具有重要意义。28有趣的是，在我们通过免疫组织化学标记检查的所有病例中，原发癌和所有匹配的转移瘤都显示出相同的Dpc4免疫标记模式（数据未显示）。虽然这一发现可能被解释为支持了一种假说，即在原发性肿瘤中，显性转移克隆会向外生长，并成功扩散到远处，29仅根据这些数据，我们不能排除原发性肿瘤固有的转移能力这一相互竞争的假设。30，31至少，我们发现原发性胰腺癌和转移性胰腺癌之间的Dpc4免疫标记丢失率存在显著差异，这支持利用这一资源来确定晚期疾病中具有生物学意义的细胞变化。

总之，我们提供了从GICRMDP快速尸检参与者收集高质量组织的初步数据。该项目产生的宝贵组织资源将为研究转移性胰腺癌和一般转移过程提供无与伦比的资源。

致谢

由NIH拨款CA106610（C.I.D.）、Joseph C.Monastra胰腺癌研究基金、Jeff Zgonina胰腺癌研究资金、Michael Rolfe胰腺癌基金会、Sol Goldman胰腺癌研究中心和旺旺大学宋山奖学金（K.J.Y.）提供支持。

工具书类

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