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比较研究
.2008年2月；153(4):805-19.
doi:10.1038/sj.bjp.0707601。 Epub 2007年11月26日。

典型核受体活化剂对人肝细胞和肠细胞药物处置蛋白诱导谱的比较

P马丁 1, R莱利, D J背面, A欧文
附属公司
比较研究

典型核受体活化剂对人肝细胞和肠细胞药物处置蛋白诱导谱的比较

P马丁等。 杂志. 2008年2月.

摘要

背景和目的：某些核受体（NR），如构成性雄甾烷受体（CAR）、孕烷X受体（PXR）和法尼类X受体（FXR）介导一些细胞色素P450酶和ABC转运体的诱导，但存在相互矛盾的报道。本研究的目的是评估这些差异的原因，并使用标准化方法比较NRs激活剂。

实验方法：在分析CYP2B6、CYP3A4、CYP3A5、ABCB1、ABCC1、ABCC、PXR、CAR和FXR的mRNA和蛋白质之前，将地塞米松、孕烯醇酮16a-甲腈、利福平、苯巴比妥和鹅去氧胆酸与HepG2、Caco-2和冷冻保存的人肝细胞孵育。

关键成果：地塞米松显著上调HepG2和Caco-2细胞中PXR、CYP3A4和ABCB1的表达。因此，将地塞米松作为培养基补充物掩盖了孕烯醇酮16a-甲腈对这些基因的诱导作用，这可能解释了以前的报道之间的差异。在没有地塞米松的情况下，在所有类型的细胞中都观察到显著的激活剂依赖性诱导。mRNA和蛋白质的倍数增长之间存在显著相关性，在大多数情况下，这是对数增长。细胞系中mRNA表达的变化大于原代细胞，但大多数转录物在HepG2和肝细胞中的倍数增加之间存在相关性。

结论和影响：显然，没有一个体外系统可以模拟体内完整器官内肝细胞或肠细胞的生理学，但这些数据解释了实验室之间报告的一些差异，并对研究设计具有重要意义。

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数字

图1
图1
地塞米松作为媒体补充的意义。(一,b条)DEX的影响（0–100μM（M）)对HepG2和Caco-2细胞中CYP3A4、ABCB1和PXR mRNA表达的影响。(c–小时)DEX的影响（500 nM（M）)CYP3A4的诱导性(c,d日)，ABCB1(e（电子）,（f）)和PXR(克,小时)在HepG2和Caco-2细胞中通过PCN。数据是重复进行的四个实验的平均值±标准差。为了清楚起见，并没有给出所有统计分析。对于每个转录物，当细胞单独与PCN孵育时，观察到表达显著增加，如果培养基中包含DEX，则不会出现这种情况。*P（P）<0.05；**P（P）<0.01;***P（P）<0.001.
图2
图2
典型激活剂对CYP亚型的影响。CDCA的影响(一–c)，保时捷中国(d日–（f）)，PB(克–我)和RIF(j个–我)对HepG2、Caco-2和原代肝细胞中CYP2B6、CYP3A4和CYP3A5 mRNA表达的影响。数据是重复进行的四个实验的平均值±标准差。在细胞系中，研究了浓度依赖性，而在原代细胞中，在1μM（M）每种化合物。虚线表示与药物孵育5天后观察到毒性的浓度。为清楚起见，仅对观察到显著差异的最低浓度进行了统计分析：*P（P）<0.05；**P（P）<0.01;***P（P）<0.001.
图3
图3
典型活化剂对转运蛋白的影响。CDCA的影响(一–c)，保时捷中国(d日–（f）)，PB(克–我)和RIF(j个–我)对HepG2、Caco-2和原代肝细胞中ABCB1、ABCC1和ABCC2 mRNA表达的影响。数据是重复进行的四个实验的平均值±标准差。在细胞系中，研究了浓度依赖性，而在原代细胞中，在1μM（M）每种化合物。虚线表示与药物孵育5天后观察到毒性的浓度。为清楚起见，仅对观察到显著差异的最低浓度进行了统计分析：*P（P）<0.05；**P（P）<0.01;***P（P）<0.001.
图4
图4
典型活化剂对核受体的影响。CDCA的影响(一–c)，保时捷中国(d日–（f）)，PB(克–我)和RIF(j个–我)对HepG2、Caco-2和原代肝细胞中CAR、FXR和PXR mRNA表达的影响。数据是重复进行的四个实验的平均值±标准差。在细胞系中，研究了浓度依赖性，而在原代细胞中，在1μM（M）每种化合物。虚线表示与药物孵育5天后观察到毒性的浓度。为清楚起见，仅对观察到显著差异的最低浓度进行了统计分析：*P（P）<0.05；**P（P）<0.01;***P（P）<0.001.
图5
图5
CDCA、PCN、PB和RIF对HepG2和Caco-2细胞中CYP2B6、CYP3A4、CYP3A5、ABCB1、ABCC1和ABCC2蛋白表达的影响。还给出了β-肌动蛋白的结果，以说明等负荷。显示了一个代表性的western blot以及四个重复进行的实验的平均（±s.d.）光学密度测定结果。*P（P）<0.05；**P（P）<0.01;***P（P）<0.001.
图6
图6
mRNA和蛋白质表达之间的关系。CYP2B6在HepG2和Caco-2细胞中mRNA和蛋白表达的相关性(一,b条)，CYP3A4年(c,d日)，ABCB1(e（电子）,（f）)、ABCC1(克,小时)和ABCC2(我,j个). 由于未观察到蛋白质的差异，因此未提供CYP3A5的数据。通过对数回归观察到除ABCC1外的所有CYP和转运蛋白与数据的最佳拟合，ABCC1最好通过线性回归描述。
图7
图7
在原代细胞中观察到的诱导（测量）与HepG2细胞预测的诱导（预测）之间的相关性。对于预测值，将CDCA、PCN和PB的HepG2的对数转换平均折叠变化与每个转录物的原始细胞的对数转换的平均折叠变化绘制成图（回归见表1）。然后，利用合成线的方程式计算出RIF中HepG2折叠变化对原代细胞折叠变化的预测。
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