沙格列汀和他达拉非对环鸟苷单磷酸的不同改变(cGMP公司)主动脉环扎小型猪的信号和左心室功能

终端研究

最初用特拉唑（5 mg·kg）麻醉动物⁻¹)/木聚嗪（2.25 mg·kg⁻¹)异丙酚（6～10mg·kg）混合维持⁻¹·最小值⁻¹如前所述。17肝素的初始负荷剂量为300 U/kg静脉注射，随后每小时维持100 U/kg。进行胸骨正中切开术，并使用经校准的5F导纳型ADVantage导管（Transonic Systems，Inc.；Ithaca，NY）测量压力-容积（P‐V）环，该导管通过一个小的心尖切口放置在左室。经股深静脉将14F球囊封堵导管插入心尖水平的下腔静脉。

体内心血管功能

P‐V实验按照之前发布的方法进行。18简单地说，放置导管后，让动物稳定10分钟，直到建立休息的基线内稳态。在通过球囊导管充气暂时闭塞下腔静脉以降低预载的条件下记录P‐V环。使用Lab Scribe软件（iWorx；Dover，NH），使用至少10个连续的心脏循环生成左室功能指数，包括以下内容：心率、左室收缩末期和舒张末期容积、左室舒张末期压力、射血分数和中风容积。使用至少15个持续减少预负荷的连续心脏周期测量左室收缩力和僵硬指数，包括收缩末期压力-容积关系（ESPVR）、预负荷可恢复性卒中功（PRSW）和舒张末期压力-容量关系（EDPVR）。采用二次拟合确定ESPVR和PRSW，采用指数拟合计算EDPVR。

药物动力学-他达拉非和沙格列汀

通过对沙格列汀和他达拉非的尤卡坦小型猪的单独一组农场猪进行专门的药代动力学研究，确定了这两种治疗的剂量。沙格列汀以10、15或30 mg·kg的剂量口服⁻¹在给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8和24小时收集的血浆中评估药物水平和DPP‐4活性。剂量为10 mg·kg⁻¹在24小时内对DPP-4活性产生至少85%的抑制作用。HF‐SAX组随后获得的稳态谷值证实，10 mg·kg⁻¹每天一次的沙格列汀剂量保持了至少85%的DPP-4活性抑制。口服他达拉非，剂量分别为1、3和8 mg·kg⁻¹在口服给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、24、48和72小时采集血样。每种剂量水平连续3周，每隔7天给同一研究动物服用一次。虽然尚未建立血浆浓度与疗效的直接关系，但他达拉非的总血浆浓度为55 ng/mL（≈90%体外酶抑制）是临床开发的合理药效学目标。20建立了血浆他达拉非水平的模型，剂量为2 mg·kg⁻¹2次/天（总计4 mg·kg⁻¹·天⁻¹)在所有动物中确认血浆稳态谷浓度>50 ng/mL时，选择。

经胸M型和二维斑点追踪超声心动图

在特拉唑/甲苯噻嗪镇静（2.25/1.12 mg·kg）下对动物进行经胸超声心动图检查⁻¹)如前所述，捆扎6个月后，仰卧/右侧位。17,18,19使用带有2.5 MHz换能器的GE Vivid I超声波系统在中毛细血管水平记录短轴二维M型图像，并使用GE EchoPac软件离线执行所有分析。LV室尺寸包括LV舒张内径（LVIDd）、LV收缩内径、LV壁厚（LV收缩壁厚；LV舒张壁厚，LV WTd）和室间隔壁厚（室间隔收缩壁厚，IVS WTs；室间隔舒张壁厚（IVS WTd））根据M模式记录计算得出。相对壁厚（归一化为LVIDd）计算为（LV WTd+IVS WTd）/LVIDd×1000。从心尖4腔和短轴2维视图（在二尖瓣和心尖水平获取）生成LV和隔膜的六个节段，并取其平均值，以确定纵向、径向、，以及使用二维散斑跟踪的3个心脏周期的周向。17,18,21扭转计算为二尖瓣和心尖收缩期末旋转（度）之间的差异，并按上述左室肥厚（壁厚）和舒张末期室长进行标准化。17,22

心肌细胞形态和功能测定

如前所述，从离体心脏的左心室楔形物中酶分离左心室心肌细胞。16,23与[Ca同时监测心肌细胞收缩活性的实验²⁺]_我使用IonOptix钙和收缩记录系统（马萨诸塞州米尔顿市IonOptex）在34°C至36°C下进行。用fluo-4/AM（5μmol/L fluo-4AM，10分钟，40–60分钟洗涤）负载肌细胞，并用含有（mmol/L）：135 NaCl，5 KCl，2 CaCl的生理盐水溶液过度溶解₂，1氯化镁₂, 10d日葡萄糖，10 HEPES，1 NaHCO3，pH 7.4，NaOH。使用电场刺激（S48；Grass Instruments，Warwick，RI）诱导动作电位（0.25、0.5和1 Hz），铂电极放置在镀液边缘。动作电位诱导钙²⁺瞬变和L_秒使用Ionwizard 6.3软件（IonOptix）对缩短进行离线分析，并评估以下参数：（1）Ca²⁺瞬态振幅（ΔF/F₀，其中F₀是Ca之前的荧光²⁺瞬态和ΔF=F_峰值−F₀); （2） 舒张肌节长度；和（3）缩短幅度（L₀−L），其中L₀是舒张期肌节长度，L是缩短最低点的肌节长度。获得了4到6个连续稳态瞬态值，并对其进行平均，以获得每个电池每个参数的单个平均值。为了进行细胞形态测量，将心肌细胞培养在钙中²⁺添加1 mmol/L EGTA和20 mmol/L2，3-丁二酮一肟的无盐生理盐水。获得了透射光图像（1024×1024像素，每像素0.22μm），长度和宽度定义为垂直于（长度）和平行于（宽度）肌节条纹的最长内部尺寸。

蛋白质水平

如前所述，使用蛋白质印迹分析测定蛋白质水平6,16,19,24在含有150 mmol/L NaCl、10 mmol/L-Tris pH 7.4、1 mmol/L-EDTA、1%Triton X‐100和蛋白酶/磷酸酶抑制剂（Halt，Thermo Scientific）的缓冲液中。超声处理后，裂解物在17000℃下离心克持续10分钟以去除不溶性物质，然后通过Bradford分析（Bio‐Rad）测定样品浓度。在转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜之前，在10%SDS‐PAGE凝胶上运行SDS加载缓冲液中等量的蛋白质。在10%脱脂乳中阻断一级抗体后，Akt（60 kDa；细胞信号技术，1:500）、磷酸化Akt（60 kDa，Ser 473；细胞信号技术，1:500）、ERK1/2（42和44 kDa；细胞信号技术，1:500）、磷酸化ERK1/2（42和44 kDa，Thr 202/Thr 204；细胞信号技术，1:500）、SAPK/JNK（46 kDa；细胞信号技术，1:500），磷酸化-SAPK/JNK（46和54 kDa，Thr 183/Thr 185；细胞信号科技，1:500，将腺嘌呤核苷酸转位酶‐1/2（33 kDa；Santa Cruz，Sc‐9299，1:1000）、电压依赖性阴离子通道（31 kDa，Abcam，ab14734，1:1000。然后将适当的碱性磷酸酶结合二级抗体（细胞信号，1:1000）涂在膜上，然后使用化学荧光在Bio-Rad凝胶Doc XR上成像（GE Healthcare Life Sciences）。

心房/BNP和神经肽Y（NPY）血浆水平

如前所述测量血浆心钠素（ANP）和BNP。25,26,27血液被吸入EDTA管并冷却，直到750离心克在4°C下保持10分钟。将1毫升血浆放入12×75‐mm的聚苯乙烯管中，冷冻直至分析。使用C‐18 Bond Elut药筒提取1毫升血浆。在用4 mL 100%甲醇和4 mL水清洗药筒后，施加血浆，并用2 mL生理盐水、6 mL水和1 mL 100%甲醇再次清洗药筒。用2 mL 75%甲醇和1%三氟乙酸洗脱ANP。将洗脱液在Savant快速真空吸尘器中干燥/浓缩过夜，并重新悬浮在300μL分析缓冲液中。将100微升标准品和样品与100微升稀释（1:150 000）的抗人ANP（凤凰药业，加利福尼亚州山景城）在4°C下培养。18小时后，100μL（10000计数）I¹²⁵添加标记的ANP并在4°C下培养。培养18小时后，向所有样品中添加第二抗体，以分离游离和结合部分。对样品进行离心，抽吸游离部分，并在γ计数器上对结合部分进行计数。生成标准曲线并用于计算未知样品的浓度，以pg/mL为单位报告。标准曲线的范围为2至500 pg/mL。分析间和分析内变异性分别为9%和6%。64 pg的回收率为81±2%。与N‐ANP、BNP、C型利钠肽（CNP）、内皮素和肾上腺髓质素的交叉反应性<1%。

用2 mL 90%甲醇和1%三氟乙酸从药筒中洗脱BNP。样品在Savant Speed Vac浓缩器上干燥。将洗脱液干燥并在300μL测定缓冲液中重新配制。本试验所用的放射免疫分析法是凤凰药业（加州山景城）的一种非平衡分析法，使用对人、大鼠或犬BNP的抗体。100微升标准品或样品与100微升稀释抗体在4°C下孵育18至24小时。孵育后，10 000次碘（I¹²⁵)添加BNP并在4°C下培养。孵育18小时后，向所有样品中加入100μL第二抗体（山羊抗兔）和100μL正常兔血清，以分离游离和结合部分。在1.5小时室温培养后，对样品进行离心，抽吸游离部分，并在γ计数器上对丢弃和结合部分进行计数。生成标准曲线并用于计算未知样品的浓度，以pg/mL为单位进行报告。标准曲线的范围为0.5至128 pg/mL，回收率为73%，组间和组内变异性分别为11%和7%。与ANP、CNP或内皮素-1、2、3无交叉反应。

NPY以类似于BNP的方式洗脱。在500μL分析缓冲液中重新悬浮后，将100μL标准品和未知样品与100μL兔抗人NPY在4°C下孵育过夜。培养18小时后，100μL I¹²⁵添加标记抗原并在4°C下培养过夜。标准曲线的范围为5至1280 pg/mL，回收率为78%，批内变异性为10%。与ANP、BNP或CNP无交叉反应，与人类NPY和肽YY无100%交叉反应。

cGMP‐PKG‐PDE5活性和蛋白质水平

如前所述，使用商业EIA试剂盒（Amersham）检查快速冷冻LV样本的心肌cGMP水平。6,24LV样品在6%三氯乙酸中匀浆，离心，并用水饱和乙醚提取。将水相转移、冷冻干燥，并将颗粒重新悬浮在200μL溶解缓冲液中。用20μL乙酰化试剂对溶解的样品进行乙酰化，然后在4°C的96孔板中用100μL抗血清培养每个样品的50μL。2小时后，添加100μL稀释共轭物，并在4°C下培养1小时。洗涤后，立即添加200μL室温平衡酶底物（四甲基联苯胺），并在室温下摇晃培养30分钟。通过分光光度法在630nm处对颜色进行量化，并通过Bicinchonic acid法（Pierce）测量的总蛋白浓度对cGMP水平进行归一化。

在存在cGMP和ATP的情况下，在冷冻LV样品中检测体外PKG活性，允许使用前面描述的比色分析试剂盒（Cyclex）磷酸化结合底物。6,24每个样品中的10微升（30μg蛋白质），包括PKG阳性对照和90μL含有cGMP和ATP的激酶反应缓冲液，在30°C的96孔板中培养30分钟。洗涤后，加入100μL辣根过氧化物酶结合检测抗体（10H11），并在室温下培养。1小时后，清洗每个样品，并在室温下用100μL显色底物四甲基联苯胺孵育。10分钟后，向每个孔中添加100μL停止溶液，并通过分光光度法在450/540 nm的双波长下量化颜色。

如前所述，通过荧光偏振分析（分子探针）评估体外PDE5活性。6,24LV样品在裂解缓冲液（细胞信号传递）中均匀化，每个样品的1μL（3μg）与19μL含有1 mmol/L二硫苏糖醇和200 nmol/L cGMP的反应缓冲液在室温下孵育。1小时后，添加60μL固定化金属离子亲和力基荧光偏振结合溶液，并培养2小时。用分光光度法在485nm处测量荧光偏振。

DPP‐4分析

DPP‐4活性在25°C下进行测量，并使用岛津UV1650PC紫外/可见分光光度计和岛津6细胞CPS温度控制样品输送系统进行监测。1‐mL分析的化学成分包括：500μL 2X ATE（104 mmol/L ACES、104 mmol/L Tris和208 mmol/L-乙醇胺，用5 mol/L HCl调节pH至7.4）、500μL 2 mmol/L底物（Gly‐Pro‐第页硝基安乃近）和50μL血清或血浆。使用热灭活血清或血浆进行类似的阴性酶对照。在相同的缓冲液和测量条件下，使用连续2倍稀释液建立标准曲线第页硝基苯胺（800μmol/L~3.13μmol/L产品）。

线粒体分离，肿胀，钙²⁺滞留能力和呼吸

如前所述，分离心脏线粒体和细胞溶质部分。16,19简言之，使用Dounce均质器在含有250 mmol/L蔗糖、10 mmol/L-Tris pH 7.4和1 mmol/L-EDTA的缓冲液中均质LV组织。然后在1000℃下离心匀浆克5分钟沉淀细胞核和未破碎的细胞/碎片。然后将上清液以10000离心克将线粒体颗粒化10分钟，然后在无EDTA的均质缓冲液中洗涤两次。线粒体肿胀²⁺保留能力和呼吸程序如前所述。16,19简单地说，心脏线粒体被重新悬浮在含有（mmol/L）：120 KCl，5 KH的缓冲液中₂人事军官₄和10 Tris pH 7.4，线粒体蛋白通过Bradford分析定量。通过添加CaCl在0.2 mg/mL线粒体中诱导肿胀₂（10–100μmol/L），并在520 nm处进行分光光度测定。在添加Ca之前，用1μmol/L MPT抑制剂环孢霉素-A预孵育线粒体5分钟，证实线粒体通透性转换（MPT）孔负责肿胀反应²⁺.对于Ca²⁺用5 mmol/L琥珀酸、20μmol/L EDTA和1μmol/LCa激发0.1 mg/mL线粒体的保留容量²⁺将‐green 5N（Life Technologies）加入悬浮液中，并对其进行荧光监测（500ex，530em）。5μmol/L CaCl的顺序脉冲₂然后每分钟添加一次，直到MPT孔诱导Ca产生的荧光大幅增加²⁺检测到释放。在添加1 mmol/L MgCl的缓冲液中使用克拉克型电极测量线粒体耗氧量₂以及5 mmol/L谷氨酸和5 mmol/L苹果酸（复合物I）或10 mmol/L-琥珀酸（复合物质II）。向试管中添加0.125 mg/mL线粒体后，记录状态2（静息状态）。通过向反应混合物中添加0.2 mmol/L ADP来启动状态3。然后将寡霉素（1μmol/L）添加到悬浮液中以诱导状态4。然后根据State3/State2和State3/State4比率确定呼吸控制。

组织学和免疫组织化学

左心室的横截面采用福尔马林固定，石蜡包埋，并按照之前发表的方法进行染色以评估胶原蛋白。16,19简单地说，使用Picrosirius红色染色法对总胶原蛋白进行可视化，并使用Image‐Pro Plus分析软件（MediaCybernetics，6.2版，马里兰州贝塞斯达）对4个不同区域/动物的胶原蛋白进行量化，并以染色面积百分比表示。

心脏重塑

HF‐TAD组的体重显著增加；因此，心脏和肺形态测量值根据体重进行了标准化，并在表中列出1在所有主动脉结扎组中，无论接受何种治疗，整体心肌肥厚的程度都相似。与CON相比，仅在HF组观察到肺重量：体重比增加（表明肺充血）。肺重量：重量比与HF-TAD和HF-SAX组的CON动物相似，表明这些治疗对预防HF的临床症状有效。

CON、HF、HF‐SAX和HF‐TAD组左心室的代表性组织学切片如图所示2A.与CON相比，HF动物的总胶原蛋白水平（Picrosius红色染色；表示为LV染色的面积百分比）显著增加，表明纤维化加剧（图2B） ●●●●。用沙格列汀或他达拉非治疗可防止主动脉结扎诱导的LV胶原含量增加。与CON动物相比，HF中循环血浆NPY水平增加（图2C） ●●●●。回归线显示的累积组数据表明，LV胶原含量与NPY呈正相关（图2D） ●●●●。沙格列汀和他达拉非均能减弱血浆NPY水平升高和NPY相对于胶原蛋白的右移（图2C和​和2D）。2D） ●●●●。纤维化重塑与Akt、ERK或SAPK/JNK信号的任何变化无关，因为检测到各自的蛋白磷酸化水平没有差异（图2E和​和22F） 。

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图2

左心室胶原沉积。A、 红染黑星的代表性组织切片低压显示肝纤维化加重高频组与相比反对的论点.放大倍数：×40。B、 沙格列汀和他达拉非均能阻止主动脉环扎诱导的总胶原沉积增加(*P（P）<0.05与反对的论点). C、 增加NPY（净现值）中的级别高频与相比反对的论点动物在高频‐SAX公司和高频‐塔德组(*P（P）<0.05与反对的论点). D、 线性回归显示总胶原蛋白和NPY（净现值）萨格列平和他达拉非均减弱了高频动物。E、 左心室Akt，ERK公司、和SAPK公司/JNK公司主动脉结扎6个月后的蛋白质水平。Akt的活化蛋白水平（以磷酸化蛋白与总蛋白的比率表示）没有差异，ERK公司，或SAPK公司/JNK公司在主动脉结扎动物中，与控制器组。F、 总Akt和磷酸化Akt的代表性Western blot，ERK公司1/2，和SAPK公司/JNK公司蛋白质水平。CON表示控制；ERK，细胞外信号调节激酶；心力衰竭；左心室；神经肽Y；SAX，沙格列汀；TAD，他达拉非。

通过超声心动图评估左室形态支持我们的尸检数据（表2). 主动脉环扎增加了舒张壁厚度，主要是在室间隔壁（IVS WTd），但与CON相比，无论何种治疗，都没有改变左室舒张内径（LVIDd）。所有主动脉结扎组的相对壁厚（归一化为LVIDd）也显著升高。总之，这些发现反映了向心性肥厚重塑。

分离的心肌细胞形态与我们的尸检和超声检查结果基本一致（表1，CON:n=6只动物，180个细胞；HF:n=7只动物，209个细胞；HF-SAX：7只动物，210个细胞；HF‐TAD:n=8只动物，198个细胞）。与CON组相比，HF和HF‐TAD动物的细胞宽度显著增加，HF‐的TAD动物细胞长度也增加。与CON相比，HF和HF‐TAD中观察到的长宽比下降反映了一个典型的向心性肥大的细胞指标。与CON组相比，HF-SAX组动物的细胞宽度、长度和长宽比相同。

收缩功能

静息血流动力学和左心室功能数据如表所示三（典型的压力-体积回路如图所示三). 所有组的心率和收缩末压均相同。与CON相比，HF和HF‐TAD组的收缩末期容积均降低，HF‐SAX动物的收缩末期容积保持不变。所有组的左心室射血分数和卒中容积相等，表明在存在HF临床标志物（即肺充血，HFpEF的标志性特征）的情况下，静息时收缩功能保持不变。与之前在我们的猪模型和人类HFpEF中的观察结果类似，1,2,23与CON组相比，HF组动物的左心室收缩力（以ESPVR和PRSW测量）显著增加。他达拉非不能阻止主动脉结扎诱导的左室收缩力增加，事实上，他达拉非使PRSW增加到HF组观察到的水平以上。Saxagliptin部分减弱了这种反应，因为ESPVR显著低于HF和HF‐TAD组，PRSW值是主动脉束组中最低的。

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图3

单个代表性P-V回路反对的论点（A） ，高频（B） ，高频‐SAX公司（C） 、和高频‐TAD公司（D） 动物。CON表示控制；EDPVR，舒张末期压力-容积关系；ESPVR，收缩末期压力-容积关系；心力衰竭；P‐V，压力‐体积；SAX，沙格列汀；TAD，他达拉非。

我们还检测了细胞缩短（CON:n=6只动物，15个细胞；HF:n=7只动物，24个细胞；HF-SAX:n=8只动物，18个细胞；Ff-TAD:n=5只动物，11个细胞）和钙瞬变（CON:n=4只动物，10个细胞在分离的LV心肌细胞中，起搏频率增加（0.25、0.50和1.0 Hz）。CON组的典型缩短和钙瞬变说明了我们的实验范式，如图所示4A.负缩短频率关系，HF的细胞特征，28在HF组与CON组动物的绝对长度比较中观察到（图4B类；组×起搏相互作用）和相对于0.25 Hz（图4C类；组×起搏交互作用）。沙格列汀和他达拉非均能阻止主动脉结扎诱导的负缩短频率关系。然而，在所有起搏频率下，HF‐TAD组的绝对缩短值均显著低于CON水平，在0.5 Hz和1.0 Hz时，HF­SAX组的绝对短缩值均显著降低。钙瞬态振幅平行下降（图4D；组×起搏相互作用）。

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图4

细胞缩短/延长对心肌细胞频率的依赖性(反对的论点：n=6只动物，15个细胞；高频：n=7只动物，24个细胞；高频‐SAX公司：n=6只动物，18个细胞；高频‐TAD公司：n=6只动物，11个细胞）和钙瞬变(控制器：n=4只动物，10个细胞；高频：n=7只动物，20个细胞；高频‐SAX公司：n=6只动物，13个细胞；高频‐TAD公司：n=6只动物，9个细胞）。A、 在0.25、0.5和1.0 Hz时，从反对的论点小组展示实验设计。B和C，在高频组与相比反对的论点从绝对值（B，RM方差分析组×起搏相互作用，P（P）<0.05; *P（P）与所有组相比<0.05，^† P（P）<0.05反对的论点与高频‐TAD公司)和相对透视（C，归一化为0.25 Hz，RM方差分析组×起搏相互作用，P（P）<0.05*P（P）<0.05高频与所有组相比，^‡ P（P）<0.05控制器与高频). D、 钙[Ca²⁺]_我瞬态振幅（ΔF/F₀)年减少高频‐TAD公司与0.25‐Hz起搏频率下的所有组相比(RM方差分析组×起搏相互作用，P（P）<0.05; *P（P）<0.05高频‐TAD公司vs所有组）。E和F，以绝对（E）和相对（F；归一化为0.25 Hz）舒张肌节长度表示的细胞延长对心肌细胞频率的依赖性。撒格列汀保持正常的舒张肌节长度，随着心脏起搏频率的增加，舒张肌节明显缩短高频和高频‐TAD公司组与相比反对的论点(RM方差分析，组×起搏交互，P（P）<0.05; *P（P）<0.05高频与所有组相比，^† P（P）<0.05反对的论点与高频‐TAD公司,^‡ P（P）<0.05高频与反对的论点和高频‐SAX公司;^§ P（P）<0.05高频‐SAX公司与高频‐TAD公司). CON表示控制；心力衰竭；SAX，沙格列汀；TAD，他达拉非。

主动脉束带改变了左室力学，表明收缩功能受损。图中显示了说明整体纵向应变的典型二维散斑跟踪超声心动图图像5A通过​至5D5D并证明整体纵向应变的减少（图5E） 与CON相比，HF组出现了这种效应。HF‐SAX动物也出现了这种效果。与图中显示的心肌细胞缩短数据一致4B、 与所有其他组相比，HF‐TAD组的整体纵向、周向和径向应变降低，收缩力学受损程度更大（图5E） 。扭转保持不变（图5F） 或增加（当归一化为心脏重塑时；图5G隔板，图5与CON动物相比，HF中的H-LV）。在HF-TAD和HF-SAX动物中观察到HF组正常扭转的增加均被阻止。

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图5

整体收缩低压应变和扭转。A至D，代表2夏令时个人超声心动图反对的论点（A） ，高频（B） ，高频‐SAX公司（C） 、和高频‐TAD公司（D） 在所有主动脉带组中，突出显示的动物整体纵向峰值收缩应变降低（并且在更大程度上高频‐TAD公司). E、 两组患者的整体纵向收缩末期应变均降低高频和高频‐SAX公司与反对的论点组。HF的这种作用在高频‐TAD公司动物。收缩末期的整体周向和径向应变在高频‐TAD公司与所有其他组相比的动物(*P（P）<0.05与反对的论点,^† P（P）<0.05与高频和高频‐SAX公司). F到H，LV扭转。各组（F）的绝对扭转没有差异。扭转标准化为腔室长度和隔膜（G）或低压（H） 重塑增加高频动物与反对的论点。心力衰竭的这种影响在高频‐TAD公司和高频‐SAX公司组(*P（P）<0.05与反对的论点,高频‐TAD公司、和高频‐SAX公司)2DST表示二维散斑跟踪；CON，控制；心力衰竭；左心室；SAX，沙格列汀；TAD，他达拉非。

左室舒张功能

与CON组相比，HF和HF‐TAD组动物的左室舒张末期容积减少，HF­SAX组无变化（表三). 与所有其他组相比，HF‐TAD组的舒张末期压力虽然不被视为病理性（>15 mm Hg），但显著升高。与CON组相比，HF组的EDPVR斜率显著增加，表明整体左心室舒张功能障碍。沙格列汀和他达拉非均不能阻止主动脉环扎引起的舒张功能障碍。

作为舒张功能的细胞替代物，研究了静息心肌细胞肌节长度随刺激频率增加的变化。起搏引起的绝对值显著下降（图4E；组×起搏相互作用）和相对于0.25 Hz（图4F；HF和HF‐TAD组与CON组相比，观察到舒张肌节长度。这一发现表明舒张舒张功能受损，通过沙格列汀治疗得以预防。

图中显示了说明早期和晚期峰值纵向舒张应变率的典型二维斑点追踪超声心动图图像6A至​到6D。6D.与CON动物相比，HF组LV整体纵向应变率降低（图6E） 说明与舒张早期充盈相关的左室力学与我们的左室和细胞数据一致。用他达拉非治疗后，早期舒张力学受损程度更大，明显表现为整体纵向收缩力降低（图6E） 和顶端周向应变率（图6F） 与CON和HF动物相比。Saxagliptin阻止了HF组观察到的舒张早期LV力学的改变，在某些情况下也有所改善。HF‐SAX组的整体纵向应变率下降减弱（图6E） ，和顶部周向应变率（图6F） 和解捻（图6G） 高于正常CON水平。

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图6

左心室舒张早期和晚期力学。A至D，代表2夏令时个人超声心动图反对的论点（A） ，高频（B） ，高频‐SAX公司（C） ，以及高频‐TAD公司（D） 动物强调早期：晚期全球纵向舒张应变率比率下降高频和高频‐TAD公司动物与反对的论点这种主动脉束带引起的低压舒张力学，暗示舒张功能障碍，在高频‐SAX公司组。E、 舒张早期的整体纵向应变率在高频组，并且在更大程度上高频‐塔德动物与反对的论点。HF的这种影响在高频‐SAX公司组(*P（P）<0.05与反对的论点,^† P（P）<0.05与高频,^§ P（P）<0.05与高频‐SAX公司). F、 与对照组相比，HF对心尖周向舒张早期应变率无影响反对的论点动物。该平面内的机械运动在高频‐TAD公司组中增加了高频‐SAX公司组(*P（P）<0.05与反对的论点,^† P（P）<0.05与高频,^‡ P（P）<0.05与高频‐TAD公司). G、，低压舒张早期解捻增加高频‐SAX公司动物(*P（P）与所有组相比<0.05）。H、，低压整体纵向舒张晚期应变率。Saxagliptin可防止舒张末期整体纵向应变率增加高频和高频‐TAD公司组(*P（P）<0.05与反对的论点,^† P（P）<0.05与高频‐SAX公司). 2DST表示二维散斑跟踪；CON，控制；心力衰竭；左心室；SAX，沙格列汀；TAD，他达拉非。

舒张末期的整体纵向应变率如图所示6H.与CON相比，HF和HF‐TAD动物在舒张末期的整体纵向应变率增加。萨克列汀阻止了这种增加，因为舒张末期纵向应变率降低到CON水平以下。

作者感谢David Kass博士、Melissa Cobb博士、Thomas Reilly博士、Charles Wiedmeyer博士、Anne Gibson和Emily Dehn博士的大量技术贡献和咨询，这些对完成研究至关重要。我们也要感谢戈尔慷慨赠予我们主动脉结扎手术中使用的血管Gore‐Tex套管。