Sea cucumber Cucumaria frondosa fucoidan inhibits osteosarcoma adhesion and migration by regulating cytoskeleton remodeling

doi:10.3892/or.2020.7614

.2020年8月；44(2):469-476.

doi:10.3892/或.2020.7614。 Epub 2020年5月19日。

海参Cucumaria frondosa褐藻糖胶通过调节细胞骨架重塑抑制骨肉瘤黏附和迁移

张明磊¹, 李晨², 杨柳^三, 陈明慧⁴, 张爽（音译）⁵, 大良港¹

附属公司

¹吉林大学中日协和医院骨科，中国吉林省长春市，邮编：130033。
²吉林大学口腔医学院口腔放射科，长春，吉林130021，中国。
^三吉林大学附属第二医院放射科，长春，吉林130041，中国。
⁴吉林大学附属第二医院心血管内科，长春，吉林130041，中国。
⁵长春中医药大学附属医院保健科，长春，吉林130021，中国。

PMID： 32467988
预防性维修识别码：项目管理委员会7336482
内政部： 10.3892/或.2020.7614

海参Cucumaria frondosa褐藻糖胶通过调节细胞骨架重塑抑制骨肉瘤黏附和迁移

张明磊等。及国际医学权威期刊. 2020年8月.

.2020年8月；44(2):469-476.

doi:10.3892/或.2020.7614。 Epub 2020年5月19日。

作者

张明磊¹, 李晨², 杨柳^三, 陈明慧⁴, 张爽（音译）⁵, 大良港¹

附属公司

¹吉林大学中日协和医院骨科，中国吉林省长春市，邮编：130033。
²吉林大学口腔医学院口腔放射科，吉林省长春市，邮编130021。
^三吉林大学附属第二医院放射科，长春，吉林130041，中国。
⁴吉林大学附属第二医院心血管内科，长春，吉林130041，中国。
⁵中华人民共和国吉林省长春市长春中医药大学附属医院保健科130021。

PMID： 32467988
预防性维修识别码：第7336482页
内政部： 10.3892/或.2020.7614

摘要

骨肉瘤（OS）因其潜在的恶性转移而被证明是难以治愈的。因此，迫切需要阻断OS转移潜能的新治疗方法来改善OS患者的预后。在本研究中，通过细胞粘附试验、Transwell试验和U2OS细胞迁移试验评估了海参褐藻多糖（Cf‑Fuc）对骨肉瘤细胞的抗转移能力。还探讨了细胞骨架动态重塑的潜在机制。目前的数据表明，Cf‑Fuc可以阻断U2OS骨肉瘤细胞与纤维连接蛋白的粘附，并显著抑制U2OS细胞迁移。Cf‑Fuc显著降低了U2OS细胞的迁移能力，Cf‐Fuc‑处理细胞的迁移距离和迁移速度显著降低。此外，Cf‑Fuc可能通过抑制黏着斑激酶和paxillin的磷酸化以及Rac1/PAK1/LIMK1/cofilin信号轴的激活来损害细胞骨架的动态重塑。总之，本研究结果提供了一种新的治疗骨肉瘤转移的佛氏藻多糖的潜力。

关键词：黄瓜；褐藻糖胶；骨肉瘤转移。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
Cf-Fuc对U2OS细胞的细胞毒性作用。数据表示为平均值±标准偏差。*与对照组相比，P<0.05。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图2。**
Cf-Fuc抑制U2OS细胞粘附。将U2OS细胞接种到预先涂有纤维连接蛋白的96-well板中，以在指定的时间点（0.5、1、2和4小时）评估粘附。贴壁细胞固定，然后用结晶紫染色。使用微孔板阅读器对染料进行定量。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图3。**
Transwell分析。将与Cf-Fuc一起或不与Cf-Fuc一起孵育的U2OS细胞置于Transwell插入物中。然后将迁移的细胞固定并用结晶紫染色。在五个随机场中对迁移的细胞进行计数。呈现代表性图像，数据表示为平均值±标准偏差。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图4。**
Cf-Fuc对U2OS细胞迁移轨迹的影响由风道图证明。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图5。**
Cf-Fuc对U2OS细胞速度的影响***与对照组相比，P<0.001。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图6。**
Cf-Fuc对U2OS细胞肌动蛋白聚合的影响。将U2OS细胞接种到预先涂有纤维连接蛋白的24孔板中，然后用或不用Cf-Fuc处理。用荧光微板阅读器测量提取的罗丹明-指骨肽的荧光，计算F-肌动蛋白。条形图指示F-肌动蛋白含量的变化，其表示为在时间0时细胞的平均荧光强度的相对倍数变化。数据表示为平均值±SD。Cf-Fuc，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图7。**
Cf-Fuc抑制FAK和paxillin的磷酸化。（A）将U2OS细胞接种到预先涂有纤维连接蛋白的6孔板中，并让其粘附4h。通过western blotting检测总蛋白和磷酸化蛋白。GAPDH的印迹显示了相同的负载。用ImageJ软件定量分析（B）p-FAK/总FAK和（C）p-paxillin/总paxillin。与对照组相比，数据以平均值±标准偏差表示。**P<0.01，***P<0.001。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶。

**图8。**
Cf-Fuc对U2OS细胞Rac1激活的影响。（A） Rac1活化分析。（B） Rac1活化的定量分析。数据以平均值±标准偏差表示。***P<0.001与对照组相比。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶；Rac1，Ras-related C3肉毒杆菌毒素底物1。

**图9。**
Cf-Fuc影响U2OS细胞中的PAK1/LIMK1/cofilin信号轴。（A）通过免疫印迹法测定PAK1、LIMK1和cofilin的总蛋白和磷酸化蛋白。GAPDH的印迹显示了相同的负载。（B）通过ImageJ进行定量分析。数据以平均值±标准偏差表示。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Cf-Fuc、，*北大西洋海参*褐藻糖胶；PAK1，p21-活化激酶1；LIMK1、LIM结构域激酶1。

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