背景

药物开发过程中消耗的主要原因之一是药物引起的肝毒性。在细胞单层或3D细胞模型上描绘受试化合物的肝毒性包括测量与肝毒性相关的几个参数在体外，任何药物发现运动中的关键一步。
检测对细胞活力的影响可以全面衡量肝毒性，但不能揭示药物毒性的具体机制。通过评估药物对特定终点的细胞模型的影响，如活性氧生成、脂肪变性和磷脂变性、胆汁淤积、纤维化、线粒体毒性和谷胱甘肽耗竭，可以分析机械毒性，这些是药物诱导肝毒性的关键机制。
在传统的单层模型中，HepG2细胞（和HepaRG细胞）经常被用来评估测试化合物的肝毒性作用。
体外3D细胞培养模型可以更好地再现复杂情况体内微环境比传统的2D单层模型。我们可以使用三维细胞培养模型（使用HepG2）、OpenLiver™HepaRG三维细胞模型、OpenLive™HepaRLG NP肝细胞/非实质细胞共培养三维细胞模型和原始人类肝细胞三维细胞模型）进行肝毒性检测。
可以调整肝毒性终点以满足特定的客户要求。

协议

仪器	分子器件ImageExpress微共焦
分析方法	高含量筛选
毒性标记	细胞活力细胞凋亡活性氧生成脂肪增多症和磷脂增多症胆汁淤积症纤维化线粒体功能谷胱甘肽消耗
可用的单元模型	单层格式：HepG2、HepaRG、原代人肝细胞 3D细胞培养模型格式： HepG2型 OpenLiver™HepaRG 3D细胞模型 OpenLiver™HepaRG NP肝细胞/非实质细胞共培养3D细胞模型原代人肝细胞三维细胞模型原代啮齿动物肝细胞三维细胞模型可根据要求定制型号
供试品浓度	10点化验（可定制浓度）单点分析
副本数	每个浓度重复3次
时间点	单层模型：24小时、48小时 3D细胞模型：24小时、48小时、7天、14天根据要求提供其他时间点
质量控制	0.5%二甲基亚砜（车辆控制） L-丁硫氨酸亚砜胺、鱼藤酮（阳性对照）
试验品要求	150µL二甲基亚砜溶液，达到100x C_最大值（200倍最高浓度以保持0.5%二甲基亚砜）或同等数量的固体化合物。
数据交付	最小有效浓度（MEC）和AC₅₀每个测量参数的值剂量反应曲线，归一化为C的热图_最大值（如果可用）车辆和阳性对照结果的统计显著性评估

图1。通过对乙酰氨基酚处理的OpenLiver HepaRG/NP 3D细胞模型的高内容成像获得的Z堆栈最大Z投影。红色：线粒体功能探针；绿色：细胞活性探针

图2。在Visikol OpenLiver HepaRG/NP 3D模型中，用醋氨酚（醋酸盐）加或不加胆汁酸介质（+/-BA）治疗7天，表明线粒体健康的剂量-反应曲线。

图3。Visikol OpenLiver HepaRG/NP 3D球体用载体或ALK-5抑制剂预处理1 h，然后用100 nM TGF-β诱导纤维化48 h。蓝色DAPI，绿色活力指示剂，红色泛胶原蛋白。

图4。Visikol OpenLiver HepaRG/NP 3D球体用载体或ALK-5抑制剂预处理1 h，然后用100 nM TGF-β诱导纤维化48 h。对每种情况下的胶原蛋白荧光强度（A）和胶原蛋白体积分数（B）进行量化。