概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HepG2型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:第12外显子28 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
规则说明 Western blot数据表明,CRISPR基因编辑可能导致相关蛋白的截短。 请参阅数据图像。 建议控制: 人野生型HepG2细胞系( ab257304型 )。 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: MEM+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时部分更换培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肝脏 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 肝细胞癌 -
性别 男性 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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相关性 NF-kappa-B是一种存在于几乎所有细胞类型中的多效性转录因子,是一系列信号转导事件的终点,这些事件由与炎症、免疫、分化、细胞生长、肿瘤发生和凋亡等许多生物过程相关的大量刺激物启动。 NF-kappa-B是由类Rel结构域蛋白RELA/p65、RELB、NFKB1/p105、NFKB1/p50、Rel和NFKB2/p52形成的同源或异二聚体复合物。 二聚体结合在其靶基因DNA中的kappa-B位点,并且单个二聚体对不同的kappa-B位点有不同的偏好,它们可以以不同的亲和力和特异性结合。 不同的二聚体组合分别作为转录激活物或阻遏物。 NF-kappa-B受翻译后修饰和亚细胞分隔的各种机制以及与其他辅因子或辅抑制因子的相互作用控制。 NF-kappa-B复合物被保存在细胞质中,处于与NF-kampa-B抑制剂家族成员复合的非活性状态。 在传统的激活途径中,I-kappa-B激酶(IKK)对不同的激活物进行磷酸化,随后降解,从而释放转移到细胞核的活性NF-κB复合物。 在非规范激活途径中,MAP3K14激活的CHUK/IKKA同型二聚体磷酸化与RelB相关的NFKB2/p100,诱导其蛋白水解为NFKB2/p52,并形成NF-kappa-B RelB-52复合物。 NF-kappa-B异二聚体RelB-52复合物是一种转录激活物。 NF-kappa-B p52-p52同型二聚体是一种转录阻遏物。 NFKB2似乎具有双重功能,如p100对附着的NF-kappa-B蛋白的细胞质保留和通过共翻译处理产生p52。 蛋白酶体介导的过程确保了p52和p100的产生,并保持了它们的独立功能。 p52与kappa-B一致序列5'-GGRNNYCC-3'结合,位于参与免疫反应和急性期反应的基因的增强子区域。 p52和p100分别是小调和大调; p100的处理相对较差。 异构体p49是NF-kappa-B蛋白复合物的一个亚单位,它与p65协同刺激HIV增强子。 与RELB一致,通过抑制clock-ARNTL/BMAL1异二聚体的转录激活物活性来调节生物钟。 -
细胞定位 细胞质和细胞核
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗NFkB p100/NFKB2抗体[EPR4686-66]( 约175192 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HepG2细胞裂解物 车道2: NFKB2敲除HepG2细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 97千帕 观察到的频带大小: 120千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约175192 在120 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约175192 western blot显示与野生型HepG2细胞中的NFkB p100/NFKB2反应。 在敲除细胞系ab262323(敲除细胞裂解物 ab257247号 )97kDa以下的车道可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型HepG2和NFKB2敲除HepG2-细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约175192 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/10000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗NFkB p100/NFKB2抗体[EPR4686]( 约109440 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HepG2细胞裂解物 车道2: NFKB2敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 97千帕 观察到的频带大小: 120千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约109440 在120 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( ab8245 )在37 kDa时观察到。 约109440 western blot显示与野生型HepG2细胞中的NFkB p100/NFKB2反应。 在敲除细胞系ab262323(敲除细胞裂解物 ab257247号 )97kDa以下的车道可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型HepG2和NFKB2敲除HepG2-细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约109440 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第12外显子28 bp缺失
数据表及文件
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