1.简介
大西洋马蹄蟹多棘鲎(林奈,1758年)是北美洲特有的一种独特的海洋石首鱼十足目动物(Shuster,1982; 墙壁等。, 2002). 它是现存四种密切相关的马蹄蟹之一,与三齿塔希普利斯,巨型鲎和圆形癌蝎,发现于亚洲(Sekiguchi&Shuster,2009). 他们是剑鱼目(Bicknell&Pates,2020)的唯一幸存者)并且是三叶虫的近亲(Shuster,1982). 事实上,鲎属物种可追溯至~2.5亿年前(Mya)(Bicknell&Pates,2020年)Limulidae家族自石炭纪(~360 缅甸;Bicknell&Pates,2019年, 2020). 剑鱼属,具有高度保守的马蹄形波普兰根据异常广泛的化石记录推断(Bicknell&Pates,2020),可追溯至晚奥陶世(~445) 缅甸;鲁德金等。, 2008; Bicknell&Pates,2020年)或寒武纪(~540 缅甸;圣勒默,1952年). 因此,这些动物存活了五大块灭绝有时被认为是“活化石”,这是查尔斯·达尔文(达尔文,1859)提出的一个术语)或“稳定形态”(Kin&Błażejowski,2014))是“进化停滞期”的一个例子(拉德金等。, 2008).
尽管马蹄蟹的名字叫什么,但实际上它们不是甲壳类动物,而是螯虾,它们在进化上更接近蜘蛛、蜱和蝎子,而不是螃蟹(兰克斯特,1881); Ballesteros&Sharma,2019年).多裂乳杆菌预期寿命高达20年(Walls等。, 2002)通常用作实验动物模型,研究其复眼、简单神经系统和海洋无脊椎动物胚胎学(Smith,2022). 此外,它还拥有古老而原始的蛋白水解血液凝固和先天免疫系统,这是脊椎动物以外唯一发现的系统(罗利等。, 1984; 杜立德,2010年; 施密德等。, 2019; 冬季等。, 2020; Eleftherianos公司等。, 2021). 因此,多裂乳杆菌是研究肽酶进化和功能的重要有机体(贝克尔·保利等。, 2009).
虾青素是锌依赖性金属肽酶(MP;Stöcker等。, 1993; 戈米斯·吕斯(Gomis-Rüth)、特里罗·穆约(Trillo-Muyo)等。, 2012; Stöcker&Gomis-Rüth,2013年; 2019年债券)以欧洲淡水小龙虾的原型消化酶虾青素命名无球星L.,1967年首次被描述(普莱德勒等。1967年; 斯特克等。, 1988, 1992; Stöcker&Yialouros,2013年). Astacins的特征是具有约200个中心残基的锌依赖性催化域(CD),发生在>12 在PFAM数据库(Mistry等。, 2021). 在后生动物中发现的序列与达尔文的垂直下降一致,偶尔也会达到全生动物的根。它们不存在于植物和病毒中(Semenova和Rudenskaia,2008)并且被发现散布在细菌中,这表明它们是真核生物水平基因转移产生的异种生物(Koonin等。, 2001; Keeling和Palmer,2008年). astacin CD的结构特征进一步将该家族归入议员的metzincin家族(Bode等。, 1993; 斯特克等。, 1995; 戈米斯·吕斯(Gomis-Rüth)、特里罗·穆约(Trillo-Muyo)等。, 2012; Cerdá-Costa&Gomis-Rüth,2014年)MEROPS数据库的M12A家族(罗林斯和贝特曼,2021年).
海星有一个基本的结构域,由一个用于分泌的N末端信号肽、一个可变长度的前肽(PP)组成(从海星中的34个残基到海星中486个残基黑腹果蝇托尔金;菲内利等。, 1995; 戈米斯·吕斯(Gomis-Rüth)、特里罗·穆约(Trillo-Muyo)等。, 2012; 阿洛拉斯等。, 2018)产酶潜伏期和CD(Gomis-Rüth,Trillo-Muyo等。, 2012). 该核心可能由不同的模块进行C末端延伸,其中包括连接子(LNK)、CUB结构域(发现于补体成分C1r/1s、胚胎海胆Uegf和骨形态发生蛋白1中;Bork&Beckmann,1993; PF00431)和MAM结构域(常见于meprins、A5受体蛋白和酪氨酸磷酸酶μ; 西斯马修等。2004年; PF00629)。两种虾青素,即一种短240残留蛋白(卡斯尔基因;UniProt加入B4F319)和长403残留蛋白(卡斯尔曼基因;UniProt B4F320)在多裂乳杆菌,重组表达并进行生化表征(贝克尔·保利等。, 2009, 2011). 短形式主要出现在眼睛和大脑中,这表明神经系统有功能,而长形式则无处不在(贝克尔·保利等。, 2009). 短的paralogue具有家族的基本域结构,而长的Paralague还包含LNK和MAM域。两种虾青素在PP和CD中具有46%的序列同一性,并且它们的胰蛋白酶激活形式在明胶酶谱和溶液中对偶氮酪蛋白和细胞外基质蛋白纤连蛋白、IV型胶原、明胶和层粘连蛋白显示出蛋白水解活性,但不具有三螺旋胶原(Becker-Pauly等。, 2009). 最后,这些虾青素与褐蛛的直系血统更接近,这与马蹄蟹是螯虾一致中间洛克索勒在系统发育分析中,小龙虾的甲壳类直系生物A.无星体还有虾凡纳滨对虾(贝克·保利等。, 2009).
在这里,我们结晶了长副logue的酶原,以下称为pLAST-MAM,并解决了其晶体结构。我们的结果提供了对目前进化最古老的全虫虾青素潜伏期机制的结构和分子见解。
2.方法
2.1. 蛋白质结晶
pLAST-MAM酶原通过重组表达获得尼旋毛虫High Five昆虫细胞,按Becker-Pauly所述进行纯化等。(2009年)随后在Vivaspin装置中使用具有10 kDa截止值(Vivaproducts)。我们在IBMB/IRB联合自动晶体成像平台上使用坐滴蒸汽扩散法筛选结晶条件(https://www.ibmb.csic.es/en/facilities/automated-crystallographic-platform网站). 使用帝肯Freedom EVO机器人制备储层溶液,并将其分配到96×2孔MRC板中(Innovadyne Technologies)。菲尼克斯/RE机器人(Art-Robbins)管理由100个 nl分别为蛋白质和储液。结晶板随后在4或20°C的温度下在Bruker恒温结晶农场中培养。尽可能在24孔Cryschem结晶皿(Hampton Research)中对成功的初始条件进行精炼并放大至微升范围。~7时蛋白质的最佳晶体 毫克 毫升−150分之一 米M(M)HEPES pH 7.0在20°C下使用0.1 M(M)bicine pH 9.0,10%聚乙二醇(PEG)40 000,2%二恶烷作为储层溶液。晶体是薄而易碎的矩形板,使用低温(分子尺寸)收集,快速通过由储液罐溶液加20%组成的低温缓冲液(v(v)/v(v))甘油和在液氮中快速玻璃化,用于运输和数据收集。
2.3. 结构解决和细化
pLAST-MAM的结构由分子置换使用相位器晶体学软件(McCoy等。, 2007)以及CD和MAM结构域的同源模型字母折叠(跳线等。, 2021). 经过多次试验,我们只能通过单独搜索域来获得正确的解,即两个用于CD,但只有一个用于MAM域。CD的角度对应于欧拉角α= 54.2,β= 54.0,γ=116.3和的单元分数转换值x个= 0.106,年 = 0.002,z=0.210,对于一个原聚体和α= 261.5,β= 125.5,γ = 297.0,x个 = 0.419,年= 0.884,z=0.303,对于第二原聚体。MAM部分的相应值为α= 64.8,β = 106.0,γ= 172.9,x个= 0.285,年= 0.751,z = 0.991. 这些解决方案具有最终的转换功能Z轴-得分为17.1分,之后全球对数增长精炼第782页。
将适当旋转和平移的分子进行菲尼克斯汽车协议(Terwilliger等。, 2008)在凤凰生成了一个大大改进的傅里叶图,用于手动建模库特(卡萨纳尔等。, 2020). 后者与晶体学交替出现精炼使用菲尼克斯定义协议(van Zundert等。, 2021)和巴斯特(智能等。, 2012)这两者都包括平移/解放/螺旋运动和NCS约束,直到模型完成。后者包含原聚体的残基Glu22–Cys403一个和原聚体的Glu22–Gly246B类,每个都有一个催化锌离子加上一个暂定的镁离子、一个二甘醇分子、一个三甘醇分子,两个甘油分子和229个溶剂分子。原聚体LNK和MAM的占有率一个精炼至87%。表1提供关于最终优化模型的基本统计信息,该模型通过wwPDB验证服务进行了验证(https://validate-rcsb-1.wwpdb.org/valid服务). 坐标可以从蛋白质数据库中检索(https://www.wwpdb.org/)作为条目8a28号.
3.结果和讨论
3.2. 酶原的结构
当以议员的标准取向(戈米斯·吕斯、波特略)来看时,pLAST部分细分为三个部分等。, 2012):N端PP(E22–K(K)48),CD(N)的上N端子域(NTS)49–G146)和CD(F)的下C端子域(CTS)147–C244)(图2一). PP从右向左沿pLAST的前表面运行,具有螺旋结构α1位于裂缝的涂底漆侧(基底和活性位点子网站术语基于Schechter&Berger,1967); 波特略省戈米斯·吕斯等。, 2012). 它采用从L之间的缝隙突出的宽环结构29和D38(图3一)由两个链内氢键(H31北-北37O和F35O–I型39N) ●●●●。干预性残基包含在虾青素(F-E/Q-G-D-I;Gomis-Rüth,Trillo-Muyo)中发现的“PP基序”中等。, 2012),F35-E-G-D-I公司39最后(贝克·保利等。, 2009). 对于我来说39–G41,该多肽在V向下旋转90°之前,沿着裂口的非质膜侧采用延伸构象42–Y45然后向左为Y45–D47之后,含有初级激活裂解位点(K48–否49)进入CD,CD对K采用螺旋构象48–H54(α2; 图2一和3一).
| 图2 pLAST的结构特征。(一)PP(蓝色丝带)和CD(橙色/红色丝带)的带状图鲎属对眼立体图中的虾青素酶原。常规二级结构元素(螺旋α1–α8英寸蓝色/砖色和β-股β1–β7(橙色),以及N末端和C末端。活化解理位点K48–否49由绿色箭头精确定位,催化锌被描绘成紫色球体。与锌结合有关的残留物及其侧链显示为棍子并标记(D38蓝色;H(H)139,H143和H149红色;Y(Y)198绿色),以及蛋氨酸(M196绿色),一般的碱性/酸性谷氨酸(E140)突变为丙氨酸(红色)和两个二硫键(黄色;1,C90–C244; 2、C112–C131). (b条)酶原的结构显示CD和PP的静电表面为淡蓝色条带,沿与底物相反的方向穿过深且延伸的活性位点裂缝。“天冬氨酸开关”残基D的侧链38显示并标记。(c(c))的特写视图(一)描述了催化锌离子扭曲的八面体配位球。Nɛ2H原子139和H149以及Oδ1和Oδ2D的原子38与金属躺在一个平面上。H143N个ɛ2更遥远的是,Y198O(运行)η原子占据顶端位置。Met-turn,包括M196,被描绘成一条青色丝带并贴上标签。 |
| 图3 主动侧裂细节和pLAST的激活机制。(一)图2的特写视图(一)立体描绘参与PP-CD相互作用的残基与绿色(PP;蓝色标签)或紫色(CD;红色标签)中的C原子粘附。残留物标签如图2所示(c(c))为了清楚起见,没有包括在内。(b条)C的立体声叠加αpLAST实验结构的痕迹(CD部分为棕色,PP部分为半透明海蓝宝石)和字母折叠LAST(在鲑鱼中)的同源模型,以说明所提出的激活机制。在分段G中发现微小差异199–D206(1) 和E150–E179(2) 由于闭合运动使裂缝稍微变窄。“激活段”(3;P180–否187)和成熟CD(4;N49–左56). 绿色箭头指明了成熟后的拟议运动。 |
与其他阿斯塔辛一样,195-残留CD分为大小大致相同的NTS和CTS(图2一). NTS具有丰富的规则二级结构,由五股拱绞结构组成β-薄板(β1–β5) ,除最下面的外,其股线平行于活性位点裂缝(β4) ,它是反平行的,框架的上边缘的裂缝。板材的凹面容纳三个螺旋(α3–α5) 其中有一个“支撑螺旋线”(α4) 和“活性位点螺旋”(α5) 通常具有阿斯塔辛和美辛辛的特征(博德等。, 1993; 斯特克等。, 1993; Stöcker&Bode,1995年; Gomis-Rüth,2009年; 戈米斯·吕斯(Gomis-Rüth)、特里罗·穆约(Trillo-Muyo)等。, 2012; Cerdá-Costa&Gomis-Rüth,2014年; 阿洛拉斯等。, 2018). 活性位点螺旋包含保守锌结合基序(H139-E类-X(X)-X(X)-H(H)-X(X)-X(X)-G公司-X(X)-X(X)-H(H)149在pLAST中)发现于虾青素和其他甲锌素中,其特征是三种金属结合组氨酸和一般的碱性/酸性谷氨酸,此处被丙氨酸取代(见上文和图2c(c)). 基序的甘氨酸(G146)多肽在进入CTS时经历了一个急剧的向下转向,与NTS相比,CTS更不规则。它包含两个短螺旋(α6和α7) 和短发β-色带β6β除了“C端螺旋线”之外,还有7个(α8) 这也是metzincins的特点。值得注意的是metzincins的另一个保守结构元素,即“Met-turn”,它是一个紧1,4圈(S194–左197)包含严格保守的M196(图2c(c)). 它的侧链为金属结合位点提供了一个疏水性枕,这对美辛的稳定性和功能至关重要(塔兰特、加西亚-卡斯特拉诺斯等。, 2010). 蛋氨酸下游,Y198通过距离稍远的O提供CD的第四个锌配体η原子。在其他虾青素中,这种残基在“酪氨酸开关”及其O后与底物结合时摆动η原子参与稳定反应中间体催化期间(Stöcker&Yialouros,2013). 最后,一个二硫键将NTS的背面与C末端螺旋连接起来αCTS(C)的8个90–C244)和第二个单链股β4,回路连接β5和α5(升β5α5) (C)112–C131)(图2一).
3.3. 潜伏期机制
pLAST中的延迟是通过阻止PP对基板的访问来实现的,PP以与基板相反的方向穿过CD部分的活性位点缝隙(图2一, 2b条和3一). 这是一种防止过早自溶性卵裂的策略顺式(Khan和James,1998年; 阿罗拉斯等。, 2018). 此外,多肽链没有采用需要裂解底物的延伸构象(廷达尔等。, 2005)但更确切地说,上述环形结构从裂缝中凸出(图2b条). 这可以防止可剪断键延伸到裂缝子网站S上1和(图3一)这是另一种防止不希望的卵裂的机制(Arolas等。, 2018). PP-CD相互作用覆盖的表面跨度1207 Å2,在蛋白质-蛋白质复合物的报告范围内(~380–3390 Å2; 陈等。,2013年),在界面形成时具有溶剂化自由能增益(Δ我G公司)第页,共−16.9页 千卡 摩尔−1(Krissinel&Henrick,2007)),表明存在较强的交互作用。参与结构元件包括整个PP和N段49–V型52,D110–V型116,Y129–H143,周148–否152,S170–百万178,Y198–T型208和P223–K(K)226在CD的任何一个部分的17对残基之间建立了20个静电相互作用和疏水接触(表2).
聚丙烯 | 光盘 | 距离(Ω) | 氢键(<3.5 Å) | E类22O(运行) | W公司225N个δ1 | 2.8 | N个23N个δ2 | T型201O(运行)γ1 | 3 | N个23N个δ2 | G公司207O(运行) | 2.9 | D类26O(运行)δ1 | W公司225N个 | 3.1 | D类26O(运行)δ2 | V(V)224N个 | 3 | P(P)28O(运行) | C类112N个 | 2.9 | E类36O(运行) | Y(Y)198O(运行)η | 2.7 | E类36O(运行)ɛ1 | H(H)149N个δ1 | 3.1 | E类36O(运行)ɛ2 | N个152N个δ2 | 2.9 | D类38O(运行) | S公司114N个 | 3 | D类38O(运行)δ1 | Y(Y)198O(运行)η | 3 | 一个40N个 | S公司114O(运行) | 3.2 | 一个46O(运行) | Y(Y)173O(运行)η | 2.8 | D类47O(运行) | 我51N个 | 3.2 | D类47O(运行)δ1 | N个49N个 | 2.8 | D类47O(运行)δ1 | 一个50N个 | 3.3 | K(K)48N个ζ | Y(Y)173O(运行) | 2.7 | K(K)48N个ζ | N个176O(运行) | 3.1 | 金属有机键 | D类38O(运行)δ1 | 锌999 | 2.2 | D类38O(运行)δ2 | 999锌 | 2.4 | 范德瓦尔斯相互作用(<4 Å) | P(P)28 | C类112 | | P(P)28 | C类131 | | L(左)29 | L(左)136 | | L(左)29 | Y(Y)198 | | L(左)29 | V(V)224 | | Y(Y)30 | Y(Y)198 | | Y(Y)30 | 一个202 | | Y(Y)30 | F类203 | | L(左)34 | W公司113 | | F类35 | 我51 | | F类35 | W公司148 | | 我39 | W公司148 | | 我39 | V(V)116 | | 一个40 | W公司113 | | 一个40 | M(M)115 | | V(V)42 | 我51 | | Y(Y)45 | Y(Y)173 | | | |
pLAST(K)的一级活化位点48–否49)插入短螺旋α2和埋藏在酶原中,从而以与原天冬氨酸(格瓦拉等。, 2010). 此外,K48N个ζ与Y产生强烈的互动173O(2.7) 隔开)和N176O(3.1) 光盘上的()和E36O(运行)ɛ2(2.7 聚丙烯基序的?),这同样阻碍了激活。后一种相互作用使人联想到基质金属肽酶(MMP)酶原(P-R-C-G)中的PP基序中精氨酸和天冬氨酸之间的双盐桥-X(X)-P-D;van Wart和Birkedal-Hansen,1990年; 斯普林曼等。, 1990; 马雷罗·塔兰特等。, 2010; 阿洛拉斯等。, 2018). 此外,活化顺硅键N原子与D结合47O(运行)δ2(2.8 在PP中,激活位点在酶原中受到额外保护。所有这些发现都支持pLAST的成熟,pLAST需要激活位点两侧片段的部分展开和/或初步裂解,如小龙虾虾青素(Yiallouros等。, 2002; 格瓦拉等。, 2010).
延迟最相关的元素是D38,通过其O以双齿方式结合催化锌δ1(2.2 ?)和Oδ2(2.4 原子(图2c(c)),从而取代了成熟MP中催化所需的催化溶剂(Arolas等。, 2018). 这种天冬氨酸嵌入PP基序中,与H一起形成一个扭曲的八面体金属配位球139N个ɛ2(2.1 ?)和H149N个ɛ2(2.1 与阳离子和H在平面上143N个ɛ2(2.1 ?)和Y198O(运行)η(3.3 在顶端位置。因此,D38作为一个“天冬氨酸开关”,用于之前描述的小龙虾虾青素(格瓦拉等。, 2010)和人类meprinβ(阿洛拉斯等。, 2012)在虾青素(见下文)和脆弱素-3(古拉斯等。, 2011)和细菌MMP karilysin(Cerdá-Costa等。, 2011)在其他metzincin(Arolas等。, 2018).
3.5. 与其他虾青素潜伏期机制的比较
迄今为止,小龙虾原天门冬氨酸(PDB条目)的晶体结构3lq0个; 格瓦拉等。, 2010),人原-蛋氨酸β(PDB条目4千兆瓦; 阿罗拉斯等。, 2012)以及来自两种密切相关的细菌的原甲氧基蛋白酶,深部Myroides defundi(PDB条目5兆瓦; 徐等。, 2017)和Myroides公司sp.CSLB8(PDB条目5千兆瓦; 徐等。, 2017),以及它们各自的成熟形式虾青素(PDB条目第一次; 博德等。, 1992; 戈米斯·吕斯等。, 1993),梅普林β(PDB条目4千兆; 阿洛拉斯等。, 2012)和来自杨梅属sp.CSLB8(PDB条目5兹克; 跑等。, 2020). 这两种蛋白质来自Myroides公司99.6%相同,所以只有来自Myroides公司sp.CSLB8将在这里进行讨论。在所有这些结构中,只有前分子β跨越CD下游的其他域,即MAM域和TRAF域(Arolas等。, 2012). 图4提供了叠加在成熟形式上的三种酶原的图片,以及pLAST结构和LAST模型的图片(一)–4个(d日).
| 图4 用报道的酶原结构和保守的PP基序激活虾青素。(一)–(d日)C的双目立体图中的叠加α潜在和成熟形式的标准定向痕迹(一)鲎属虾青素(潜伏,PDB进入8a28号; 成熟,字母折叠型号)(b条)小龙虾虾青素[潜伏,PDB进入3lq0个(格瓦拉等。, 2010); 成熟,PDB入口第一次(博德等。, 1992; 戈米斯·吕斯等。, 1993)], (c(c))人甲氧麻黄酮β[潜在的PDB条目4千兆瓦(阿洛拉斯等。, 2012); 成熟,PDB入口4千兆(阿洛拉斯等。, 2012)]以及(d日)Myroides公司sp.CSLBB溶血素[潜伏,PDB进入5千兆瓦(徐)等。, 2017); 成熟,PDB入口5兹克(跑步等。, 2020)]. 成熟形式为橙色,酶原为青色(PP)和黄色(CD)。催化锌离子被描绘成紫色球体。美普林的PPβN端延伸,穿过邻近TRAF域的前表面(未显示;Arolas等。, 2012). 成熟卵裂过程中最相关的重排片段,即“激活片段”和成熟N末端片段,分别由每个结构中的绿星和红星确定。(e(电子))包含虾青素PP基序(F-E-G-D-I)的片段在pLAST(青色中的C原子)、小龙虾原天门冬氨酸(棕褐色中的C元素)和人类原蛋氨酸中的重叠β(李子中的C原子)。溶血素缺乏这个基序。 |
在所有情况下,成熟的N-末端都埋藏在催化部分内,并通过N-末端天冬酰胺(LAST和meprin)直接与虾青素家族特异性谷氨酸结合β)或甘氨酸(myroilysin)或由溶剂分子介导,因为N末端片段短一个残基(astacin)。新的N末端在酶原中的位置和成熟部分在虾青素中的位置非常接近(~2 Å; 图4b条),离梅普林很近β(∼6 Å; 图4c(c)),最后距离更远(~11 Å; 图4一)最远的是myroilsin(~17 Å; 图4d日).
对四个酶原-成熟酶对的详细分析表明,在所有情况下,PP的规则二级结构都很差,并且采用了一种主要延伸的构象,该构象沿着与底物相反的方向穿过活性位点裂缝。在原甲素中,它在N端被额外拉长,并沿着NTS的前表面进一步延伸(图4d日),而在原-蛋氨酸中β(图4c(c))它沿着CD右侧的相邻TRAF结构域以延伸构象运行(未显示)。在所有情况下,构成活性部位裂口底部非质膜侧的CTS区域构成激活片段,在成熟分裂和新N末端重新定位时进行重排。在虾青素中,只有这个激活片段(I130–E139,根据PDB条目进行成熟酶编号第一次; 全基因编号增加49;参见UniProt P07584)重组,而分子的其余部分在酶原(格瓦拉等。, 2010; 图4b条). 接下来,LAST最有可能经历两个片段的轻微重排(G199–D206和E150–E179)除了激活段的主要运动(P180–否187; 见第3.4节和图4一). 梅普林β反过来,重新定位其大部分CTS(Q164–Y211和L199–D233根据UniProt Q16820;段D194–左199在酶原结构中被扰乱),在一个协调的铰链运动中,完全闭合其底部的裂缝以响应成熟(图4c(c)). 最后,在粘液溶素中观察到最大偏差,它重新排列了除Met-turn和C末端螺旋外的整个CTS(图4d日). 受影响的部分为Q155–A201和Y210–否225(根据PDB条目进行溶血素编号5千兆瓦; 另请参见UniProt A0A0P0DZ84)。大襟翼(N160–S193)它包含两个螺旋,折叠在活性位点裂缝的顶部,并将PP捕获在酶原中。成熟后,此皮瓣向右旋转,最大移位约17 ?(在P处测量176)从而解放了通往裂缝的通道(图4d日).
酶原中阻断锌离子的残基也存在差异。三种后生动物蛋白质在PP基序中含有天冬氨酸,该基序在结构上是保守的(图4e(电子)),充当天冬氨酸开关。相比之下,细菌酶缺乏PP基序,而是具有半胱氨酸,半胱氨酸根据“半胱氨酸开关”机制阻断锌(Ran等。, 2020; 徐等。, 2017). 此外,半胱氨酸侧翼的多肽链是典型的延伸构象,不采用PP基序的环。总的来说,这与MMPs相反,在MMPs中,典型脊椎动物的直系亲属根据半胱氨酸转换机制调节潜伏期(Springman等。, 1990; van Wart和Birkedal Hansen,1990年; 罗森布拉姆等。, 2007; 塔兰特,马拉罗等。, 2010; 阿洛拉斯等。, 2018),而来自牙周病病原体的细菌同源karilysin连翘单核菌而是根据天冬氨酸开关进行操作。与虾青素一样,基质金属蛋白酶仅在动物外分散存在,并且有人提出,karilysin是通过宿主和定殖细菌之间的密切相互作用促进水平基因转移而从哺乳动物宿主中共生的外来物种(Cerdá-Costa等。, 2011). 考虑到以下情况,可以想象虾青素中的粘液溶素也有类似的来源Myroides公司据报道,几种体液中存在spp.,可引发感染,导致人类软组织感染(马拉基等。, 2012)糖尿病患者(Endicott-Yazdani等。, 2015). 因此,与基质金属蛋白酶一样,原生动物和细菌异种动物的潜伏期机制在虾青素中也会有所不同。