在转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞中，干细胞和上皮间质过渡标记物经常过度表达
,1 ,2 ,三 ,4 ,1和
1 巴里耶·阿克塔斯
1德国杜伊斯堡-埃森大学埃森大学医院妇产科55，45122
米特拉·特维斯
2德国杜伊斯堡大学埃森分校埃森大学医院内科（癌症研究），Hufelandstrasse 55，45122 Essen
坦尼娅·费姆
三德国图宾根大学医院妇产科，Calwerstrasse 7，72076 Tuebingen
齐格弗里德·豪奇
4AdnaGenAG，Ostpassage 7，30853 Langenhagen，德国
雷纳尔·基米格
1德国杜伊斯堡大学埃森分校埃森大学医院妇产科，地址：德国埃森市胡菲尔德大街55号，邮编：45122
萨宾·卡西米尔·鲍尔
1德国杜伊斯堡大学埃森分校埃森大学医院妇产科，地址：德国埃森市胡菲尔德大街55号，邮编：45122
1德国杜伊斯堡大学埃森分校埃森大学医院妇产科，地址：德国埃森市胡菲尔德大街55号，邮编：45122
2德国杜伊斯堡大学埃森分校埃森大学医院内科（癌症研究），Hufelandstrasse 55，45122 Essen
三德国图宾根大学医院妇产科，Calwerstrasse 7，72076 Tuebingen
4AdnaGenAG，Ostpassage 7，30853 Langenhagen，德国
通讯作者。 2009年4月7日收到；2009年5月15日要求的修订；2009年7月6日修订；2009年7月9日验收。
版权©2009 Aktas等人。；被许可方BioMed Central Ltd。 摘要
介绍
乳腺癌患者循环肿瘤细胞（CTC）的持续存在可能与干细胞样肿瘤细胞有关，这些肿瘤细胞被认为是原发性肿瘤转移扩散的活跃来源。此外，这些细胞也可能发生表型变化，称为上皮-间充质转化（EMT），这使它们能够在不受常规治疗影响的情况下转移到形成转移的部位。在此，我们评估了39例转移性乳腺癌患者在姑息性化疗、抗体或激素治疗的随访期间的226份血样中干细胞标记物ALDH1和EMT标记物的表达，并将这些结果与CTC的存在和治疗反应相关联。
方法
使用AdnaTest乳腺癌（AdnaGen AG）检测EpCAM、MUC-1和HER2转录物。另外，对回收的c-DNA进行三种EMT标记物[Twist1、Akt2、PI3Kα]的多重检测，并分别检测肿瘤干细胞标记物ALDH1。如果在样本中检测到至少一个标记，则认为EMT标记鉴定阳性。
结果
在被调查的30名健康供体样本中，97%的EMT和95%的ALDH1转录本为阴性。在69/226份癌症样本中检测到CTC（31%）。在CTC（+）组中，至少一个EMT标记物的阳性率分别为62%和69%。CTC（-）组的百分比分别为7%和14%。在无应答者中，62%和44%的患者出现EMT和ALDH1表达，应答者的表达率分别为10%和5%。
结论
我们的数据表明，转移性乳腺癌患者的CTC中有很大一部分具有EMT和肿瘤干细胞特征。需要进一步的研究来证明这些标记物是否可以作为耐药肿瘤细胞群的指标，因此，预后较差。
介绍
乳腺癌复发的原因是肿瘤细胞在疾病早期的血行播散，而常规分期程序无法检测到[1,2]. 虽然这些细胞的预后价值已经被几个组显示出来[三-7]据推测，肿瘤的转移潜能是基于肿瘤组织中存在的少量干细胞样肿瘤细胞，这些干细胞样细胞已被确定为转移扩散的活跃来源[8-10]. 在这方面，一项研究证实了播散性肿瘤细胞（DTC）中的假定干细胞表型[11]，另一项研究表明，大多数早期DTC都是在CD44阳性的乳腺癌患者的骨髓中检测到的+/CD24型-表型与骨转移的高发生率相关[12]. 癌症干细胞表型的一个候选标记是醛脱氢酶1（ALDH1），它是一种负责细胞内醛类氧化的解毒酶[13].
然而，转移的发展取决于多种因素，这些因素决定了肿瘤细胞的整体生长、存活、血管生成和侵袭。对于上皮性恶性肿瘤，上皮-间质转化（EMT）被认为是转移过程中的关键事件，这包括破坏上皮细胞的内稳态和获得迁移的间充质表型，使这些细胞能够在不受常规治疗影响的情况下转移到形成转移的部位[14,15]. EMT似乎由信号转导途径控制，如Wnt和转化生长因子β途径，这两者在肿瘤形成过程中都可能异常激活。一个候选基因是TWIST基因，被描述为与Akt2启动子上的E-box元件结合并增强其转录活性，因此可能与癌细胞中的EMT现象有关[16-18]. PI3Kα也参与其中，它激活Akt1和Akt2 Ser/Thr激酶，负责增殖和抗凋亡功能[19-22].
假设转移需要肿瘤干细胞或显示EMT的肿瘤细胞的传播，那么在乳腺癌患者的循环中发现的CTC中，似乎应该可以检测到这些细胞。
在这项研究中，我们评估了39例转移性乳腺癌患者在姑息性化疗、抗体或激素治疗的随访期间的226份血样中ALDH1和EMT标记物TWIST、Akt2和PI3Kα的表达，并将这些发现与CTC的存在和治疗反应相关联。
材料和方法
患者人数
该研究由埃森大学医院妇产科与内科（癌症研究）合作进行。自2007年10月以来，共对39名患者的226份血样进行了研究。
资格标准
合格患者标准如下：年龄，18岁或以上；可测量或可评估的转移性乳腺癌；预期寿命，2个月或更长时间；东部合作肿瘤组（ECOG）绩效状态得分为0至2；无严重的非受控并发症或医疗状况；无二次恶性肿瘤。
患者要么在几年前诊断出乳腺癌复发，然后开始化疗，要么在接受新的内分泌、化疗或实验治疗之前有进展性乳腺癌的记录。允许对转移性疾病进行先前的辅助治疗、放射治疗或任何其他治疗。排除标准为除乳腺癌以外的其他恶性肿瘤。所有标本均在书面知情同意后获得，并按照机构审查委员会批准的方案收集（05/2856）。
响应标准
在开始新的治疗之前，患者接受了超声、X光片或计算机断层扫描对转移部位的评估。采集血样进行实验室评估，包括测定CEA和Ca 15-3血浆水平，以及CTC的分离和表征。根据治疗计划，每8至12周使用相同的技术对疾病状态进行重新评估，直至患者死亡或死亡。
根据实体瘤的疗效评价标准（RECIST）：完全缓解（CR），所有靶病变消失；部分反应（PR），以基线总LD为参考，靶病变的LD（最长直径）总和至少减少30%；进行性疾病（PD），LD靶病变总数至少增加20%，参考自治疗开始或出现一个或多个新病变以来记录的最小LD总数；稳定疾病（SD），既没有足够的收缩来符合PR，也没有足够的增加来符合PD，参考自治疗开始以来的最小总LD。
免疫组织化学分析
根据WHO对乳腺肿瘤的分类，对39名患者中的每一位进行肿瘤类型、TNM分期和分级评估[23]第六版TNM分类系统[24]当患者首次发现原发肿瘤时。用免疫组织化学方法检测雌激素（ER）和孕酮（PR）受体的状态。用HercepTest重新评估HER2表达的DAKO评分®（达科）。用HercepTest测定2+染色病例的FISH分析®，按照其他地方的描述执行[25].
IGROV细胞系
卵巢癌细胞系购自ATCC（American Tissue Culture Collection，Rockville，MD），并在37°C、5%CO的湿润培养箱中培养2和95%的空气。细胞系保存在添加10%热灭活胎牛血清和1%青霉素/链霉亲和素（Biochrom KG，Seromed，Berlin，Germany）的RPMI培养基中。
生物材料取样
在使用S-Monovette应用治疗物质之前，采集5 ml EDTA血液的两份样本以分离CTC®（德国纽姆布雷希特Sarstedt AG&Co），并在4°C下储存，直至进一步检查。抽血后立即或不迟于4小时处理样本。对患者标本进行双重取样，以避免技术退出。然而，两个患者样本的总体符合率超过90%。
健康对照
从30名年龄在23至73岁之间的健康献血者中采集血液（5毫升），用于测定ALDH1和EMT标志物的应用测试的特异性和敏感性。
肿瘤细胞富集/选择
这226份血样取自39名转移性乳腺癌患者。这个AdnaTest乳腺癌选择（AdnaGen AG，德国朗根哈根）促进肿瘤细胞的免疫磁性富集通过上皮和肿瘤相关抗原。两种针对上皮抗原MUC1的抗体和一种针对上皮糖蛋白GA733-2（EpCAM）的抗体与磁珠（Dynabeads）结合，用于标记外周血中的肿瘤细胞。简言之，血液样本与一种现成的抗体混合物孵育，这种抗体混合物的商业化为AdnaTest乳腺癌选择，根据制造商的说明。用磁粉浓缩器（MPC）提取标记细胞。随后，根据制造商的说明，使用Dynabeads mRNA DIRECT™Micro Kit（德国卡尔斯鲁厄Invitrogen）从溶解的富集细胞中分离mRNA，该试剂盒包含在AdnaTest乳腺癌检测逆转录产生cDNA，该cDNA是通过多重RT-PCR检测和表征肿瘤细胞的模板。感官说明®逆转录酶（QIAGEN GmbH，Hilden，Germany）用于逆转录，因为根据制造商的说明，逆转录酶与mRNA DIRECT™Micro Kit的寡核苷酸（dT）偶联Dynabeads结合具有很高的敏感性（推荐用于小于50 ng RNA的量）。cDNA在热循环器中合成，条件如下：逆转录在37℃下进行60分钟，然后在93℃下进行3分钟，以使反应失活。生成的cDNA在-20°C下保存，直至进一步使用。
肿瘤细胞检测
这个前列腺癌检测用于通过反转录和PCR检测免疫磁性富集肿瘤细胞中乳腺癌相关基因的表达。采用多重PCR对三种肿瘤相关转录物HER2、MUC1和GA733-2进行CTC肿瘤细胞分离的肿瘤相关mRNA分析。用于多重RT-PCR的热曲线如下：在95℃下变性15分钟后，通过在94℃下变性1分钟，在60℃下退火/延伸1分钟，以及在72℃下延伸1分钟来进行35个PCR循环。随后，在72°C下终止反应10分钟，然后将样品储存在4°C下。
引物产生的片段大小如下：GA733-2395碱基对（bp）；MUC1，293 bp；HER2，肌动蛋白，114 bp。
AdnaTest肿瘤干细胞/AdnaTest EMT
这两项测试都需要通过使用AdnaTest乳腺癌选择前用单重PCR分析ALDH1，后用多重PCR分析EMT标记，并用肌动蛋白作为内对照。通过使用特殊的清洗程序（AdnaWash缓冲液），污染的白细胞（每个样品约1500个）减少了10倍。这使得EMT和肿瘤干细胞表达谱能够正确区分，特异性超过90%，这在健康供体样本中得到了证实。
用于EMT多重RT-PCR的热曲线如下。在95℃下变性15分钟后，通过在94℃下变性30秒，在60℃下退火/延伸30秒，以及在72℃下延伸45秒，进行35个PCR循环。随后，在72°C下终止反应10分钟，然后将样品储存在4°C下。引物产生的片段大小如下：Akt-2306 bp；扭转1203 bp；PI3Kα，595个碱基；和肌动蛋白，119 bp。
用于ALDH1单重PCR的热曲线如下。在95℃下变性15分钟后，通过在94℃下变性30秒，在51℃下退火/延伸30秒，以及在72℃下延伸30秒来执行35个PCR循环。随后，在72°C下终止反应5分钟，然后将样品储存在4°C下。ALDH1生成的片段大小为165 bp。
数据评估
使用DNA 1000 LabChips（安捷伦科技公司）和专家软件包（版本B.02.03.SI307），使用2100生物分析仪对所有PCR片段进行可视化。如果明确检测到至少一个肿瘤相关转录物的PCR片段，则该测试被视为阳性。使用安捷伦2100生物分析仪上的数据评估软件包，转录物GA733-2、MUC1和HER2的浓度>0.15 ng/μl的峰值为阳性。在此设置下未检测到的峰值为负值（浓度小于0.15 ng/μl）。对于Akt2，EMT标记和ALDH1的截止值为0.2 ng/μl，对于TWIST1，为0.15 ng/μl，对于PI3Kα，为0.25 ng/μI，对于ALDH1，为0.1 ng/μl。
结果
检测干细胞和EMT标记物的血液检测方法的建立
使用卵巢癌细胞系IGROV1是因为所研究的所有标志物都由该细胞系表达。通过使用AdnaTest乳腺癌程序。加标实验显示IGROV细胞回收率为80%（数据未显示）。对Akt2、TWIST、PI3Kα和ALDH1的扩增子截止值分别为0.2 ng/μl、0.15 ng/μl、0.25 ng/μ1，所调查的30份健康供体样本中，97%的EMT和95%的ALDH1转录物为阴性。
患者特征
纳入标准
所有接受研究的患者都患有转移性乳腺癌。患者要么在几年前诊断出乳腺癌复发，然后开始化疗，要么在接受新的内分泌、化疗或实验治疗之前有进展性乳腺癌的记录。
表描述了研究开始前患者的特征。该表分为三个不同部分：首次诊断时的患者特征、诊断为转移时的转移部位以及“治疗”分为初级诊断时的治疗和转移性环境中的治疗.
表1
| 首次诊断时的患者特征 | | 编号 |
| 患者人数 | | 39 |
| 中位年龄（年） | | 46（范围，35-78） |
| 原发肿瘤分期 | 是 | 1 |
| 我 | 5 |
| 二 | 21 |
| 三 | 6 |
| 四、 | 6 |
| | |
| 组织学 | 管道 | 24 |
| 小叶的 | 5 |
| 导管/小叶 | 2 |
| 其他* | 5 |
| 未知 | 三 |
| | |
| 分级 | 1 | 4 |
| 2 | 16 |
| 三 | 18 |
| 未知 | 1 |
| | |
| 受体表达 | | |
| | |
| 雌激素和孕激素受体 | 销售时点情报系统 | 26 |
| 雌激素受体 | 销售时点情报系统 | 31 |
| 孕酮受体 | 销售时点情报系统 | 26 |
| HER2过度表达 | 位置（3+) | 11 |
| DAKO 2号机组+/鱼类- | 三 |
| | |
| 转移部位 | | |
| 内脏+非内脏 | | 21 |
| 内脏 | | 11 |
| 非内脏的 | | 7 |
| 大脑 | | 0 |
| | |
| 高架标记 | CEA公司 | 25 |
| 钙15-3 | 27 |
| 未知 | 1 |
| | |
| 治疗 | | |
| | |
| 初级诊断时的（新）辅助治疗 | | |
| 化疗 | | 19 |
| 辐射 | | 11 |
| 荷尔蒙 | | 18 |
| 曲妥珠单抗 | | 1 |
| 未知 | | 0 |
| | |
| 转移性环境中的治疗 | | |
| 化疗线 | 弗斯特 | 13 |
| 第二 | 4 |
| 第三 | 6 |
| 第四个及更多 | 12 |
| 未知 | 0 |
| 曲妥珠单抗 | | 11 |
| 激素治疗 | | 23 |
自2007年10月以来，共有39名患者入选。如表所示患者年龄35～78岁。只有10名患者患有原发性转移性乳腺癌。大多数患者患有乳腺导管癌。中分化和低分化肿瘤占优势。大多数患者有内脏和非内脏转移，31例和26例原发肿瘤分别为ER和PR阳性；11例原发性肿瘤HER2过度表达（DAKO，评分3+). 化疗辅助治疗主要包括蒽环类和紫杉烷类。乳腺转移瘤患者接受了不同的化疗，包括蒽、紫杉烷、长春瑞滨和5-FU。大多数患者在开始采集血样之前进行了广泛的预处理。19名患者在研究开始前接受了以蒽环类或紫杉烷为基础的辅助或转移化疗。几乎所有HER2 3患者+肿瘤转移组接受曲妥珠单抗治疗，佐剂组仅接受一种。
根据预处理情况，在个体化疗或激素治疗前进行CTC测定。
结果的分层
总共有39名患者在化疗期间进行了为期9个月（2至18个月）的CTC监测，并将其分为有应答者和无应答者。对患者（39人中的16人）进行了9至18个月的监测。在监测期间，他们既是应答者又是非应答者。因此，这些患者在结果计算中出现两次，导致21名有反应者和34名无反应者参与所有进一步评估。
CTC与响应的相关性
在疾病随访期间，总共在226份癌症样本中检测到69份CTC（31%）。在所调查的CTC阳性样本中，大多数病例（60%）中至少有两个标记过度表达，而在24%的MUC1病例、13%的HER2病例和3%的Ga733-2病例中仅观察到一个标记的过度表达（数据未显示）。当这些结果与治疗反应相关时，在34名无反应者中发现24名（71%），在21名有反应者中找到2名（10%）+而在CTC中发现了34名无应答者中的10人（29%）和21名应答者中的19人（90%）-组（图).
循环肿瘤细胞（CTC）与治疗反应的相关性。患者分为有反应者和无反应者。
CD34的表达
12名最初CTC阳性且至少一个EMT标记物或ALDH1或两者均阳性的患者进一步检测CD34，以排除血样中正常造血干细胞的潜在干扰。然而，没有一个样本对CD34呈阳性（数据未显示）。
CTC和EMT标记物/ALDH1的相关性
进一步检查所有样本的ALDH1和EMT标记，并与CTC的存在相关（图). 在反恐委员会+组中，26例患者中有21例（81%）至少一种EMT标记物或ALDH1或两者均阳性。在CTC中-组中，这一比例分别为11%（3/29）。图显示了对CTC中单个标记分布的更详细分析+和CTC-组。
循环肿瘤细胞（CTC）、表皮/间充质转化（EMT）标记物和/或ALDH1的相关性。（a）如果在样本中检测到至少一个标记，则认为EMT标记鉴定阳性。（b）详细分析CTC和ALDH1的相关性以及EMT标记。
在CTC中(+)EMT标记的表达率分别为42%（TWIST）、62%（Akt2）、58%（PI3Kα）和69%（ALDH1）。在反恐委员会-组，分别为7%、4%、4%和14%。
EMT标记物/ALDH1与治疗反应的相关性
将CTC中EMT或干细胞标记物或两者的表达与临床随访结果进行比较（图). 34名无应答者中25名（74%）和21名应答者中2名（10%）发现了EMT标记物或ALDH1或两者。相反，在34名无应答者中有9名（26%）和21名应答者中19名（90%）未检测到EMT标记或ALDH1或两者。图显示了对应答者和非应答者之间个体标记分布的更详细分析。在无应答组中，EMT标记的表达率为32%（TWIST）、44%（Akt2）、41%（PI3Kα）和62%（ALDH1）。在应答者组中，每个EMT标记的百分比为10%，ALDH1的百分比为5%。
表皮/间充质转化（EMT）标记物或ALDH1或两者与治疗反应的相关性。（a）如果在样本中检测到至少一个标记，则认为EMT标记鉴定阳性。患者分为有反应者和无反应者。（b）详细分析ALDH1、EMT标记物与治疗反应的相关性。
讨论
最近在原发性肿瘤组织中的关键发现表明，肿瘤的转移潜能是基于肿瘤组织中存在的少量干细胞样肿瘤细胞，这些细胞已被确定为转移扩散的活跃来源。此外，研究表明，扩散到循环中的肿瘤细胞可能会发生被称为EMT的表型变化，这使得它们能够在不受常规治疗影响的情况下转移到形成转移的部位。
在这里，我们证明至少一个或多个EMT标记物TWIST、Akt2和PI3Kα以及干细胞标记物ALDH1可以检测到，主要是在CTC阳性的患者样本中。这些发现与乳腺癌相关治疗的反应相关，并表明癌症患者血液中发现的大部分CTC具有EMT和肿瘤干细胞特征，表达EMT和肿瘤干细胞标记物的CTC是耐药细胞群的一个指标，因此预后较差。
Al-Hajj及其同事表明，乳腺癌中可能存在干细胞样细胞[26]他确定了一个假定的乳腺肿瘤干细胞样人群，该人群由CD44的存在和CD24的缺失定义。可以假设，由于干细胞的特性，这些肿瘤干细胞从原发肿瘤扩散到循环和逃避治疗，直到它们到达归巢器官，在那里它们充当形成转移的种子[1]. 这一假设得到了原发性肿瘤干细胞表达谱与乳腺癌患者转移复发相关的观察结果的支持[27]. 最近，ALDH1被发现是乳腺癌干细胞的特异性标志物[28]. 在我们的样本中，约70%的血液样本中发现ALDH1过度表达，CTC也呈阳性。
某些证据表明，CTC可能部分被确定为癌症干细胞，因为它们具有相似性，例如对化疗的抵抗力增加，循环中的增殖减少。骨髓中的DTC也有类似的发现，骨髓中的肿瘤细胞表现为干细胞样表型[11]. CTC的相应实验结果仍很突出。在2008年美国癌症研究协会年会上公布的初步数据表明，乳腺癌患者血液样本中存在乳腺癌干细胞样表型[29]. 我们最近证明，在个体治疗的过程中，CTC的存在或消失是转移性乳腺癌治疗反应的预测因素[30]. 在对这些患者的随访中，我们现在证明干细胞标记物ALDH1在CTC中的表达与治疗失败相关。假设乳腺癌细胞是非常异质的，理论上，CTC的分数应包括能够形成转移的肿瘤细胞的分数。
由于这种方法无法显示细胞的形态，因此我们不能排除某些情况下的假阳性结果。分子标记物之一，如MUC1或HER2，可能在仅存在于癌症患者血液中的活化白细胞中过表达。然而，在本研究调查的大部分CTC阳性样本中，大多数病例（60%）中至少有两个标记过度表达，而在24%的MUC1病例、13%的HER2病例和3%的Ga733-2病例中只观察到其中一个标记的过度表达。此外，即使不能完全避免假阳性结果，使用AdnaTest乳腺癌以及EMT或干细胞相关mRNA图谱检测到的CTC的相关性与治疗反应和总生存率正相关。细胞的可视化最终将显示表达模式是否可以被证实仅与CTC有关。
预后不良的两种乳腺癌亚型是基底样和HER2样乳腺肿瘤。临床上，基底样乳腺癌的特征是三阴性表型（ER、PR、HER2均为阴性）和类似干细胞样细胞，主要由表达肿瘤干细胞标记物CD44的细胞组成+和细胞角蛋白5/6[31-33]. 在我们分析的患者组中，39例患者中只有1例在首次诊断时表现为三阴性。相反，我们的11名患者最初被归类为HER2+在原发肿瘤上。这11名患者中有9名患者目前对不同的治疗没有反应。Wicha小组最近的工作[34]这表明HER2样肿瘤和干细胞之间存在紧密联系。他们报告说，调节信号分子，如10号染色体上的磷酸酶和紧张素同源物（PTEN）或HER2，可以增加干细胞群体的大小。
肿瘤的转移潜能取决于决定肿瘤生长、存活、血管生成和侵袭的多种因素。在这种情况下，EMT被认为是参与转移过程的因素之一。这些细胞减少了凋亡，并且具有耐药性。最近的一份报告表明，EMT和获得干细胞特性之间可能存在直接联系[35]. 此外，接受EMT的细胞可能是转移癌细胞的前体，甚至可能是转移形成的CTC。在我们的研究中，ALDH1经常与所分析的一个EMT标记物共存，导致癌症进展和治疗失败。尽管目前患者人数太少，无法得出任何重要结论，但在患者随访期间，有时在循环中出现CTC之前检测到ALDH1和EMT标记物。需要进一步的研究和更长的随访时间来评估系统性标记模式是否可以指示CTC的早期复发，从而表明疾病的进展过程。
众所周知，EMT发生在胚胎发育过程中，在胚胎发育中上皮细胞必须摆脱组织结构强加的结构限制。他们通过采用更适合细胞运动的表型来实现这一点。癌向侵袭性和转移性疾病的进展与这一过程有很大的相似性。因此，以前可能转化为间充质表型的上皮性肿瘤细胞可能会逃离原发肿瘤组织，并对常规治疗方案（例如抗激素治疗）产生耐药性，因为它们在转化过程中失去了相关的治疗靶点[36]. 相反，即使原发肿瘤对这些靶点阴性，也可能在这些细胞中诱导潜在治疗靶点的表达，如HER2受体[37]. 最近发表的数据通过免疫细胞化学双重染色分析了16例早期乳腺癌患者和16例转移性乳腺癌患者，表明CTC表达EGFR/HER2/PI3K/Akt通路的受体并激活信号激酶，可作为有效消除CTC的靶点[38].
结论
在转移性乳腺癌样本中分析的CTC中可以检测到EMT特征，这表明由于EMT转换导致细胞凋亡减少和化疗耐药性的发展，这类细胞对预后产生了负面影响。此外，在我们的大量样本中检测到ALDH1的过度表达，表明CTC可能经常表现出肿瘤干细胞特征，突出了它们在转移形成中的作用。显示EMT或干细胞样代谢的CTC的检测和表征可能是一种强有力的诊断工具，可用于患者分层、早期确定治疗失败或对给定治疗干预产生耐药性的潜在风险。相反，必须开发新的治疗策略，包括肿瘤干细胞中激活的信号转导通路的分子靶向，以消除最小残留疾病。
缩写
ALDH1：醛脱氢酶1；CTCs：循环肿瘤细胞；DTC：播散性肿瘤细胞；EMT：上皮-间充质转化；MRD：最小残留疾病；PD：进行性疾病；PR：部分缓解。
作者的贡献
BA、MT、SH、TF和SKB对研究的概念和设计、数据采集、数据分析和解释做出了重大贡献。BA、TF、SH和SKB参与了手稿的起草或修订。所有作者阅读并批准了最终手稿。
工具书类
- Pantel K、Brakenhoff RH、Brandt B.扩散肿瘤细胞的检测、临床相关性和特定生物学特性。Nat Rev癌症。2008;8:329–340. doi:10.1038/nrc2375。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Husemann Y、Geigl JB、Schubert F、Musiani P、Meyer M、Burghart E、Forni G、Eils R、Fehm T、Riethmuller G、Klein CA。全身扩散是乳腺癌的早期步骤。癌细胞。2008;13:58–68. doi:10.1016/j.ccr.2007.12.003。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Braun S、Vogl FD、Naume B、Janni W、Osborne MP、Coombes RC、Schlimk G、Diel IJ、Gerber G、Gebauer G、Pierga JY、Marth C、Oruzio D、Wiedswang G、Solomayer EF、Kundt G、Strobl B、Fehm T、Wong GY、Bliss J、Vincent-Salomon A、Pantel K。乳腺癌骨髓微转移的汇总分析。N英格兰医学杂志。2005;353:793–802. doi:10.1056/NEJMoa050434。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Kasimir-Bauer S、Mayer S、Bojko P、Borquez D、Neumann R、Seeber S。高危或转移性乳腺癌患者接受剂量密集或大剂量化疗后，干细胞制剂和骨髓中肿瘤细胞的存活率。临床癌症研究。2001;7：1582–1588。[公共医学][谷歌学者]
- Braun S、Kentenich C、Janni W、Hepp F、de Waal J、Willgeroth F、Sommer H、Pantel K。辅助化疗对消除高危乳腺癌患者骨髓中单个休眠肿瘤细胞缺乏效果。临床肿瘤学杂志。2000;18:80–86.[公共医学][谷歌学者]
- Wiedswang G、Borgen E、Karesen R、Qvist H、Janbu J、Kvalheim G、Nesland JM、Naume B。无病乳腺癌患者诊断三年后骨髓中分离的肿瘤细胞可预测不良的临床结果。临床癌症研究。2004;10:5342–5348. doi:10.1158/1078-0432.CCR-04-0245。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Becker S、Becker-Pergola G、Wallwiener D、Becker、Becker-Pergola G，Wallwierer D、Solomayer EF、Fehm T。检测接受辅助治疗的乳腺癌患者骨髓中的细胞角蛋白阳性细胞。乳腺癌研究治疗。2006;97:91–96. doi:10.1007/s10549-005-9095-6。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- 癌症干细胞与转移：致命种子。临床癌症研究。2006;12:5606–5607. doi:10.1158/1078-0432.CCR-06-1537。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Visvader JE，Lindeman GJ。实体瘤中的癌症干细胞：积累的证据和尚未解决的问题。Nat Rev癌症。2008;8:755–768. doi:10.1038/nrc2499。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Charafe-Jauffret E、Monville F、Ginestier C、Dontu G、Birnbaum D、Wicha MS。乳腺癌干细胞：当前观点和未来挑战。病理生物学。2008;75:75–84. doi:10.1159/000123845。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Balic M，Lin H，Young L，Hawes D，Giuliano A，McNamara G，Datar RH，Cote RJ。在乳腺癌患者骨髓中检测到的大多数早期播散癌细胞具有假定的乳腺癌干细胞表型。临床癌症研究。2006;12:5615–5621. doi:10.1158/1078-0432.CCR-06-0169。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Abraham BK、Fritz P、McClellan M、Hauptvogel P、Athelogou M、Brauch H。乳腺癌中CD44+/CD24-/低细胞的流行可能与临床结果无关，但可能有利于远处转移。临床癌症研究。2005;11：1154–1159。[公共医学][谷歌学者]
- Sophos NA，Vasiliou V.醛脱氢酶基因超家族：2002年更新。化学-生物相互作用。2003;1:143–144.[公共医学][谷歌学者]
- Thiery JP。肿瘤进展中的上皮-间充质转变。Nat Rev癌症。2002;2:442–454. doi:10.1038/nrc822。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Visvader JE，Lindeman GJ。实体肿瘤中的肿瘤干细胞：积累证据和未解决的问题。Nat Rev癌症。2008;8:755–768. doi:10.1038/nrc2499。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Kang Y，Massague J.《上皮-间质转化：发育和转移中的扭曲》。单元格。2004;118:277–279. doi:10.1016/j.cell.2004.07.011。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Watson MA、Ylagan LR、Trinkaus KM、Gillanders WE、Naughton MJ、Weilbacher KN、Fleming TP、Aft RL。骨髓微转移的分离和分子图谱确定TWIST1是乳腺癌患者早期肿瘤复发的标志物。临床癌症研究。2007年；13:5001–5009. doi:10.1158/1078-0432.CCR-07-0024。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Cheng GZ、Chan J、Wang Q、Zhang W、Sun CD、Wang LH。TWIST转录上调乳腺癌细胞中的Akt2，导致迁移、侵袭和对紫杉醇的耐药性增加。癌症研究。2007年；67:1979–1987. doi:10.1158/0008-5472.CAN-06-1479。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- 坎特雷尔DA。磷酸肌醇3-激酶信号通路。细胞科学杂志。2001;114:1439–1445.[公共医学][谷歌学者]
- Bachman KE、Argani P、Samuels Y、Silliman N、Ptak J、Szabo S、Konishi H、Karakas B、Blair BG、Lin C、Peters BA、Velculescu VE、Park BH。PIK3CA基因在人类乳腺癌中突变频率很高。癌症生物治疗。2004;三:772–775.[公共医学][谷歌学者]
- Chau NM，Ashcroft M.Akt2：乳腺癌转移中的作用。乳腺癌研究。2004;6:55–57. doi:10.1186/bcr739。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Liang K，Lu Y，Li X，Zeng X，Glazer RI，Mills GB，Fan Z。磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶-1和akt1表达和磷酸化在乳腺癌细胞对紫杉醇、阿霉素和吉西他滨耐药中的差异作用。摩尔药理学。2006;70:1045–1052. doi:10.1124/mol.106.023333。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Ellis IO、Schnitt SJ、Sastre-Garau X、Bussolati G、Tavassoli FA。侵袭性乳腺癌。收件人：塔瓦索利FA，Devilee P，编辑。世界卫生组织肿瘤分类：乳腺和女性生殖器官肿瘤。里昂：IARC出版社；2003年，第13-59页。[谷歌学者]
- Sobin LH，Wittekind C。恶性肿瘤的TNM分类。6.纽约：威利-莱斯；2002年，国际抗癌联盟。[谷歌学者]
- Lal P，Salazar PA，Hudis CA，Ladanii M，Chen B.HER-2在乳腺癌中的免疫组织化学分析和荧光原位杂交检测：2279例单机构经验以及双色和单色评分的比较。美国临床病理学杂志。2004;121:631–636. doi:10.1309/VE7862V2646BR6EX。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Al-Hajj M、Wicha MS、Benito-Hernandez A、Morrison SJ、Clarke MF。致癌乳腺癌细胞的前瞻性鉴定。美国国家科学院程序。2003;100:3547–3549. doi:10.1073/pnas.0530291100。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Liu R，Wang X，Chen GY，Daleba P，Gurney A，Hoey T，Sherlock G，Lewicki J，Shedden K，Clarke MF。致瘤性乳腺癌细胞基因特征的预后作用。N英格兰医学杂志。2007年；356:217–226. doi:10.1056/NEJMoa063994。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Ginestier C、Hur MH、Charafe-Jauffret E、Monville F、Dutcher J、Brown M、Jacquemier J、Viens P、Kleer CG、Liu S、Schott A、Hayes D、Birnbaum D、Wicha MS、Dontu G。ALDH1是正常和恶性人类乳腺干细胞的标志物，也是不良临床结局的预测因子。细胞干细胞。2007年；1：555–567。doi:10.1016/j.stem.2007.08.014。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Theodoropoulos PA、Polioudaki H、Sanidas E、Agelaki S、Mavroudis D、Georgoulias V。检测乳腺癌患者血液样本中具有乳腺癌干细胞样表型的循环肿瘤细胞。Proc-Am Assoc癌症研究。2008;49:452. [谷歌学者]
- Tewes M、Aktas B、Welt A、Mueller S、Hauch S、Kimmig R、Kasimir-Bauer S。转移性乳腺癌患者循环肿瘤细胞的分子分析和预测价值：监测乳腺癌相关治疗反应的一种选择。乳腺癌研究治疗。2009;115:581–590. doi:10.1007/s10549-008-0143-x。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Shipitsin M、Campbell LL、Argani P、Weremowicz S、Bloushtain-Qimron N、Yao J、Nikolskaya T、Serebryskaya T、Beroukhim R、Hu M、Halushka MK、Sukumar S、Parker LM、Anderson KS、Harris LN、Garber JE、Richardson AL、Schnitt SJ、Nikol sky Y、Gelman RS、Polyak K。乳腺肿瘤异质性的分子定义。癌细胞。2007年；11:259–273. doi:10.1016/j.ccr.2007.01.013。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Fulford LG，Reis-Filho JS，Ryder K，Jones C，Gillett CE，Hanby A，Easton D，Lakhani SR.Basal-like III级乳腺浸润性导管癌：转移模式和长期生存率。乳腺癌研究。2007年；9：R4.doi:10.1186/bcr1636。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Polyak K.乳腺癌干细胞：误认案例？干细胞版次。2007年；三：107–109。doi:10.1007/s12015-007-0020-8。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Korkaya H、Paulson A、Iovino F、Wicha M.HER2调节导致肿瘤发生和侵袭的正常和恶性乳腺干/祖细胞群。美国癌症研究协会会议记录2008年4月12日至16日；加利福尼亚州圣地亚哥。2012
- Mani SA、Yang J、Brooks M、Schwaninger G、Zhou A、Miura N、Kutok JL、Hartwell K、Richardson AL、Weinberg RA。间充质叉1（FOXC2）在转移中起关键作用，并与侵袭性基底样乳腺癌相关。美国国家科学院程序。2007年；104:10069–10074. doi:10.1073/pnas.0703900104。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Fehm T、Krawczyk N、Solomayer EF、Becker-Pergola G、Dürr-Störzer S、Neubauer H、Seeger H、Staebler A、Wallwiener D、Becker S.ERα-原发性乳腺癌患者骨髓中播散肿瘤细胞的状态。乳腺癌研究。2008;10：R76。doi:10.1186/bcr2143。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Fehm T、Becker S、Duerr-Stoerzer S、Sotlar K、Mueller V、Wallwiener D、Lane N、Solomayer E、Uhr J。使用血清HER2水平和循环肿瘤细胞对原发肿瘤为HER2阴性或未知HER2状态的复发性乳腺癌患者的HER2状态进行测定。乳腺癌研究。2007年；9：R74.doi:10.1186/bcr1783。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
- Kallergi G、Agelaki S、Kalykaki A、Stournaras C、Mavroudis D、Georgoulias V。磷酸化EGFR和PI3K/Akt信号激酶在乳腺癌患者的循环肿瘤细胞中表达。乳腺癌研究。2008;10：R80.doi:10.1186/bcr2149。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
