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.2018年6月11日;13(6):e0198943。
doi:10.1371/journal.pone.0198943。 2018年eCollection。

通过连续传代评估RAW 264.7细胞株的表型和功能稳定性

附属公司

通过连续传代评估RAW 264.7细胞株的表型和功能稳定性

Bartłomiej Taciak先生等。 公共科学图书馆综合版. .

摘要

已建立的细胞系广泛用于研究,但一个吸引人的问题是不同实验室之间细胞的可比性、特征和时间稳定性。问题还在于细胞系错误识别、遗传和表型改变或支原体污染,而这些在研究论文中往往被遗忘。40多年来,单核细胞/巨噬细胞样细胞系RAW 264.7一直是最常用的髓细胞系之一。尽管它的表型和功能稳定性经常在文献或各种科学讨论小组中讨论,但它们在连续传代期间的稳定性尚未在任何可靠的研究中得到证实。到目前为止,只研究了这些细胞的一些功能特征,例如它们分化为破骨细胞的能力。因此,本文研究了RAW 264.7细胞从第5代到第50代的表型和功能稳定性。我们发现RAW 264.7细胞系的表型(特定巨噬细胞特征基因和表面标记的表达)和功能特征(吞噬作用和NO生成)在传代过程中保持稳定:从第10代到第30代。总的来说,我们的结果表明RAW 264.7细胞系不应在第30代传代后使用,否则可能会影响数据的可靠性。

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数字

图1
图1。qPCR分析。
显示在RAW264.7细胞的不同传代中所选基因的qPCR分析结果的热图。基因表达的差异由三个生物复制品和三个技术复制品的ΔΔCt值表示。本实验的对照组由第5代细胞组成。它们的基因表达值等于1。使用R进行分析(https://cran.r-project.org)程序包gplots[25]。
图2
图2。流式细胞术分析。
流式细胞术分析RAW 264.7细胞上CD11b、CD11c、CD86、CD200R、CXCR4和Ly6C表面标记物的表达。表达式的值表示为MFI(平均荧光强度)的几何平均值。*-p值<0.05,**-p值<0.01。
图3
图3。吞噬试验。
RAW 264.7细胞不同传代的吞噬试验结果。图A、C、E显示吞噬细胞的百分比,与乳胶珠结合的FITC荧光染色呈阳性。图B、D、F显示了吞噬作用的强度,用乳胶珠的平均荧光强度表示。A、 B–RAW 264.7细胞的吞噬作用。C、 D–LPS处理的RAW 264.7细胞的吞噬作用。E、 F–RAW 264.7细胞在不同条件下吞噬能力的比较,冰对照表明吞噬试验的技术控制。*-p值<0.05,**-p值<0.01。
图4
图4。细胞培养基中的氮水平。
RAW 264.7细胞不同传代培养液中的氮水平。对照细胞和LPS刺激细胞中NO水平的比较。B–24小时LPS刺激RAW 264.7细胞产生一氧化氮。数据表示为产生的亚硝酸盐的平均浓度,以标准曲线为基础进行计算*-p值<0.05,**-p值<0.01,**-p-值<0.001,***-p值<0.0001。

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引用人

工具书类

    1. 硕士JR。人类癌症细胞系:事实与幻想。Nat Rev Mol细胞生物学。2000;1: 233–236. 数字对象标识:10.1038/35043102-内政部-公共医学
    1. Geraghty RJ、Capes Davis A、Davis JM、Downward J、Freshney RI、Knezevic I等。细胞系在生物医学研究中的使用指南。英国癌症杂志。2014;111: 1021–1046. 数字对象标识:10.1038/bjc.2014.166-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Briske-Anderson MJ,Finley JW,Newman SM。培养时间和传代次数对Caco-2细胞形态和生理发育的影响。Proc Soc Exp Biol Med Soc实验生物医学N Y N.1997;214: 248–257.-公共医学
    1. Calles K,Svensson I,Lindskog E,Häggström L.条件培养基因子和传代数对Sf9细胞生理学和生产力的影响。生物技术计划。2006;22: 394–400. 数字对象标识:10.1021/bp050297a-内政部-公共医学
    1. Chang-Liu CM,Woloschak GE。传代数对细胞对DNA损伤剂反应的影响:细胞存活和基因表达。癌症快报。1997;113: 77–86.-公共医学

出版物类型

赠款和资金

本文所述的研究由国家科学中心的UMO-2015/18/E/NZ6/00642 SONATA BIS资助。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。