T细胞特异性适配器蛋白缺乏小鼠T细胞死亡受损和狼疮样自身免疫

监狱管理局。

在2个月大的C57BL/6野生型和TSAd缺乏小鼠中，一次性腹腔注射0.5 ml Pristane（Sigma-Aldrich）。6个月后，测定血清中是否存在自身抗体，并处死小鼠进行组织病理学分析。

血清学。

血清总IgG、IgG亚类和IgM浓度使用SBA Clonotyping™系统（Southern Biotechnology Associates，Inc.）通过ELISA测定。使用抗心磷脂ELISA试剂盒（Sigma-Aldrich）检测抗心磷脂抗体。使用小鼠抗双链DNA和类风湿因子ELISA试剂盒（Alpha Diagnostic International）检测抗双链（ds）DNA抗体和类风湿因素。如前所述，用ELISA检测单链DNA抗体(6). ELISA自身抗体中使用的二级检测试剂是山羊抗鼠IgG（GAMIgG）或与碱性磷酸酶偶联的IgM（Sigma-Aldrich）。为了确定与测试样品中已知IgG或IgM浓度相关的非特异性结合水平，在自身抗体ELISA实验中还对正常小鼠IgG和IgM的系列稀释液进行了分析。因此，通过从测试样品OD值中减去OD值，即从标准曲线计算出的正常IgG或IgM浓度相同时获得的OD值来确定特异性自身抗体结合。在这些实验中，如果测试样品的特定OD值大于任意0.25个单位，则测试样品得分为阳性。

为了检测抗核抗体并确认存在抗-ds DNA特异性，血清样本（1:100稀释）与固定和渗透的HEp-2细胞（Bion Enterprises，Ltd.）或绿盲蝽生物（Wampole实验室）。冲洗载玻片，然后用偶联到Alexa 488（分子探针）的GAMIgG孵育。在进一步清洗和安装后，在尼康Eclipse E600荧光显微镜上观察细胞。

西方印迹法。

如前所述，使用Jurkat T白血病细胞制备的核裂解物进行蛋白质印迹实验(5). 小鼠血清以1:1000的稀释度使用，二级检测试剂为GAMIgG与辣根过氧化物酶偶联（Santa Cruz Biotechnology，Inc.）。

病理学。

将C57BL/6野生型、TSAd杂合子和TSAd缺陷小鼠的不同器官固定在福尔马林中并包埋在石蜡中进行组织学研究。切片用苏木精和伊红（H&E）染色，另外加上周期性酸-希夫和苏木精染色（仅用于肾脏）。对于免疫组织化学，肾脏在OCT复合物中快速冷冻。肾脏切片首先在10%山羊血清中孵育，然后用GAMIgG Alexa 488孵育以检测肾小球中沉积的IgG。切片在尼康Eclipse E600显微镜上观察。

葡萄球菌肠毒素B（SEB）免疫。

用50μg SEB（Sigma-Aldrich）腹腔免疫小鼠。对于T细胞死亡实验，在SEB免疫前以及免疫后第4天和第11天，通过眼眶出血从小鼠身上采集300–400μl静脉血，TCR Vβ6的百分比⁺或TCR Vβ8⁺检测T细胞（见下文）。为了检测T细胞活化标记物和细胞因子的表达，在服用SEB 24小时后对脾脏T细胞进行流式细胞术分析（见下文）。

流式细胞术。

以下标记的单克隆抗体用于流式细胞术：H57-597-CyChrome（TCRβ链）、RA3-6B2-PE（CD45R/B220）、H1.2F3-PE（CD69）、Jo2-FITC（CD95/Fas）、MEL-14-FITC（CD62L）、IM7-PE（CD44）、RR4-7-PE和FITC（TCR Vβ6）、MR5-2-PE和FITC，A95-1-PE（针对IL-2的大鼠IgG2b同型控制）和R3-34-PE（针对IFN-γ的大鼠-IgG1同型控制）。除XMG1.2-PE来自Caltag外，所有抗体均来自BD Biosciences。枚举TCRαβ的百分比¹用TCRβ和B220抗体对脾细胞群中的T细胞和B细胞进行双重染色。脾TCRαβ上活化标记物（CD69、CD44、CD95和CD62L）的表达¹通过用TCRβ抗体和适当的活化标记抗体对脾细胞进行双重染色来测定来自老年小鼠的T细胞。TCR Vβ6的百分比⁺或TCR Vβ8⁺CD4中的细胞⁺用PE-标记的TCR抗体和CD4-FITC双重染色法检测SEB免疫小鼠外周血T细胞。同样，TCR Vβ6的百分比⁺或TCR Vβ8⁺用FITC-标记的TCR抗体双重染色法测定SEB免疫小鼠脾脏中表达CD69、IL-2和IFN-γ的T细胞。对于IL-2和IFN-γ分析，首先用50 ng/ml PMA和500 ng/ml离子霉素重新刺激收集的脾细胞4小时，并在最后2小时的培养中添加GolgiStop（BD Biosciences）。然后固定细胞，并在染色前用Cytofix/CytoPerm试剂（BD Biosciences）渗透。

基因剖析。

CD4细胞⁺根据制造商的说明，使用小鼠CD4 Dynabeads和DETACHaBEAD小鼠CD4试剂（Dynal），从八个混合C57BL/6野生型和八个混合的C57BL/6 TSAd缺乏脾脏（来自2个月龄的小鼠）中纯化T细胞。通过流式细胞术测定，CD4⁺T细胞纯度>98%，分离后未被激活。CD4细胞⁺在预先涂有2μg/ml 145-2C11抗CD3抗体（BD Biosciences）的12孔组织培养板的孔中培养20小时，T细胞未受到刺激或受到刺激。细胞密度为2.5×10⁶/ml，总微孔容积为2 ml。在2μg/ml的培养基中加入可溶性37.51抗CD28抗体。总RNA由未刺激和刺激的CD4制备⁺使用RNeasy Mini Kits（QIAGEN）和T7-dT引物ds cDNA的T细胞使用SuperScript选择系统（Invitrogen）合成。使用T7生物阵列高产量RNA转录标签试剂盒（酶诊断）制备生物素化cRNA。将15μg片段cRNA并入鸡尾酒中，鸡尾酒与U74Av2阵列（Affymetrix，Inc.）杂交，该阵列包含代表约12000个不同小鼠基因的探针组。所有杂交、洗涤和染色程序均按照制造商的说明进行。

使用Affymetrix Suite（Affymotrix，Inc.）和GeneSpring（Silicon Genetics）软件对数据进行分析。为了帮助识别TSAd正调控或负调控的基因，我们对数据应用了几个限制。首先，由于TSAd在T细胞激活时上调，我们选择了野生型T细胞中对CD3/CD28反应增加（正调控）或减少（负调控）至少三倍的基因。第二，由于TSAd对受刺激T细胞和非刺激T细胞的基因表达有更大的影响（基于表达增加），我们选择了受刺激野生型和敲除型T细胞之间的基因表达比率大于（正调控）或小于（负调控）的基因未刺激野生型和敲除型T细胞之间的基因表达比率至少为1.5倍。第三，由于预计TSAd至少会影响受刺激T细胞中的基因表达，我们只考虑受刺激敲除T细胞中相对于受刺激野生型T细胞减少（正调节）或增加（负调节）1.5倍的基因。第四，为了提高结果的可靠性，我们只考虑了Affymetrix在受刺激的野生型T细胞（对于正调控基因）或受刺激的敲除T细胞（对于负调控基因）中指定为存在（P）的基因。

TSAd缺乏小鼠产生抗核抗体（ANA）。

高丙种球蛋白血症在狼疮样系统性自身免疫病的小鼠模型中常见(7，8). 一种典型的类狼疮自身免疫模型是MRL/lpr小鼠(8). MRL/lpr小鼠在6个月龄时发生严重的狼疮样疾病，死亡率为50%。TSAd缺乏小鼠的高丙种球蛋白血症不如MRL/lpr小鼠明显（在12只3–6个月龄的MRL/lpr小鼠中，平均IgG水平为4.62 mg/ml，SE为0.71 mg/ml），但与其他小鼠狼疮模型（如NZB/W和BXSB小鼠）中的表现相当(7). 因此，为了确定TSAd缺乏小鼠是否也会产生系统性自身免疫，我们首先检测了血清中是否存在ANA。渗透性HEp-2上皮细胞免疫荧光染色检测ANA(图2，A和B) . 在所有接受检查的年龄段，从2个月到12至14个月，ANA血清的百分比⁺TSAd缺乏小鼠显著高于同卵对照野生型和TSAd杂合子小鼠(图2A） ●●●●。在12-14个月大时，16只TSAd缺陷小鼠中有11只（69%）表现出ANA反应性，而在3-6个月大时，12只MRL/lpr小鼠中有11只（92%）表现出ANA反应性。TSAd缺乏小鼠发展ANA的倾向没有明显的性别差异。在TSAd缺乏小鼠中观察到多种不同的抗核反应模式，其中每一种在人类SLE中都有发现(9). 这些包括有或无细胞质点的均质核反应性、核边缘染色和核仁染色，同样也包括有或没有细胞质点(图2B） ●●●●。这些发现与对核蛋白和核糖体蛋白和/或核酸的反应性一致。为了证实TSAd缺乏小鼠的血清含有抗核蛋白特异性，我们在Western blotting实验中检测了血清与T白血病细胞核裂解物的反应性(图2C） ●●●●。与对照野生型小鼠的血清相比，老年ANA的血清⁺发现TSAd缺陷小鼠对许多不同的核蛋白产生强烈和异质的反应。

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图2。

TSAd缺乏小鼠血清中的ANA。（A） 通过HEp-2上皮细胞的免疫荧光染色，检测TSAd缺乏小鼠和同窝对照野生型和TSAd杂合子小鼠血清中是否存在ANA抗体。显示ANA的百分比⁺每个基因型在指定年龄段的血清（括号中显示了所分析的小鼠总数）。TSAd缺乏小鼠和野生型对照小鼠之间的差异在所有年龄组中都具有统计学意义（所有P<0.05均采用独立性的二次方检验计算）。nd，未确定。（B） 用TSAd缺乏的血清观察到HEp-2上皮细胞的不同核染色模式。从左上角顺时针方向：均质核、边缘、均质核和细胞质点，核仁和细胞质点状。（C） 四种7-9个月龄ANA血清的反应性⁺TSAd缺陷小鼠和年龄匹配的对照野生型（wt）小鼠，通过蛋白质印迹检测T白血病细胞的核裂解物中的蛋白质。野生型血清来自三种不同的野生型小鼠。

TSAd缺乏小鼠的自身抗体特异性。

抗ss DNA、ds DNA、心磷脂和IgG（类风湿因子）抗体常见于狼疮易感小鼠和人类SLE患者的血清中(7，8，10–12). 因此，我们通过ELISA检测TSAd缺失血清中是否存在这些自身抗体。直到9个月大时，很少检测到针对这些抗原的抗体。然而，9个月后，在TSAd缺乏小鼠的血清中检测到了所有四种特异性，尽管在对照野生型小鼠血清中很少检测到(图3A） ●●●●。我们比较了TSAd缺失血清和MRL/lpr血清不同自身抗体特异性的频率和滴度(图3，A和C). 值得注意的是，与MRL/lpr小鼠相比，TSAd缺乏小鼠的抗s-DNA抗体频率更低（分别为37%和75%）。然而，与MRL/lpr小鼠相比，TSAd缺乏小鼠中抗ds-DNA、抗心磷脂和类风湿因子抗体的频率仅略有降低或根本没有降低（分别为26vs.42%、58vs.42%和42vs.42%；图3A） ●●●●。此外，虽然TSAd缺乏小鼠的抗s-DNA抗体滴度较低，但TSAd缺陷小鼠和MRL/lpr小鼠的抗-ds-DNA和抗心磷脂抗体滴度相当，而TSAd缺失小鼠的类风湿因子抗体滴度较高(图3C） ●●●●。对于单个TSAd缺乏小鼠（和MRL/lpr小鼠），针对一个靶点的抗体的存在或滴度不一定能预测针对另一个靶目标的抗体的出现或滴度，因此强调了自身抗体反应的异质性(图3C） ●●●●。

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图3。

TSAd缺失血清与自身抗原的反应性。（A） 1岁TSAd缺乏者血清中抗ss-DNA、ds-DNA、心磷脂和IgG抗体的存在(n个=19），1年对照C57BL/6野生型(n个=18，但反s DNA除外，其中n个=20）和3-6个月MRL/lpr(n个=12）小鼠通过ELISA测定。血清以1:50的稀释度进行测试，并根据材料和方法中概述的标准进行阳性评分。所示为每种自身抗原阳性血清的百分比。TSAd缺乏小鼠和C57BL/6小鼠之间的所有自身抗原差异具有统计学意义（所有P均<0.05，均通过χ2检验确定）。（B） 代表性染色绿盲蝽通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测出抗ds DNA抗体阳性的TSAd缺失血清。显示含有ds-DNA的动粒和二聚体染色的细胞核的强染色。与动粒（不含ss-DNA，不与蛋白质复合）的反应性证实了抗ds-DNA抗体的存在。（C） TSAd缺乏小鼠和MRL/lpr小鼠自身抗体的效价。如A所示，用ELISA法测定了7只1岁TSA缺乏小鼠和6只4-6月龄MRL/lpr小鼠的稀释血清与所示自身抗原的反应性。单个小鼠的数据用不同的符号表示。对于每只小鼠，每个抗原使用相同的符号。

TSAd缺乏小鼠的肾脏疾病和肺白细胞浸润。

在狼疮样综合征中，免疫复合物沉积在肾小球中，导致肾小球肾炎(7，8，10，11). 为了确定TSAd缺乏小鼠是否会发生肾小球肾炎，杀死年龄较大的小鼠，并对肾脏进行组织病理学和免疫组织化学分析。对照野生型小鼠的肾脏显示肾小球细胞、系膜和肾小球基底膜正常(图4A和表一). 相反，TSAd缺乏小鼠的肾脏经常出现异常，并出现肾小球肾炎的症状(图4A和表一). 其中包括肾小球大小和细胞数显著增加（系膜细胞数量增加和炎性细胞（包括多形核白细胞）的存在所致），系膜基质数量增加，肾小球基底膜增厚，肾小管内蛋白透明管型的出现提示肾小球功能障碍(图4B） ●●●●。此外，在肾小球中检测到IgG免疫复合物沉积(图4C） ●●●●。这些特征在定性和定量上与5-6月龄MRL/lpr小鼠肾脏中观察到的特征相似，但TSAd缺乏小鼠肾脏中的肾小球几乎没有硬化迹象（未描述和参考文献6–8). TSAd缺乏小鼠肾脏中观察到的任何变化在TSAd杂合子小鼠肾脏中都不明显（未发表数据）。与肾脏病理学一致，大多数老年TSAd缺乏小鼠都有蛋白尿的迹象。在19只接受检查的1岁TSAd缺失小鼠中，12只的尿蛋白水平在30 mg/dL范围内，4只的尿蛋白质水平在100 mg/dL的范围内。只有三只小鼠显示出野生型小鼠中的微量尿蛋白水平（P<5×10⁻⁷使用chi-squared测试）。

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图4。

TSAd缺乏小鼠的肾和肺病理学。（A和B）来自1岁对照野生型和TSAd缺乏小鼠的H&E染色肾脏切片。代表性肾小球如图A所示。注意TSA缺乏的肾小球系膜细胞数量显著增加。（B） TSAd缺乏肾中可见肾小管内透明铸型（箭头所示）。（C） 免疫荧光法检测一只9个月龄TSAd缺乏小鼠肾小球中的IgG免疫复合物沉积。（D） 1岁对照野生型和TSAd缺乏小鼠的H&E染色肺切片。注意TSAd缺乏的肺血管周围炎性聚集物（箭头所示）和肺泡间质增厚。

狼疮样综合征的另一个常见特征是白细胞侵入非淋巴样器官(7，8). 因此，我们检查了TSAd缺乏的老年小鼠的一些不同的非淋巴样组织，以寻找白细胞浸润的证据。特别是在肺部，有大量白细胞在血管周围积聚，而在对照组小鼠中没有观察到(图4D） ●●●●。这些白细胞浸润深入肺实质。此外，TSAd缺乏小鼠的间质肺泡间隙增厚，在对照小鼠中观察到的精细肺泡结构消失。白细胞浸润在其他非淋巴样器官中不太常见。

TSAd缺陷小鼠对实验诱导的狼疮样疾病的易感性。

由于TSAd缺乏小鼠的几种主要狼疮样疾病特征仅在老年小鼠中观察到，因此我们接下来询问年轻的TSAd缺失小鼠是否更容易受到实验诱导的狼疮的影响。为了验证这一点，我们用类异戊二烯烷烃，即普鲁坦免疫了2个月大的小鼠，此前已经证明普鲁坦是狼疮的非特异性炎症触发因素(13–15). 我们利用了这样一个事实，即与其他菌株相比，C57BL/6小鼠对纯烷的自身免疫反应较弱，例如不会产生IgG同型抗s DNA或抗ds DNA抗体(15–17). 证实了这些先前的报告，在用纯烷免疫6个月后，C57BL/6野生型小鼠产生了低滴度的IgM抗s DNA抗体（13只小鼠中有11只），但基本上没有产生IgG抗s DNA、IgM和IgG抗体ds DNA抗体(图5; 在13只野生型小鼠中，有1只或2只检测到这些抗体的低滴度。相比之下，C57BL/6 TSAd缺陷小鼠在用纯烷免疫后产生了较高滴度的IgM抗s DNA抗体，此外，还产生了IgG抗s DNA（10只小鼠中的10只）和IgM和IgG抗体ds DNA（分别为9只和4只小鼠）(图5).

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图5。

在TSAd缺乏小鼠中诱导抗DNA抗体。对照野生型和TSAd缺乏小鼠在2个月龄时用纯烷免疫。免疫后6个月，用ELISA检测血清中是否存在指示的抗DNA抗体。所有血清以1:100的稀释度进行测试。数据点代表所示基因型的不同个体小鼠。野生型和TSAd缺乏小鼠IgM抗s DNA抗体的平均OD值差异具有统计学意义（P<3.6×10⁻⁴使用学生的两个样本确定t吨测试）。野生型和TSAd缺乏型小鼠产生其他类型抗DNA抗体的百分比（见正文和材料与方法）之间的差异也具有统计学意义（均P<5×10⁻⁵使用chi-squared测试确定）。

我们还检查了未经免疫的小鼠肾脏，以寻找肾小球肾炎的证据(表一). 原始免疫后6个月，野生型原始免疫小鼠的肾脏仅显示轻度肾小球肾炎的组织学证据。相反，未经免疫的TSAd缺乏小鼠的肾脏显示出明显的更严重的肾小球肾炎证据，表现为系膜高细胞性增加、系膜基质沉积和肾小球基底膜厚度增加。根据这些发现，TSAd缺乏小鼠表现出蛋白尿增加的迹象。因此，在10只TSAd缺失小鼠中，在原始免疫后6个月，6只尿蛋白浓度在30 mg/dL范围内，4只尿蛋白含量在100 mg/dL的范围内。相比之下，在同一时间点检查的13只野生型小鼠中，所有小鼠的尿蛋白浓度均在30 mg/ml范围内（P<5×10⁻⁵).

TSAd缺乏小鼠的淋巴增生。

接下来，我们研究了TSAd缺乏小鼠的淋巴器官中是否含有更多的T细胞，这可能表明T细胞功能失调是导致自身免疫的原因。然而，以前有报道称，TSAd缺乏小鼠的初级和次级淋巴器官中T细胞和B细胞的数量和比例正常(三). 因此，在我们分析TSAd缺乏小鼠的过程中，我们重新检查了这个问题，以防在最初的研究中忽略了细微的差异(表二). 事实上，对29只对照野生型小鼠和30只2至3个月龄TSAd缺乏小鼠的脾脏重量进行比较，发现TSAd缺乏鼠脾脏轻度肿大（脾脏重量增加了约1.6倍）。同样，TSAd缺乏小鼠的胸腺重量显著增加。脾脏和胸腺重量的增加与细胞数量的增加有关。对于脾脏，高细胞性同时影响T和B区。如前所述，用于胸腺(三)，未发现CD4/CD8双阴性、双阳性或单阳性胸腺细胞比率的变化（未描述）。

老年TSAd缺乏小鼠的T细胞表现出激活的表型。

到9个月大时，TSAd缺乏小鼠的脾肿大更加明显(图6A） ●●●●。此外，对TSAd缺乏的老年小鼠的脾脏和淋巴结进行组织学检查，发现其具有高反应性特征。脾脏的红髓和白髓区域或淋巴结的皮质和髓质区域之间缺乏明确的区分，因此结构消失(图6B） ●●●●。为了确定TSA缺乏的老年人脾脏中的T细胞是否处于激活状态，用TCRβ抗体和不同的激活标记抗体对脾细胞进行双重染色(图6C） ●●●●。与对照小鼠脾脏的T细胞相比，TSAd缺乏小鼠的T细胞显示CD69、CD44和CD95/Fas活化标记物的表达增加，CD62L的表达减少/我-选择素（其表达与激活状态呈反比）。9–13个月龄的所有11只受试TSAd缺乏小鼠都获得了相同的结果。相比之下，来自较老TSAd杂合子的T细胞没有显示出CD69、CD44或CD95的表达增加，也没有显示CD62L的表达减少（未描述）。与T细胞类似，来自TSAd缺乏的老年脾脏的B细胞表现出CD69、CD44和CD95的表达增加，尽管这些活化标记物在B细胞上的上调不太明显（未描述）。总之，这些发现表明，较老的TSAd缺乏的脾脏含有大量激活的T和B细胞。

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图6。

TSAd缺乏小鼠的脾脏病理学。（A） 上图：9个月龄野生型（左）和TSAd缺乏型（右）小鼠的脾脏。中间：6只1岁野生型和TSAd缺乏小鼠的脾脏重量。底部：测定了三只1岁野生型和TSAd缺乏小鼠脾脏中的T细胞和B细胞总数。（B） 对1岁野生型和TSAd缺乏小鼠的脾脏和腹股沟淋巴结进行H&E染色。注意TSAd缺乏小鼠的正常结构丢失（脾脏中明确定义的红髓和白髓区域以及淋巴结中的皮质和髓质区域）。（C） 通过流式细胞术测定来自9个月大的野生型（蓝色或绿色）和TSAd缺陷型（红色）小鼠的脾脏T细胞上所指示的活化标记物的表达。

TSAd缺乏小鼠T细胞缺陷性死亡。

我们认为TSAd缺乏小鼠自身免疫的发展可能是由于抗原诱导的T细胞死亡失败所致，这与脾脏的发现一致。为了验证这一点，用超抗原SEB免疫对照野生型和TSAd缺乏小鼠。在健康动物中，SEB免疫可减少TCR Vβ8的应答数量⁺外周T细胞池中的T细胞因凋亡而死亡(18). 检查TCR Vβ8⁺TSAd缺乏小鼠的T细胞被有效清除，我们测定了Vβ8的百分比⁺总CD4中的T细胞⁺SEB免疫后不同时间点外周血T细胞(图7A） ●●●●。在对照小鼠中，SEB免疫导致Vβ8百分比的时间依赖性下降⁺Vβ8特异性T细胞⁺T细胞，因为Vβ6的百分比⁺在这些实验中，T细胞没有显著改变。同样，在TSAd缺乏小鼠中，SEB免疫导致Vβ8的百分比降低⁺T细胞而非Vβ6⁺T细胞。然而，Vβ8的消除⁺TSAd缺乏小鼠的T细胞明显低于对照组。在两个相同的重复实验中获得了相同的结果。重要的是，根据Vβ8的初始激活，不能解释TSAd缺乏小鼠T细胞消除的缓慢动力学⁺在这些动物中，T细胞对SEB的反应受损。因此，Vβ8⁺当用SEB免疫24小时后进行检测时，诱导TSAd缺乏小鼠和对照野生型小鼠的T细胞表达CD69活化标记物的可比水平(图7B） ●●●●。此外，SEB免疫后3天内，Vβ8⁺TSAd缺乏小鼠和野生型小鼠的T细胞在体内经历了相同数量的细胞分裂（未公布的数据）。

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图7。

TSAd缺乏小鼠的T细胞缺陷性死亡。（A） TCR Vβ6的百分比⁺或TCR Vβ8⁺总CD4中的T细胞⁺用流式细胞术检测SEB免疫后指定时间野生型和TSAd缺乏小鼠（2个月龄）静脉血中的T细胞。数据来自每组8只小鼠，以平均值±1 SE表示。在第4天和第11天，野生型和TSAd缺乏小鼠的Vβ8百分比差异⁺T细胞在统计学上具有显著性（使用Student的两个样本计算得出的P<0.005t吨测试）。（B） TCR Vβ6上CD69的表达⁺和Vβ8⁺用流式细胞术检测SEB免疫24小时后野生型和TSA缺乏小鼠的T细胞。Vβ6的百分比⁺和Vβ8⁺表达CD69的T细胞显示在括号中。

我们感谢Hai Nguyen博士（康奈尔大学威尔医学院）在病理学方面的帮助。感谢Jeff Bluestone博士提供TSAd缺乏小鼠。

这项研究得到了公共卫生服务局向P.D.King提供的AI044926和AI050699拨款的支持。