跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年2月11日；13(4):5967-5985.
doi:10.18632/aging.202520。 Epub 2021年2月11日。

hUCMSCs衍生的外泌体转移lncRNA UCA1通过抑制miR-143靶向的Bcl-2降解来保护机体免受缺氧/复氧损伤

李维雕 1 2, 张庆华 2
附属公司

hUCMSCs衍生的外泌体转移lncRNA UCA1通过抑制miR-143靶向的Bcl-2降解来保护机体免受缺氧/复氧损伤

李维雕等人。 老龄化（纽约州奥尔巴尼市）. .

摘要

缺血通过基因转录和蛋白表达的改变导致神经元损伤。长非编码RNA（LncRNAs）在低氧/复氧（H/R）中调控靶蛋白表达中起着关键作用。在本研究中，我们观察了外显体携带的lncRNA UCA1在H/R诱导的心肌微血管内皮细胞（CMEC）损伤中的作用。在H/R细胞模型中，CMEC与人脐带间充质干细胞衍生外泌体（hUCMSC-ex）共同培养。进行功能丧失实验，通过评估CMEC的生物学行为来评估lncRNA UCA1对H/R损伤的影响。验证了lncRNA UCA1、miR-143和Bcl-2之间的关系。建立大鼠缺血再灌注模型。然后将hUCMSC-ex注射到I/R大鼠体内，以鉴定其对细胞凋亡和自噬的影响。进行了功能性救援实验，以验证海绵系统。体外和体内实验表明，hUCMSC-ex可保护I/R大鼠和H/R CMEC免受损伤。沉默hUCMSC-ex或miR-143过度表达的UCA1加重CMEC的H/R损伤。LncRNA UCA1竞争性结合miR-143上调Bcl-2。hUCMSCs-ex/si-UCA1+inhi-miR-143治疗保护CMEC免受H/R损伤并抑制超自噬。总之，hUCMSC-ex衍生的lncRNA UCA1通过miR-143/Bcl-2/Beclin-1轴减轻H/R损伤。因此，本研究强调了一种基于干细胞的方法来对抗I/R损伤。

关键词：外体；人脐带间充质干细胞；缺氧/复氧；缺血再灌注；lncRNA UCA1。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突：提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1
图1
hUCMSCs及其衍生的hUCMSC-ex成功分离。(A类)培养1周后和传代3时hUCMSCs的鉴定。(B类)流式细胞术检测间充质细胞表面标志物（CD29、CD44、HLA-I、CD34、CD38和HLA-DR）的表达。(C类)免疫荧光法检测hUCMSCs的神经原性诱导。(D类)油红O染色检测hUCMSCs的成脂诱导。(E类)茜素红染色检测hUCMSCs的成骨诱导。(F类)外泌体形态的TEM观察。(G公司)使用ZETASIZER纳米系列-Nano-ZS计算的外泌体粒径。(H（H）)Western blot法测定分离的人脐静脉间充质干细胞-内皮细胞中CD63和CD81的蛋白表达。所有实验重复3次。面板中的数据(H（H）)通过双向方差分析进行分析，并通过Tukey的多重比较检验进行方差分析后的成对比较*第页<0.05。
图2
图2
hUCMSC-ex以浓度依赖的方式促进H/R损伤的CMEC的生长并抑制其凋亡。(A类)48小时后（左侧）和5-7小时后在显微镜下观察到CMEC第个d（右）细胞培养。(B类)细胞培养7天后，荧光显微镜下Dil-ac-LDL-阳性CMEC（红色）和DAPI阳性（蓝色）。(C类)CCK-8与hUCMSC-ex共培养后检测CMEC的活性(D类)与hUCMSC-ex共培养后，通过Transwell分析评估CMEC的侵袭性(E类)与人脐静脉间充质干细胞-内皮细胞共培养后，通过划痕试验评估CMEC的迁移(F类)与hUCMSC-ex共培养后TUNEL阳性CMEC的数量(G公司)与人脐静脉间充质干细胞（hUCMSC-ex）共培养后用流式细胞术评估CMEC的凋亡率(H（H）)Western blot检测与人脐静脉间充质干细胞-内皮细胞共培养后CMEC中凋亡相关蛋白Cleaved caspase3和Bax的表达。(我)CMEC与hUCMSC-ex共培养后的试管形成*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(C类–G公司,我)采用单因素方差分析，面板数据(H（H）)采用双向方差分析进行分析，方差分析后采用Tukey多重比较检验进行两两比较。
图3
图3
hUCMSC-ex保护大鼠免受I/R损伤。(A类)HE染色检测注射不同浓度hUCMSC-ex（n=3）的大鼠心肌病理形态学。(B类)通过ELISA试剂盒测量注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠的心功能指数LDH和CK水平（n=8）。(C类)透射电镜下观察注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠CMEC的超微结构（n=3）。(D类)用ELISA试剂盒测定注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠的血清TM和vWF水平（n=8）。(E类)流式细胞术测定注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠CECs数量（n=8）。(F类)注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠CD31+TUNEL阳性CMEC（n=3）。CMEC用CD31标记为红色，TUNEL阳性细胞为绿色，DAPI为蓝色。(G公司)注射不同浓度hUCMSC-ex的I/R大鼠动脉内膜结构的HE染色（n=3）*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05,与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(B类)采用独立t检验和面板数据进行分析(E、 F类和G公司)采用单因素方差分析进行分析，方差分析后采用Tukey多重比较检验进行两两比较。
图4
图4
hUCMSC-ex保护CMEC免受H/R损伤后的自噬。(A类)自噬体的透射电镜观察；(B类)H/R损伤下CMEC中LC3的荧光定位。LC3标记为绿色荧光，细胞核标记为DAPI，CMEC标记CD31标记为红色荧光。(C类)通过Western blot检测H/R损伤下CMEC中LC3-II/LC3-I、Beclin-1和p62的表达*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05,与H/R或I/R组。所有实验都重复了3次。面板中的数据(B类和C类)采用单因素方差分析和Tukey多重比较检验进行分析。
图5
图5
hUCMSC-ex中LncRNA UCA1沉默促进CMEC的H/R损伤。(A类)RT-qPCR检测CMEC中LncRNA UCA1的表达；(B类)CCK-8检测到CMEC的活性。(C类)通过Transwell分析评估CMEC的侵袭性。(D类)与人脐静脉间充质干细胞-内皮细胞共培养后，通过划痕试验评估CMEC的迁移(E类)TUNEL阳性CMEC的数量。(F类)流式细胞术评估CMEC的凋亡率。(G公司)Western blot法检测CMEC中凋亡相关蛋白Cleaved caspase3和Bax的表达。(H（H）)CMEC中的管形成*第页< 0.05,与.对照组或hUCMSCs-ex组#第页< 0.05,与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(G公司)采用双向方差分析，其他面板的数据采用单向方差分析，然后采用Tukey多重比较检验。
图6
图6
LncRNA UCA1可竞争性结合miR-143上调Bcl-2。(A类)双荧光素酶报告基因分析验证了lncRNA UCA1与miR-143、Bcl-2与miR-145之间的结合关系。(B类)RNA下拉验证了lncRNA UCA1和miR-143以及Bcl-2和miR-142之间的结合关系。(C类)双色荧光原位杂交证实了Bcl-2与miR-143之间的结合关系。miR-143的探针被标记为红色荧光，BCL2的探针则被标记为绿色荧光，黄色荧光是miR-143-和BCL2的重叠，表明miR-143/BCL2直接相关。(D类)心肌细胞和心肌组织中lncRNA UCA1、miR-143、Bcl-2和Beclin-1的表达。(E类,F类)miR-143模拟物或抑制剂转染后，用RT-qPCR检测miR-143、Bcl-2和Beclin-1的表达；(G公司)用蛋白质印迹法测定Bcl-2和Beclin-1蛋白水平以及MDM2/p53通路相关蛋白水平*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05,与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(B类和E类)采用单因素方差分析和面板数据进行分析(A类,D类,F类和G公司)采用双向方差分析，然后进行Tukey多重比较检验。
图7
图7
hUCMSC ex保护CMEC免受H/R损伤。(A类)CCK-8检测转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC的活性。(B类)通过Transwell分析评估转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC的侵袭性。(C类)通过划痕试验评估转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC的迁移。(D类)转染miR-143模拟物或抑制剂的TUNEL阳性CMEC的数量。(E类)通过流式细胞术评估转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC的凋亡率。(F类)通过Western blot检测转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC中凋亡相关蛋白Cleaved caspase3和Bax的表达。(G公司). 转染miR-143模拟物或抑制剂的CMEC中的试管形成*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05,与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(F类)采用双向方差分析，其他面板的数据采用单向方差分析，然后采用Tukey多重比较检验。
图8
图8
hUCMSC ex中的LncRNA UCA1通过削弱miR-143靶向抑制Bcl-2来保护CMEC免受H/R损伤后的自噬。(A类)CCK-8检测到CMEC的活性。(B类)通过Transwell分析评估CMEC的侵袭性。(C类)通过划痕测试评估CMEC的迁移。(E类)自噬体的透射电镜观察；(F类)H/R损伤下CMEC中LC3的荧光定位。LC3标记为绿色荧光，细胞核标记为DAPI，CMEC标记CD31标记为红色荧光。(G公司)通过Western blot分析测定H/R损伤下CMEC中LC3-II/LC3-I和Beclin-1蛋白水平*第页< 0.05,与.对照组#第页< 0.05,与H/R组。所有实验重复3次。面板中的数据(A类–G公司)采用独立t检验进行分析。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. De Pascali F、Hemann C、Samons K、Chen CA、Zweier JL。缺氧和复氧通过四氢生物蝶呤耗竭和S-谷氨酰化诱导内皮细胞中内皮一氧化氮合酶解偶联。生物化学。2014; 53:3679–88. 10.1021/bi500076r-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Coimbra-Costa D、Alva N、Duran M、Carbonell T、Rama R。大鼠脑急性呼吸缺氧和复氧后的氧化应激和细胞凋亡。氧化还原生物。2017; 12:216–25. 2016年10月10日/j.redox.2017.02.14-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 特拉华州希尔。心肌缺血再灌注损伤的发病机制和治疗原理。Am J Cardiol公司。2010; 106:360–68. 2016年10月10日/j.amjcard.2010.03.032-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Hausenloy DJ，Yellon DM。心肌缺血再灌注损伤：一个被忽视的治疗靶点。临床投资杂志。2013年；123:92–100. 2017年10月10日/JCI62874-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Loyer X，Vion AC，Tedgui A，Boulanger CM。微泡作为心血管疾病的细胞间信使。2014年Circ Res；114:345–53. 10.1161/CIRCRESAHA.113.00858-内政部-公共医学

出版物类型