• 肿瘤滤过性免疫细胞（如CD3/CD4/CD8/CD45+T细胞）的存在与癌症患者更好的预后相关
• 典型的分析包括肿瘤组织样本的切片和免疫组织化学（IHC）标记T细胞的处理。这种方法效果很好，但吞吐量很低，成本很高，因此不适合用于筛查。
• 体外免疫细胞浸润的测定：以2D测定形式监测治疗与免疫细胞的相互作用（例如Boyden腔、划痕测定）。这些模型不能复制组织微环境，因此不能充分模拟体内免疫细胞浸润研究的条件。
• 3D细胞培养模型在生物学上更具相关性，可以对旨在促进免疫细胞对肿瘤细胞反应的免疫疗法进行适当评估
• 该试验可用于评估化合物和治疗性抗体对免疫细胞浸润的影响，或筛选免疫治疗中使用的免疫细胞群。

1. 3D细胞模型，直径约200μm。
2. 试验化合物处理（如适用）
3. 以4000个细胞/孔接种PBMC
4. 24小时后固定
5. Nuclei标有DAPI。选定CD标记物的免疫标记
6. 组织清除用于渲染透明的3D细胞模型
7. 在井板上进行高含量成像
8. 对图像进行分析，以通过CD表达量化细胞总数和浸润免疫细胞总数

图1。在激活和未激活免疫细胞存在的情况下，通过肿瘤球体的高内容成像获得Z堆栈的最大Z投影。数据通过自动图像分析进行量化，以计算细胞总数和浸润免疫细胞的数量。

这段视频描述了如何在3D中测量免疫细胞浸润。将每个免疫细胞映射到其在3D细胞模型内的位置，并测量到边界的距离。深色线条表示靠近表面的细胞，橙色/黄色线条表示深入内部的细胞。

图2。代表性数据显示了在肿瘤球体边界内检测到的CD3+细胞的观察数量，以及肿瘤球体中CD3+淋巴细胞计数的分解。